I. —SÉRUM ANTI-PERFRINGENS
Le premier essai de préparation d'un sérum anti-perfringens a été entrepris par Rosenthal i jH qui, en collaboration avec M. Jourdan, directeur de l'Institut sérothérapique de (irenoble, a injecté à des chevaux des doses progressives croissantes de culture de B. perfringens. Le sérum obtenu n'était ni bactéricide ni agglutinant ; il était faiblement préventif : i ce. de sérum préservait le cobaye contre une dose mortelle de culture.
Au cours de la guerre, l'un de nous s'est attaclié à la préparation d'un sérum anti-perfringens. Les animaux (mouton, chevaux furent immunisés par divers procédés que nous indiquerons ci-après ainsi que les résultats obtenus.
Lu dehors de nous, il convient de citer les travaux entrepris d'une part, en Allemagne, par Klosk 254), d'autre part, en Amérique, par Bru. et Ida Pfutcuktt ijj et par. Bull ij3-.
Klose a préparé un sérum antitoxique et un sérum antimicrobien.
La toxine qu'il a utilisée (filtrat de culture de .i-4 jours en bouillon glucose) tuait le cobaye eu injection intraveineuse à la dose de i ce. 5 à '.\ ce. Il a immunisé un cheval par deux séries d'injections intraveineuses; le cheval a reçu d'abord en ly semai-
SI RO'l UIHAI'II. DES INFECTIONS GAZEUSES -te*'
nés ■>./|i."i ce. de toxine, |>nis s'esl reposé <i semaines ci ;i reçu à nouveau, en 6 semaines, r.780 ce de toxine. Le sérum obtenu était faiblement antitoxique ; il était préventif vis-à-vis de la toxine el de la culture et possédail ;mssi un certain pouvoir ci irai il.
Ainsi, 1 .") rr. i\c sérum protégeail le cobaye contre 3 doses mortelles de culture. L'animal présentait des lésions mais cellesci finissaient par guérir-.
Tous les cobayes traités 2 heures après l'inoculation d'une dose mortelle de culture, étaient sauvés: ceux traités fi heures après l'inoculation guérissaient après avoir présenté de grandes lésions. Ki.osi. n'a pu sauver les cobayes traités 6 heures après l'injection de la culture.
L'auteur a égalemenl préparé un sérum anti-microbien en immunisant un Ane par des injections sons-cutanées de culture de //. perfringehs. En H mois, l'animal a reçu 348 ce. de culture. Les injections étaient suivies de tories réactions : œdème, crépitation locale, élévation de température.
Le sérum neutralisait la culture à égalité : 1/2 ce. de sérum neutralisait 1 > ce. de culture. Il était préventif à la même dose ci curatif à condition d'être injecté •> heures après l'inoculation infectante.
Ki 1.1. cl Pritchett ont immunisé le pigeon et le lapin par des injections répétées de doses croissantes de toxine filtrée. Le sérum de lapin était antitoxique et aiiti-liémotoxique : i'.'i ce. de sérum neutralisait une dose de toxine tuant le pigeon en 8 heures <> ce. .') en inoculation intra-musculaire). La neutralisation de la toxine suit la loi de proportionnalité.
Bi 1.1. a montré que ce sérum antitoxique était préventif vis-àvis de la culture : -t ce., 8 de sérum protégeait le cobaye contre 1 'i ce de culture totale. L'immunité passive persiste pendant •>. semaines environ.
Le sérum arrête les lésions en évolution cl sauve les animaux même lorsque ceux-ci sont traités tardivement, au moment où les lésions sont avancées el l'intoxication générale manifeste.
.Nous avons poursuivi l'immunisation de plusieurs chevaux par des procédés différents.
i° En inoculant la culture totale de plusieurs races pathogènes de B. perfringens .
2° En injectant des doses croissantes de microbes débarrassés de leur toxine par centrifugation et provenant d'un échantillon 1res actif.
3° En inoculant des doses croissantes de toxines.
SÉRUM ANTIMICROBIEN POLYVALENT PRÉPARÉ AVEC DES MÉLAN- GES DE CULTURES TOTALES. — Nous avons d'abord cherché à obtenir un sérum polyvalent en immunisant les chevaux contre quatre races pathogènes de B. perfr ingens, lu cheval a reçu en injections intraveineuses d'abord de faibles doses de corps microbiens lavés (correspondant à 10, 20, 3occ. de culture), puis des doses progressivement croissantes de mélanges de culture totale en bouillon glucose de >l\ à 18 heures (de 100 à 4oocc).
Au hou! de 3 mois, un cheval ainsi traité fournissait un sérum doué de propriétés anti-in/ectieuses relativement faibles; 1/4 de ce. de sérum neutralisai) in vitro 1 ce. de culture. Le sérum était également préventif : 1 4 de ce. protégeait le cobaye contre l'inoculation intra-musrulaire de 1 ce. de culture. Enfin, les propriétés curatives étaient nettes : Sur 8 cobayes inoculés dans la cuisse avec 1 ce. de culture totale el traités 10 heures après l'inoculation par l'injection locale de 3 ce. de sérum, 6 on1 guérij 2 seulement ont succombé.
