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tion que présente la granulation azurophile ainsi que les autres granulalions cellulaires, après action de certains mélanges colorants (tels que le May-Grünwald, Panchrome de Pappenheim, Bi-éosinate de Tribondeau et le Giemsa, qui contiennent l’éosinate d'azur du bleu de méthylène) sans parler de ses affinités colorantes ou de ses réactions vis-à-vis de cette substance colorante, c’est que nous pensions plus opportun de traiter ici ces questions de micro-chimie.

Le peu qu'on a déjà constaté montre « que les complexes chimiques de la cellule sont immenses, ses variations ininterrompues et les techniques peur mettre en évidence toutes ces complexes fixes ou variables, comme nous l'avons dit, presqu'insuffisantes ».

On sait que les substances colorantes et spécialement celles qu'on emploie dans les colorations électives, peuvent parfois être considérées jusqu'à un certain point comme des réactifs chimiques qui mettent en évidence certaines parties du tissu, d'où leur utilisation dans les analyses micro-chimiques.

Sans entrer dans la discussion des différentes théories de la coloration, théories qui doivent d'ailleurs être confirmées, nous acceptons en principe, que la coloration est « un ensemble de phénomènes physico-chimiques très complexes, dans lequel la chimie paraît avoir le plus grand rôle ». Une question primordiale pour le micro-chimiste est d'abord de bien connaître les propriétés physico-chimiques des tissus et des réactifs qui servent à agir sur eux, cette connaissance est loin d'être. précise dans le cas qui nous occupe. Toutefois, nous allons accepter théoriquement, que dans les tissus cellulaires se trouvent des parties essentielles ou des substratums qui se colorent les uns directement, les autres par action indirecte, après avoir élé trailées par une autre substance (mordant) qui les prépare à recevoir l'imprégnation de la seconde (colorant).

Parmi les substratums de la première espèce les unes sont basophiles, les autres exyphiles, d'autres neutrophiles, d’au-

tres, nous le verrons, mono-azurophiles (?). Bien que les substratums cellulaires se colorent, en général, par ies colorants basiques ou acides, cela ne prouve pas qu'ils soient basophiles ou oxyphiles, parce que beaucoup d’entre eux, traitrés isolément par un seul réactif colorant, se colorent, tant par le colorant basique que par le colorant acide (Ehrlich,, Mayer, Fleming, Herdeutsch, Giemsa, Michaelis, Pappenheim, etc.).

En acceptant la théorie chimique de la coloration, nous devons convenir que dans ce phénomène de coloration se produit un sel par combinaison du colorant avec les corps colorés, la mollécule albuminoïde étant formée de groupements acides amidocarboniques et de groupements amidébasiques, donc basophiles ou oxyphiles, d'où des mollécules amphophiles. ; |

Dans un mélange colorant composé de colorants basiques et acides dans des proportions déterminées, il doit se produire, électivement, une dissociation grâce à laquelle les substratums basophiles s'emparent de la base carbinol du colorant basique, en se combinant avec l'acide libre du colo- rant acide dans le groupement amidébasique du substratum oxyphile.

Dans les cellules sanguines nous pouvons distinguer comme substratum basophile : les noyaux et les cytoplasmes des cellules mononucléaires (lymphocytes, monocytes, lymphoïdocytes de la série lymphatique et de la série myéloïde non mûre), comme oxyphiles : le cytoplasme des cellules neutrophiles (polynucléaires, métamyélocyles et myélocytes). En réalité ils sont ampho-basophiles, et ampho-oxyphiles (Pappenheim). |

Dans la méthode dé coloration Romanowsky, que nous avons ulilisée, c'est-à-dire mélanges de Giemsa, Panchrome de Pappenheim, Bi-éosinate de Tribondeau; on trouve en présence un colorant basique (bleu de méthylène), un acide Léosine), un autre basique qui paraît contenir cértains éléments

acides, d’où son caractère amphotaire (l’azur de méthylène produit par la décomposition du bleu de méthylène) donc deux colorants neutres.

Ainsi dans le colorant de Giemsa, on trouve l’éosinate de bleu de méthylène et l'éosinate d'azur de méthylène.

Dans le Panchrome de Pappenheim se trouvent les mêmes combinaisons et encore le bleu de tolouidine qui au moment de se dissocier colore plus intensément les corps acidophiles et le violet de méthylène dérivé du bleu de méthylène qui se produit en même temps que l’azur de méthylère après l’action des alcalis. : :

Dans le bi-éosinate de Tribondeau nous avons aussi deux colorants neutres, l’éosinate de bleu ordinaire et l'éosinate de bleu Borrel, c'est-à-dire un éosinate de bleu de méthylène et un éosinate de bleu de méthylène transformé par l’action de l'oxyde d'argent, qui contiendra du violet de méthylène et du bleu de méthylène non transformé et qui en vieillissant abandonne un précipité d'azur de méthylène.

