III. — B. SPOROGENES Mi; u HNiKO] 1 l

Le Ii. sporoyenes est un (les microbes les plus fréquents de la Hore des plaies de guerre. C'esl le principal agent de la fétidité

1 10 |>Kl \|| Mi: PARTIE

des plaies el son pouvoir pathogène n'est certainemenl pas négligeable.

La révision des observations anciennes d'infections gazeuses nous permet de penser que ce microbe avait déjà été rencontré dans les plaies gangreneuses avant la guerre, mais qu'il était resté méconnu.

(Test ainsi que, pour choisir une îles observations les pins

typiques. HaEMIG El SiLBERSCHMIDT { (J J puis SlLBERSCHMIDT ( / / /)

ont décrit, dans deux cas de gangrène gazeuse putride chez l'homme, la présence d'un bacille mobile, sporulé, à odeur désagréable, qui liqnéliait la gélatine, digérait le sérum coagulé et la

caséii t n'était pas pathogène. Les auteurs ont identifié ce

microbe an bacille de l'œdème malin ; il était en effel identique à un échantillon ('tiqueté B. œdematis maligni et conservé' dans la collection de l'Institut bactériologique de Zurich. Nous pensons que les auteurs mit vraisemblablement rencontré le B. sporogenes ei que le principal agenl pathogène de l'infection leur-a vraisemblablement échappé.

P. Ai.hmi.cn i (//o), dans deux cas d'infection gazeuse putride, a isolé un bacille qu'il considère comme identique an « Fâulniserreger » de Grassbergeb ii Scuattenfroh ci quj pourrait être le II. sporogenes ou le H. putrijiens.

Pendant la guerre, Miss Robertson 2#8) a déclaré avoirtrouvé fréquemment, dans la lime des infections gazeuses, un bacille qu'elle a identifié au Ii. œdematis maligni Kocn (sens de v. Hiblek . Nous avons indiqué, en étudiant le vibrion septique, les raisons qui nous Fonl penser que Miss Robertson a rencontré le II. sporogenes.

A l'exemple de Miss Robertson, beaucoup d'auteurs, ci spécialement des auteurs anglais, mil décrit comme Ii. œdematis maligni Koch des germes liés voisins du H. sporogenes.

Ainsi, le liacille décrit par Barger et Dali i /'>'/) esl certainemenl le Ii. sporogenes'.

\)\ w i i Moi \\ i</i mit décrit comme B. œdematis maligni un bacille qui. entre autres caractères, digère le milieu à l'œul de Dorset, a une odeur putride (extremely powerfull and offensive) et liquéfie le sérum coagulé. Il n'est pathogène ni pour le lapin, ni pour le cobaye. Ce germe (qui n'est certainement pas le Yib. septique), possède quelques caractères du B. sporogenes.

I ES «il R0B1 - M S INFEt NOMS GAZE! SES III

Goadbi '•''/ désigne également comme II. oedematis malii/ru Koi ii un bacille qui possède tous les caractères du B. sporo-> gènes. \ uoter entre autres la sporulation rapide, I odeur infecte des cultures, la digestion du sérum coagulé el «lu blanc d'œuf.

Laroi \\> is m Bai mii ■'/'/ considèrenl comme \ ib. septique incontestable un germe qui digère rapidement le cube de blanc d'œuf el le sérum coagulé ; les cultures onl une odeur putride. Ce germe étaii très inconstammenl pathogène; pourtant, certains échantillons tuaienl le lapin el le cobaye avec production de longs filaments à la surface du foie. Il n'esl guère douteux que Lardenxois m Bai mi i. aienl utilisé des cultures impures où le II. sporogenes étaii présent.

Il est possible, enfin, qu'il s'agisse du II. sporogenes dans 1rs travaux de beaucoup d'auteurs qui, au cours de la guerre, faute de pouvoir faire une étude bactériologique complète, on1 parlé du Nil», septique chaque fois qu'ils observaient sur frottis de sérosité la présence de bacilles mobiles e1 sporulés.