SÉRUM ANTIMICROBIEN MONOVALENT PRÉPARÉ AVEC DES MICRO- BES DÉBARRASSÉS DE LEUR TOXINE. — Les résultats précédents nous ont incité à poursuivre l'immunisation des chevaux en injectant uniquement des doses croissantes de corps microbiens débarrassés de toxine par centrifugation.
Nous n'avons pins utilisé qu'un seul échantillon de B.perfringens, le pins pathogène que nous possédions.
Ainsi, le cheval 802 a reçu en 11 mois, du 22 mai iQi5 au 1 ■> avril [916, 23 injections intraveineuses; la plus faible dose correspondait à 160 ce. de culture de 24-48 heures en bouillon glucose ; la plus forte, à 1 litre de culture. Les corps microbiens étaient repris dans 200 à l*"» <"r- d'eau physiologique.
Italis ce laps de temps, le cheval reçut une quantité de microbes correspondant à 12 1. 5oo de culture. Les injections de fortes doses provoquèrent à plusieurs reprises des accidents graves : élévation thermique au-dessus de .'^o". œdème persistant des
membres inférieurs, gonflemenl douloureux des articulations, etc. i:,s accidents nous obligèrent même à plusieurs reprises à interrompre l'immunisation du cheval pendant plusieurs semaines.
Le sérum anti-microbien ainsi obtenu étail fortemenl agglutinant. Il agglutinai! à i 2000 l'échantillon ayanl servir à préparer le cheval.
Ce sérum possédai! un pouvoir anti-infectieux beaucoup plus élevé que le sérum polyvalenl préparé avec le mélange des cultures totales. Il neutralisait à 1 200, 1 dose de culture tuanl le éobaye en i!\ à 36 heures en inoculation intra-musculaire (voir tableau XXI ,.
Nous n'avons pu titrer exactemenl faute d'un nombre suffisant de cobayes ses propriétés préventives et curatives. Bornonsnous à signaler ici que ce sérum a donné de bons résultats dans le traitemenl de gangrènes gazeuses déclarées (voir chapitre suivanl 1.
SÉRUM ANTITOXIQUE. — L;i préparation d'un sérum anti-joerfringens anti-toxique est subordonnée à l'obtention régulière
d'une bonne toxine. Le problème comporte d'assez grandes difficultés.
A. — Toxine di B. perfringens
Préparation. — Certains échantillons de B. perfringens (souche Lech..., i58, etc..) nous ont permis d'obtenir une toxine soluble en bouillon Martin glucose à 2 0/00. Il est recommandé de préparer le bouillon Martin avec du bouillon de bœuf que l'on a laissé vieillir quelques semaines à la température du laboratoire. Les cultures de 24 à 48 heures sont, filtrées sur bougie de Chamberland ou, parfois, seulement centrifugées.
Titrage de la toxine (Voir tableau XXII). — La toxine obtenue tuait le cobaye par injection intra-veineuse à la dose de 1 2 à 2cc. La mort était le plus souvent brutale (2 ce. et parfois 1 ce.) ; les animaux présentaient de violentes convulsions et mouraient en quelques minutes par arrêt respiratoire.
Avec les doses plus faibles (1 ce. 1/2 ce), ou quand les cobayes étaient de trop forte taille, la mort ne survenait qu'au bout de quelques heures ou pins tardivement.
0I.VTR1KAIK l'.VRTIK
Tableau XXI. — Sérum anti-perfringens anti-microbien (Cheval Ho ■>)
Pouvoir anti-infectieux pour le cobaye
en inoculations intra-musriilaires .
DOS] s
GOBATES
d.- culture 1 pour témoins ou du mélange culture-sérum *
R.ÉSUJ 1 ITS
Le ig-III-iô
icc culture
■J- 36 heures.
Grosses lésions; survit.
Lésions faibles; survivent
icc culture -f i/5occ sérum. . .
1 cuit. -f" lfo° sép- • • •
1 cuit. 4- 1/100 sér. ■ • •(
Pas de lésions.
1 cuit. -j- 1/200 sér. . . .
1 cuil. 4- 1/200 sér. . . .
Le 6-IV-16
icc culture
7 nuit.
7 nuit.
Fortes lésions; g'ucrison.
7 3 jours.
Œdème ; guérison.
i"1 culture -[- i/2jcc sérum . .
1 cuit. 4- I/25 sér. . . 1 cuit. — i/5o sér.
>Pas de lésions.
7iD
1 cuit. -f i/5o sér. . .
1 cuit. + 1/100 sér. . . 1 cuit. r 1 100 sér. . . '
Œdème léger : guérison.
1 cuit. -f- 1/200 sér. . .
1 cuit. -\- 1/200 sér. . .