: De cette facon nous avons ici un éosinate de bleu de méthylène neutre qui colore, d’après Tribondeaw, le chromatine des parasites et un bleu basique plus pur. (L'éosinate de bleu Borrel colorera la chromatine des parasites et la granulation leucocytaire avec un bleu protoplasmique très faible).

Dans la solution de May-Grünwald nous avons un mélange neutre simplement d'éosinate de bleu de méthylène qui ne devrait pas être transformé en azur. Cet éosinate de bleu de méthylène pur, aura les mêmes propriétés que l’éosinate de bleu de méthylène de Tribondeau.

Nous allons voir maintenant ce qui se passe en faisant agir ces mélanges colorants sur les cellules sanguines normales ou anormales du sang circulant, de la moelle osseuse et d’autres tissus.

Si dans un frottis du sang normal sec, on fixe les cellules par l'alcool éthylique ou méthylique où par l’alcool-éther

pendant 15 ou 20 minutes et qu'après on fasse agir sur les frottis une solution du colorant de Giemsa dans les proportions que nous avons données dans notre technique, nous aurons : la chromatine nucléaire (qui est amphobasophile) colorée d’une teinte violet-rougeâtre, ce qui prouve qu'elle se colore par le bleu de méthylène et l’éosinate d'azur : ce sera une azurophile facultative; le cytoplasme des lymphocyles, monocytes (qui sont amphobasophiles aussi) se colorera exclusivement en bleu ciel; les granulations des Mastzellen en bleu outremer ou bleu foncé uniquement (donc monobasophilés ou oxyphobes sur protoplasme achromophile); les granulations des polynucléaires éosinophiles dans une|couleur rouge brique où brillant (donc mono-oxyphiles) les granulations des cellules autres polynucléaires, en rose violacé sale (donc neutrophiles dans un protoplasme rose, oxyphile). Les granulations de. quelques cellules mononucléaires apparaissent colorées en rouge vif pourpre ou violetrougeâtre (ce qui montre une métachromatie neutrophile indirecte, monoazurophilie).

Les plaquettes sanguines se colorent en viole-rouge (basophilie ou azurophile facultative) avec une granulation en violet-rouge (azurophilie spéciale). | |

Dans un frottis du sang leucémique (leucémie myéloïde chronique) nous aurons les noyaux des cellules polynucléaires et des cellules mononucléaires violet-rouge (amphobasophilie où azurophilie facultative). Le cytoplasnie dans les premières est légèrement rosé, à granulations peu visibles (donc oxyphilie). Le grand lymphoïdocyte, avec noyau rouge-violet (amphe-basophilie ou azurophilie facultative), le cytoplasme bleu ciel ou bleu outremer (monobasophilie) et quelques granulations violet-rouge ou rouge vif (azurophilie spécifique ou métachromatie neutrophile); les cellules leucoblastiques avec les noyaux colorés de la même façon, aussi les cytoplasmes, quelques granulations violet-rouge ou rouge vif {qui

montrent l’azurophilie spécifique ou métachromatie neutrophile). Dans les promyélocytes le noyau, légèrement teinté de violet-rougeàtre (amphobasophilie), le cytoplasme légèrement teinté en bleu (monobasophilie),, des granulations violet-rouge, marron mat ou presque bleuâtres (azurophilie spécifique) et d’autres granulations presqu'invisibles roseätres (donc oxyphilie ou neutrophilie) (1). Dans les cellules jeunes éosinophiles, les granulations sont bleu ou presqu'acromophiles-(donc'monobasophilie), dans les Mastzellen, granulations violet-rougeàtre ou bleuâtres (donc monobasophilie), dans un cytoplasme achromophile et avec un noyau violet-rougeâtre (amphobasophilie).