En dehors de nous, le B. sporogenes a été retrouvé dans la la flore des plaies et des infections gazeuses par Ch< ukeviti h 1S1 . Distaso(/#7),E. Sacquépéi ■>;<>■ II. Tissu n .'/.'/•< qui le considèrecomme une variété du Vib. septique, H. Henry 2^6'), \ M cher gangrènes pleuro-pulmonaires, 3jg). Miss IIi.mi-i. l'a égalemenl décelé dans quelques cas de gangrène gazeuse (').

Ajoutons que Pfeiffer el Bessai - 8y onl signalé récemment dans la flore de la gangrène gazeuse des bacilles en aiguilles de montre (I hrzeigerbacillen) donl la description correspond tout à lait à celle du II. sporogenes.

Enfin, tout dernièrement, Donaldson et Joyce 3j3) ont décril sous le nom de s Reading bacillus » un germe qui nous parait être égalemenl identique au II. sporogenes.

Nous avons isolé le B. sporogenes une, trentaine de fois, le plus souvent dans des infections gazeuses putrides. Lorsque ce microbe provoque la putridité, il esl tellement abondanl dans les tissus que mui isolement est ,|es plus faciles; par contre, il devienl très difficile de séparer les autres anaérobies auxquels il esi associé el de les obtenir en cultures pures. Même dans les cas où le II. sporogenes se trouve à l'étal d'unités, nu peut encore

1 ' ) 1 .' • 11 1 m 1 un ical i' m \ erbale.

mi \ikmi l'.vnm

souvent le déceler par le chauffage, ses spores étanl très résistantes à la chaleur.

Nous avons pu étudier une quinzaine d'échantillons de li. spo-, rogenes. < l'esl sur l'étude de nos souches que uous nous appuyons pour donner de ce microhe une brève description.

MORPHOLOGI

Bacille à bouts arrondis, mobile, cilié, sporulant, prenant le Gram.

Formes et dimensions. — Morphologiquement très1 voisin du

\ il», septique Pasteur

dont il possède l'aspecl

\ \ >» et les dimensions. Sans

doute esl-il parfois plus épais, sporule-t-il plus rapidement dans les tissus ei dans la plupart des milieux : de plus, les endospores sont-elles plus fréquemment situées au voisinage d'une des extrémités (spores suhterminales) que dans le milieu du bâtonnet formes clostridiennes (fig.

8, A ; il est cependant impossible, sur frottis de sérosité, de distinguer morphologiquement les deux espèces.

Fig 8. - B. sporogenes - A, Culture de ( ; rm|anl [\ taut

2'| heures en bouillon glucose (souche i »

Osw.). — B,Cils; coloration par la méthode noter que sur les frottis de Lôffler. de l'oied aiiimauxinorLs

d'une infection due au 11. sporogenes on n'observe pas de tonnes filamenteuses; les bacilles soni peu nombreux, le plus souvent isolés, parfois sporulés.

il- MCROBES DES INFECTIONS GAZEUSES I Ut

Mobilité. ■ — Le />'. sporogenes est activemenl mobile (sérosité, cultures). Certaines souches ne sonl cependant mobiles qu'à 37 degrés.

K11 général la mobilité, surtout dans les cultures jeunes, est des plus actn e.

Cils, capsule. — Les cils ne diffèrent en rien de ceu.x «lu \ ili. septique (fig. S, B). Pas de capsule colorable.

Spores. — Les spores, ovalaires, oui les dimensions de celles du \ il», septîque ; pour certaines races, elles sont un peu plus grosses.

Elles se libèrent rapidement du protoplasme bacillaire; dans les cultures de quelques juins on observe des amas de spores libres, facilement colorables par le Ziehl à chaud.

Les spores sont extrêmement résistantes à la chaleur; elles résistent à pins d'une heure d'ébullitiôn.

B. — Caractères culturaux

Les caractères culturaux du B. sporogenes font été définis par les travaux de Metchnikoff (z 3f), Choukévitch {iâj), etc. Nous les [tasserons rapidement en revue.

Bouillon Martin glucose. — Trouble abondant en ■>'[ heures avec dégagement de gaz. Les microbes s'agglomèrent en constituant de .grands filaments qui tombent lentement au fond (\\t tube. Le bouillon s'éclaircit lentement (en quelques jours 1. I tdeur infecte.