* Préalablement abandonné pendant une demi-heure à la température du laboratoire.
SEHOTHEHAHE i » I : S INFECTIONS GAZEUSES
Tarifai XXII. - B. perfringens Titrasre * I « * la toxine.
i on w! ■»
I Vin . ^OOf?1
injecl . veine
d'env. 2k
injecl . veine
,)inii]
ioniin
5min
Mil HIV
vin [US
injection veine
injni. sous la peau
Poids
Dose
-;- en
Poids
Dose
-;- en
Toxine du 3 novembre 1915 1 filtrée»
Toxine du 24 avril 1917 (centrifugée 1
Toxine du 8 mai 1917 icentrifugéel
Toxine du 22 mai 1917 (centrifugée)
malade survit
[Qgl
1 4cc
(',111111 ! (",m in
.)min
i4gr
i/4cc
5 min
,0rain
5min
nuit
25min
2cc
6oh
i5gr
,/4cc
5 min
iZgr
2Cc
(inmin 1 1' 1 5
Ml
Nuit Nuit
33 ï ni VTltll'Mi: PAR I II
2 ce. de toxine sont généralement inoffensifs pour le lapin. Cependant certains animaux i lapins de moins de 2 kys » présentent des troubles graves : dyspnée et parfois des convulsions. Le plus souvent les animaux survivent ; dans quelques cas ils meurent dans la nuit on au boul de quelques jours.
La souris inoculée dans la veine est extrêmement sensible à l'action de la toxine. Elle succombe en quelques minutes à la dose de ï 4 à i/io ce. de culture très jeune, riche en hémotoxines. Les cultures de 48 heures sont déjà beaucoup moins actives : i/4 ce. ne tue plus la souris qu'en 6-12 heures.
En inoculation sous-cutanée, il est nécessaire d'injecter à la souris 2 ce. de toxine pour tuer ranimai. Il se produit alors un œdème humide, verdâtre qui tend à s'escarifier. Encore les grosses souris résistent-elles quelquefois; la «uérison survient après formation d'une escarre humide.
B. — Antitoxine
Nous avons d'abord cherché à immuniser un mouton contre la toxine du B. perfringens. In mouton a reçu en 2 mois, en injections sous-cutanées 278 ec. de toxine. Les plus fortes doses injectées -'•> ce. 1 ont amené la production d'un gros œdème local qui a envahi le poitrail du côté opposé. 1/2 ce. de sérum neutralisait complètement 4 doses mortelles de cultures.
I fltérieurement, nous avons entrepris l'immunisation du cheval. Le cheval 809 a reçu sous la peau de l'encolure, en deux mois et demi et en 9 injections. 2.35o ce. de toxine. La plus faible dose injectée fut de 60 ce. la plus forte de 4o° ce. Les injections étaient régulièrement suivies au bout de 'i!\ heures d'une forte ascension thermique, dépassant régulièrement 3q° et atteignant parfois 4°°- Localement on observait un gros œdème.
L'antitoxine neutralisait la toxine et la culture totale.
Titré sur-cobaye, le pouvoir antitoxique était d'au moins 1 200 (Tableau XXIII).
Le pouvoir anti-infectieux était à peu près équivalent (Tableau XXIV). 1 [ 00 de ce. de sérum neutralisait complètement in vitro 1 ce. oie culture (de 1 à 2 doses mortelles dans l'expérience résumée dans le tableau).
SÉHOTHÉRAPII DES INFECTIONS (JA.ZEUSES
Tableau XXIII. - Sérum antiperfringens antitoxique (Ch.ev.8og)
Pouvoir antitoxique pour le cobaye
en inoculations Intraveineuses.
COBAYES
Poids
DOSl S
de iu\iiic (pour témoins) ou iln mélange tox i h e-s é r ii m *
RÉSl i rATS
7 en 5 min.
f eu 6 "'• Forte dyspnée : y nuit.
Forte dyspnée ; survie.
l'as d'accidents ; survie.
id.
id.
• ' toxi m' i /.'ni1'' sérum
2 tox. -(- i/ioo sér
* Préalablement abandonné pendant une demi-heure à la température du laboratoire.
Le pouvoir antitoxique, titré par l'injection intra-veineuse tl<' la souris, Huns a donné un chiffre extrêmemenl élevé, i ioooo à i f|.oooo de sérum neutralisai t/4 decc.de toxine.
Ce résultat, paradoxal en apparence, s'explique par le t'ait que l;i souris es! surtout sensible aux hémotoxines sécrétées par le
Tableau XXIV. — Sérum antiperfringens antitoxique (Cher. 8og) : Pouvoir antiinfectieux pour le cobaye
Inoculations intra-muscul.i ires
COBAYES
DOS] S
de Cuit un- i pour témoins) ou du mélange culture-sérum
i" culture i/2c<- . . .
[CC culture + 1 2."i'<- sérum.
1 cuit. r 1 5o sér.
1 cuit. + 1/100 sér.