Si nous faisons agir maintenant la solution May-Grünwald et ensuite la solution de Panchrome de Pappenheim d’après la technique décrite, nous aurons les noyaux violet-rougeâtre (soit amphobasophilie ou azurophilie facultative), le cytoplasme des cellules mononucléaires normales bleu ciel (basophilie), les granulations dans ces cellules rouge vif ou violetrougeâtre (soit azurophilie spécifique ou métachromatie meutrophile); le cytoplasme des cellules polynucléaires avec ses granulations rougeâtres, violaces sales, couleur indéfinie -(neutrophilie), les granulations des Mastzellen sont colorées en violet-bleuâtre presque sépia (monobasophilie), les granulations des cellules éosinophiles en rouge brique légèrement brunâtres (mono-oxyphilie où acidophilie). Les noyaux des lymphoïdocytes et des leucoblastes se colorent en violetrouge (amphobasophilie ou azurophilie facultative), le cyloplasme en bleu ciel où en bleu outremer (basophilie); les granulations qu’on peut trouver dans ces cellules en rouge vif ou violet-rougeàtre marron (métachromatie neutrophile, soit azurophilie spécifique), à côté de cette granulation on

(4) La granulation neutrophile non müre nest pas visible nettement avec le mélange colorant de Giemsa.

peut trouver dans les leucoblastes une granulation fine, rose (c'est la neutrophilienon mûre); dans les promyélocytes, noyau en violet-rougeâtre très faible (amphobasophilie), le cyloplasme bleu ciel ou gris violacé (basophilie avec une partie d’oxyphilie), les granulations se présentent quelquesunes colorées violet-bleuâtre (azurophilie spécifique atypique); d’autres rouge-violacé ou rouge vif (neutrophilie mûre ou neutrophilte moins mûre); dans les myélocytes et métamyélocytes, la granulation se colore en rouge violacé sale (neutrophilie plus mûre); le cytoplasme de ces cellules apparaît rosâtre (oxyphilie). La cellule éosinophile jeune présente la granulation rouge-violacé brunâtre (oxyphilie), les granulations des Mastzellen sont aussi brunâtres, plutôt bleuâtres (monobasophilie). ,

Si nous passons aux cellules sanguines du cobaye et du lapin nous lrouvons aprés coloration panoptique de Pappenheim, les noyaux des cellules mononucléaires et polynucléaires violet-rouge presque bleuâtres (azurophilie facultalive où amphobasophilie), le cytoplasme des cellules mononucléaires bleu ciel ou bleu outremer (basophilie); les granulations de cés cellules on les trouve violel-rougeàtre, marron, où rouge vif {métachromatie neutrophile ou monoazurophilie). Les granulations des cellules éosinophiles sont rouge vif (mono-oxyphilie ou acidophilie); les granulations des Mastzellen en violet’ foncé presque sépia (monobasophilie); dans les cellules polynucléaires autres qué lés éosinophiles et basophiles on trouve une granulation rouge presque vermillon {amphophilie ou une ampho-oxyphilie) les corps de Kurloff apparaissent rouge brillant ou violacé (neutrophilie métachromatique ou azurophilie spéciale).

Dans les cellules jeunes de la moelle osseuse on trouve la granulalion de quelques cellules mononucléaires violetrougeñlre, mat, ou rouge vif (azurophilie Spéciale, métachromatie neutrophile), d’autres granulations de quelques-

unes de ces cellules leucoblasliques où se trouve la première, sont colorées en rouge vermillon tendre (ampho-oxyphilie ou oxyphilie non mare).

Si nous faisons agir maintenant la solution bi-éosinate de Tribondeau, nous aurons les mêmes résultats chromatiques, avec la seule différence que toutes ces teintes sont plus pures, plus nettes.

Les cellules sanguines de la grenouille se colorent par le May-Grünwald-Panchrome de Pappenheim ou parle Tribondeau, ainsi : le noyau des cellules mononucléaires en rouge légèrement violacé ou violacé nettement (azurophilie facultative ou amphobasophilie), le cytoplasme en bleu eiel très pur ou en bleu outre mer (basophilie); quelques granulations dans ces cellules se colarent en violet-rouge foncé où marron Gnétachromatie neutrophile ou monoazurophilie); les cellules polynucléaires présentent seulement une granulation rouge brique ou brillant {mono-oxyphilie) où une granulation violet presque sépia (monobasophilie) la granulation neutrophile ne se trouve dans aucune cellule.

Nous devons ajouter, que dans le sang de la souris blanche les cellules polynucléaires ne présentent pas une granulation neutrophile telle que nous l'avons vue chez l’homme, non plus une granulation ampho-oxyphile; mais les autres granulations sont représentées avec la chromophilie déjà décrite.

