II. — AGGLUTINATION DES RICKETTSIES

Elle consiste à rechercher les anticorps spécifiques, dans le sérum suspect, anticorps qui agglutinent les rickettsies quand on les met en présence.

C'est à WEIGL que l’on doit les premières recherches sur cette méthode de diagnostic.

TECHNIQUE. — WEIGL employa comme antigène des germes venant de l'intestin de pou infecté, c'est-à-dire une culture pure de rickettsies. La préparation en était assez difficile : elle est abandonnée.

Actuellement GIROUD utilise le poumon de lapin ou de souris broyé, mis en suspension dans de l’eau physiologique formolée ; le tout étant conservé à la glacière.

On dispose de sept tubes à hémolyse dans lesquels on fait des dilutions de sérum allant du 1/10 au 1/640, un huitième tube servant de témoin. On ajoute l’antigène. On prend ensuite une goutte dans chaque tube, que l’on dépose sur une lame placée dans une boîte de Pétri contenant un peu d’eau. Une goutte de suspension microbienne sert de témoin. L'agglutination s'opère à la température du laboratoire. On laisse ainsi 12 heures à 18 heures au contact : puis on sort la lame, on dessèche, on fixe à l'alcool méthylique et on colore avec la solution suivante :

Eau distillée bouillante : | cc.

Solution Giemsa : V gouttes.

Après une heure, on passe successivement à l'alcool absolu, au xylol, enfin à l’eau. I] ne reste plus qu’à examiner au microscope.

Les rickettsies peuvent être agglutinées :

En masse +++ :

En paquets importants ++ :

En paquets de 20 éléments + ;

En paquets de moins encore +.

RÉSULTATS. — Cette réaction est positive du sixième au huitième jour après le début de la maladie. Elle est donc assez précoce. Elle est généralement positive au :

1/649 pour le typhus exanthématique ; 1/80 pour le typhus murin.

Elle est au début spécifique. Puis, après le sixième jour, le même sérum peut agglutiner à un même taux les rickettsies des deux types. Éa spécificité revient ensuite. :

Pour faire la différence, GIROUD est partisan de chauffer le sérum à 56° pendant trente minutes. Cela a un double effet :

— Augmentation de l’activité vis-à-vis des rickettsies ; — Diminution de la spécificité.

Donc, pour obtenir de bons résultats avec cette réaction, il faudra :

— Préciser le moment de la maladie où a été prélevé le sérum :

— [Indiquer si le sérum a été chauffé et conservé quelques mois.

Il est d'autre part intéressant de connaître la courbe des agglutinines anti-rickettsies. GIROUD l’a étudiée en injectant au lapin une dose de virus correspondant à 0 gr. 50 de poumon de lapin broyé, riche en rickettsies et dilué dans 8 cc. d'eau physiologique. Il utilisa les voies intrapéritonéale et sous-cutanée. Il tira comme conclusions quel les agglutinines n’apparaissaient jamais avant 96 heures ; elles subissaient alors un clocher important, se stabilisant à un taux assez élevé, puis redescendaient progressivement jusqu'au quatrième mois, pour disparaitre.

INTÉRÊT. — En cours de vaccination, en milieu épidémique, il faut faire l’agglutination avant et après, car, avant la vaccination, on trouve des agglutinations à des taux

peu élevés, de l’ordre du 1/10 au 1/40.

Le taux maximum est atteint après la deuxième injection : l’agglutination peut se faire alors au 1/640.

D'autre part, au cours d'une affection typhique sévère, le taux est beaucoup plus élevé, puisqu'il monte jusqu ‘au 1/1.500 et 1/2.500. Il redescend progressivement après la maladie.

INCONVÉNIENTS. — Cette réaction permet donc un diagnostic assez précoce ; mais nous avons vu qu'au bout du quatrième mois elle n'avait plus lieu chez un typhique. Son intérêt épidémiologique en est, de ce fait, un peu diminué, car les diagnostics rétrospectifs ne sont pas possibles au delà de quatre mois environ après la maladie.

D'autre part, si dans les cas très nets, elle est d’une interprétation facile, 1l n'en est plus de même dans les cas htigieux, où le résultat est alors un peu facteur d'interprétation personnelle. Seule, une connaissance approfondie de la technique et une grande expérience permettent d’en tirer le maximum d'intérêt.

Il existe, d'autre part, deux tests intéressants permettant des diagnostics rétrospectifs :

— Le test de séro-protection ; — Le test d’'hypersensibilité.

I. TEST DE SÉRO-PROTECTION. — Basé sur le pouvoir neutralisant d’un sérum de typhique vis-à-vis de rickettsies virulentes.

On inocule sous la peau du flanc d’un lapin un mélange de sérum suspect et de rickettsies :

— Si le sérum est normal, le virus ne sera nullement neutralisé et on obtiendra une forte réaction ;

— Si le sérum est celui d’un typhique, le virus, neutralisé, ne provoquera qu'une réaction minime : c'est ce que l'on observera chez les vaccinés, soit en cours de vaccination, soit après, et chez les anciens typhiques.

D'autre part, plus l'infection a été forte, plus le pouvoir neutralisant du sérum est élevé.

D; es

[IL TEST D'HYPERSENSIBILITÉ. — C'est une réaction d'allergie : l'injection intradermique d’antigène tué provoque une réaction locale, chaude et rouge.

Elle est négative après vaccination.

Elle est positive et précoce après une infection bénigne : cette réaction est alors très précieuse, car elle demeure positive pendant plusieurs années.

Elle est tardive et variable après une infection grave, mais persiste également très longtemps.

Ces deux tests permettent des diagnostics longtemps après l'infection : ils restent longtemps positifs.