Bouillon Martin non glucose, additionné d'un cube de blanc d'oeuf. — Mêmes caractères de culture. Le cube de blanc d'œuf est plus on moins rapidement liquéfié, parfois en -i!\ à i8 heures, parfois seulement en quelques jours. Dépôt brunâtre au fond du tube.

Gélose profonde glucosée nitratée. — A noter une certaine variation des colonies. Outre opaque, irrégulier, d'où s'échappe

I I i 1>EI X.IÈME PARTIE

une couronne de filaments enchevêtrés. Parfois, les filaments n'apparaissent qu'à un pôle de la colonie. Formation de gaz. » h leur fétide.

Les colonies isolées sonl susceptibles d'atteindre un grand développement; elles dépassent parfois le diamètre d'un pois. Elles se présentent tantôt sous forme d'une houle d'ouate, tantôt sous forme de grenade (v. PI. 111.).

Gélose inclinée. — Colonies grises au centre', blanchâtres sur les bords, assez régulièrement arrondies. A un for! grossissement, elles présentent des ramifications irréguhères.

Gélatine. — Rapidement liquéfiée, parfois en moins de >J\ heures. Si l'ensemencement est abondant, la liquéfaction esl totale avant que le microbe n'ait commencé à cultiver.

Colonies floconneuses, tombant dans le fond du tube.

Lait tournesolé. — Le lait tournesolé devient rouge violacé; dégagement de gaz.

Parfois, le bacille digère le lait sans le coaguler; parfois il le coagule en fins grumeaux qui tombenl au fond du tube el sont progressivement digérés. Le petit lait devient jaune clair, transparent.

Sérum coagulé. — Noircit et est totalement liquéfié.

Bouillon à la viande. — Digestion progressive de la fibre musculaire qui est gonflée, puis progressivement digérée. Production d'un pigment noir abondant.

( ".. Propriétés biochimioj es Propriétés protéoly tiques. — Germe fortement protéolyti-

Planche III. — Colonies de II. sporogenes en gélose profonde ylucoséc nitratée. Souche Osu>. — En haut, colonies normales de 2/j et de ^H heures. — En bas. colonies présentant l'aspect « eu grenade 0.

Planche III

que; liquéfie la gélatine, la caséine, le sérum coagulé, digère la viande.

Pousse iiè> loin la destruction des substances protéiques, jusqu'aux sels ammoniacaux. Réaction alcaline.

Forme de l'hydrogène sulfuré el donne des traces d'indol.

Propriétés saccharolytiques. — Moins intenses. Pourtant, le bacille attaque glucose, lévulose el maltose (11. Henry) et. même galactose el mannite (A. Bertheloi .

Nous reviendrons sur ees propriétés qui ont permis à A. Beriiii.i.oi de séparer les deux \ariéiés A el B décrites par Metchxikoi i\

I). — Poi VOIR PATHOGÈNE

Le pouvoir pathogène du />'. sporogenes était mal connu ; nous avons eu l'occasion d'en rencontrer des échantillons virulents el d'étudier les lésions produites sur le cobaye.

i° Culture totale. — Cobaye. — L'inoculation sous-cutanée de \\ à .") ce. de culture en bouillon glucose de a4 à 48 heures détermine chez le cobaye l'apparition d'une importante lésion locale. La peau soulevée el distendue forme une grosse phlyetène grisverdàtre atteignant parfois la taille d'un œuf de pigeon (voir PL color. III, fîg. r ). Si l'on incise, on constate que cette phlyetène esi remplie d'une sérosité putride, grisâtre, où pullule le microbe. Le derme est gris sale, altéré, infiltré de fines bulles de gaz. L'évolution normale de la lésion aboutit à la formation d'une large escarre qui guérit lentement.

L'inoculation des mêmes doses dans les muscles de la cuisse provoque la formation d'un phlegmon gazeux putride. -Le plus souvent, celui-ci évolue vers la guérison; d'autres fois le cobaye succombe en >l\ à M\ heures en présentant les lésions suivantes :

La cuisse est tuméfiée, humide, crépitante. Les poils se détachent et metteni à nu la peau livide, gris-verdâtre, parfois teintée de brun. La chute des poils provoquée par le B. sporogenes esi encore plus intense que celle causée par le B. perfringens. Ce fait s'explique par la production locale constante d'une grande quantité d'hydrogène sulfuré.

116 DEUXIÈME l'AUTIL

Le tissu conjonctif de la paroi abdominale esi envahi par un œdème grimpant, dur, qui remonte souvent jusqu'au sternum ei

le dépasse quelquefois.

A l'autopsie, on constate que l'œdème abdominal est rouge foncé, séreux. I ne énorme poche de gaz à paroi gris-verdâtre sépare la cuisse <lc l'abdomen. Les muscles de la cuisse, dis>équés par les gaz, sont partiellement détruits et liquéfiés ; leur teinte est gris sale, parfois rouge-noirâtre. La lésion dégage une odeur infecte.

Rappelons que ces lésions ne diffèrent pas de la gangrène perforante que .Miss Uobkktson a produit chez le cobaye par l'inoculation intra-musculaire de S ce. de culture de son B. œdematis maligni. Il faut cependant noter que les cobayes inoculés par cet auteur ont toujours survécu.

Homme. — Les souches de H. sporogenes que nous avons isolées des plaies de guerre sont capables de provoquer chez l'homme des troubles, intestinaux. Plusieurs de nos aides, qui s'étaient contaminés par mégarde, ont présente des accidents caractérisés surtout par de violentes crises de coliques ne durant du reste qu'un jour ou deux. Il est intéressant de rapprocher ce fait des deux suivants : le B. sporogenes de Metchnikoff a été isolé dans un cas de colique chronique ; les échantillons de B. enteritidis sporogenes Kleln (B. perfringens + B. sporogenes?) provenaient d'entérite aiguë et de choléra uostras.

2° Toxine. — Nous avons pu obtenir la toxine soluble du B. sporogenes en filtrant sur bougie de Chamberland des cultures jeunes (24 à !\& heures) en bouillon glucose. Trois centimètres cubes de filtrat injectés dans la veine du cobaye tuent l'animal en quelques secondes (3o à 60). Le cobaye tombe comme une masse, est agité de quelques soubresauts et meurt par arrêt respiratoire. Des doses plus faibles provoquent des crises passagères de dyspnée accompagnée de secousses violentes des muscles de la tète et de la nuque et de ténesme. L'animal se rétablit assez rapidement.

L'injection sous-cutanée de toxine sous la peau de l'abdomen) détermine la formation d'un gros œdème piqueté de taches hémorragiques. Celui-ci se résorbe lentement et il se forme au

Ils UII ROBl S lu s iM'Ii I IONS '. \/i:i SES

point d'injection une large escarre (a francs à 5o centimes). De fortes doses (5 ce.) peuvenl amener la morl du cobaye en quelques jours.

Ajoutons que Bargeb el Dale, en cultivanl leur H. wdematis maligni (?) qui n'es! certainement autre chose que le B. sporogenes, dans un milieu à la viande (cœur de bœuf), onl obtenu une toxine (filtrée produisant chez le cobaye un œdème hémorragique (inoculation sous-cutanée). Trois centimètres cubes peuvent amener la mort d'un cobaye de 200 gr. en n» à i.~> minutes avec les symptômes suivants : tremblements, adynamie, convulsions.

Cette toxine résiste à une courte ébullition, mais est détruite par une ébullition prolongée. Il s'agirait, d'après les auteurs, de sels ammoniacaux toxiques.

D'après A. Berthelot {i3g I, en cultivant le H. sporogenes (souche H de Metchnikoff) dans une bouillie à la viande, ou observe dans les filtrats sur bougie de porcelaine la présence de produits toxiques qui tuent le lapin en injection intra-veineuse. Le filtrat additionné de 10 fois son volume d'alcool forme un précipité dont la solution est toxique Le résidu d'évapoialion (à 100 degrés repris par l'eau tue égalemenl les animaux par injection intraveineuse.

Bertheloi pense <pie la portion soluble dans l'alcool appartient au groupe des bases toxiques (ptomaïnes) signalées depuis longtemps dans la putréfaction des matières albuminoïdes.

Il faut enfin noter que le l>. sporogenes ne secrète qu'exceptionnellement une petite quantité d'hémotoxines. Sur io souches étudiées, une seule (souche Baj.) hémolvsait faiblement les hématies d'homme, de mouton et de cobaye. 1 ro de ce. de culture totale détruisait la même dose de globules dilués à 1/20.

E. — Anticorps spécifiques

Agglutinines. — Il est très facile de préparer un bon sérum agglutinant en injectant à des lapins des doses croissantes de culture iodée, sous la peau ou dans la veine.

On peut obtenir en quelques semaines un sérum qui agglutine

l'échantillon homologue à i 5bo (agglutination macroscopique après une heure d'étuve .

Nous cherchons actuellemenl à immuniser le cheval contre la toxine de ce microbe.

F. — Identification

En dehors des caractères morphologiques et culturaux, des essais d'agglutination croisée nous ont permis d'identifier entre eux les divers échantillons de B. sporogenes que nous avons isolés. Ainsi quinze de nus échantillons ont agglutiné au moins au i/ioo en présence de notre sérum. Aucun d'eux n'a agglutiné, même à i/io, en présence d'un sérum agglutinant anti-vibrion septique (agglutinant la souche de Vib. septique homologue à i/iooo). De même, le sérum agglutinant anû-sporogenes n'a agglutiné aucune de nos souches de Vib. septique (io échantillons).

Ajoutons enfin que le sérum préparé contre la toxine de Vib. septique, mélangé à une dose pathogène de B. sporogenes, n'enraye pas l'évolution des lésions produites par ce microbe. .Nous pouvons ainsi affirmer que le B. sporogenes constitue une espèce distincte du Vib. septique.

(î. — Position dans la systématique

Les caractères culturaux, les propriétés biochimiques, le pouvoir pathogène, les lésions produites expérimentalement, enfin les réactions obtenues avec les sérums agglutinants et antitoxiques différencient nettement le B. sporogenes Metchnikoff du Vib. septique Pasteur. 11 ne nous semble pas que l'on puisse simplement considérer, comme le fait Tissier, le B. sporogenes comme une variété putride de Vib. septique.

Faut-il maintenant admettre que le B. sporogenes, tel que nous l'avons décrit, constitue une espèce étroitement limitée ou bien un groupe englobant divers anaérobies putrides '? Cette question est beaucoup plus délicate. Metchnikoff a distingué deux variétés de B, sporogenes : variété A e1 variété [i, En dehors de

Il- MICROBES DES INFECTIONS GAZEUSES 11'.»

quelques particularités morphologiques, elles se distinguent principalement par des réactions biochimiques qui onl été étudiées par A. Hiktiii mu .

Toutes deux sont nettement protéolytiques, mais h variété 15 l'csi beaucoup plus que la variété A. Toutes deux, par exemple, liquéfient le lait sans le coaguler, mais alors (pie la variété A ne digère que partiellement la caséine, la variété B la digère totalement.

La variété H produit dans ce milieu une quantité notable de tyrosine ; le A n'eu produil (pie des (races.

Les deux variétés digèrent la gélatine el le blanc d'oeuf.

Les propriétés saccharolytiques sont étudiées en eau peptonée (2 o 0) additionnée de 3 o o de divers hydrates de carhone. Les deux variétés A et \\ attaquenl le glucose, le lévulose, le galactose, le maltose et la mannite. Elles sont sans action sur le saccharose el l'amidon. La variété A attaque plus fortement le lactose.

Choi kewitch, dans son étude sur la flore bactérienne du gros intestin di\ cheval, distingue trois formes de B. sporogenes :

IL sporogenes A = IL saprogenes carnis S vu s (/a#),

B.sporogenes B = B. liquefaciens magnus Luderitz 35),

IL sporogenes fœtidus Choukewitch = Clostridium fœtidum

LlBORIl s 20 I.

Aucun de ces microbes n'étanl fortement pathogène, il sérail intéressant d'étudier ces diverses formes par la réaction de l'agglutination.

Les rapports du IL sporogenes avec le IL putrificus seront indiqués dans l'article suivant.