Faisons agir maintenant sur des froltis de sang desséché le mélange de May-Grünwald (éosinate de bleu de méthylène non transformé en azur) dissous dans l'alcool méthylique et après avoir attendu trois minutes nous ajoutons la même quantité d'eau de facon à mettre le colorant neutre en liberté. Le résultat que nous avons obtenu estle suivant : les noyaux des cellules mononucléaires et polynucléaires teintés en grisviolacé presque violet-rougeâtre (basophilie ou amphobasophilie); le cytoplasme des cellules mononucléaires bleu*légè-

rement grisâtre (basophilie); les granulations des cellules polynucléaires rouge clair presque rose (neutrophilie pure), rouge brillant intense (mono-6xyphilie pure), et violet-bleuâtre (monobasophilie); les granulations des cellules mononuclé- -aires invisibles. |

Nous allons exposer maintenant les résultats que certains auteurs, ainsi que nous, ont obtenu en faisant agir sur le froitis du sang desséché et fixé par l'alcool A d’autres réactifs colorants. ;

Bleu azur II. — Avec une dilution aqueuse de ce colorant à 1 pour 500 les résultats ont été les suivants : les noyaux sont teintés en bleu (basophilie), le cytoplasme aussi. La seule granulation colorée est celle des Mastzellen (basophilie).

Azur à l'ammoniaque de Tribondeau. — En faisant agir une solution aqueuse à 1 pour 100 les résultats sont semblables. La granulation des Mastzellen apparaît colorée rougeâtre (métachromatie basophile). 2

Bieu polychrome de Unna.— (Colorant composé d'azur.

de méthylène et de violet de méthylène). En faisant agir ce mélange pendant dix minutes et après avoir lavé à fond et différencié par l'alcool ou l'éther glycérique, le résultat a été Je suivant : les noyaux violet-bleuâtre foncé ou violet-bleuâtre clair (basophilie), les granulations des cellules polynucléaires, les unes légèrement violacé-bleuâtre, très peu perceptibles (c'est plutôt une coloration du cytoplasme,) les’ autres de la même façon et les granulations des Mastzellen rouge vif ([métachromatie basophile). Aucune granulaton des cellules mononucléaires n’a été colorée (anazurophilie).

Bleu polychrome à l'ammoniaque de Tribondeau. -— Le bleu polychrome à l'ammoniaque est un mélange de deux solutions aqueuses à 1 p. 100, l’une d’azur et l’autre de violet à l’ammoniaque dans la proportion de 1 pour 3 parties. Ce mélange doit agir sur les frottis de sang de 30 à 60 secondes,

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ensuite on peut différencier à l'alcool. Il jouit d’un pouvoir de métachromatie très accentué. |

Les résultats sont les suivants : les noyaux sont colorés en bleu-violacé (basophilie), les protoplasmes en bleu (basophilie aussi}, les granulations des Mastzelien en rouge (métachromatie basophile); les granulations azurophiles ne sont pas visibles (anazurophilie).

Thionine. — En utilisant la solution hydro-alcoolique de Nicolle la coloration des noyaux est également bleuviolet (basophilie), le cytoplasme des cellules mononucléaires

“bleuâtre (basophilie), les granulations des cellules mononucléaires né sont pas colorées (anazurophilie), la granulation des Mastzellen est rouge vif (métachromatie basophile), le Cytoplasme d’autres cellules polynucléaires se présente légèrement violacé (basophilie).

Bleu Borrel de Tribondeau.— Les résultats qu'on obtient en faisant agir seulement le bleu Borrel sont les mêmes que quand on fait agir les solutions d'azur où autres bleus basiques.

Bleu de méthyléne-éosine. —— En suivant la méthode de

. Bensaude (en faisant agir la solution d’éosine à 1 pour 200, chaude, pendant 3 minutes, puis ensuite la solution aqueuse de bleu de méthylène concentré) on oblient les granulations des cellules polynucléaires neutrophiles rouge sale (neutrophilie), les granulations des cellules éosinophiles en rouge plus vif (oxyphilie), le cytoplasme des cellules mononucléaires en bleu pâle (basophilie), les noyaux bleu-violacé (basophilie). Les granulations azuropbhiles ne se montrent pas colo-

rées.

Éosinate de bleu de méthylène ordinaire, et Éosinate de bleu Borrel de Tribondeau. — Ces éosinates qui servent à

la préparation du bi-éosinate, en agissant séparément don-

nent des résultats complètement différents. : Le premier qui, est semblable au mélange de May-Grünwald

et qui ne contient pas d'azur, donne le résultat colorant sui-

vant : le cytoplasme des cellules mononutléaires est teinté en bleu pur (donc basophilie) ; les granulations de ces cellules ne sont pas colorées (anazurophilie); les granulations des polynucléaires éosinophiles en rouge vif (oxyphilie) ; les cellules polynucléaires neulrophiles, rosâtres (neutrophilie); les granulations des Mastzellen en bleu violacé (basophilie).

L'éosinate de bleu Borrel colore les granulations des cellules mononucléaires en rouge violacé (métachromasie neutrophile ou monoazurophilie) les granulations des cellules neutrophiles, rouge sale (neutrophilie), les granulations des cellules éosinophiles en rouge vif (oxiphilie), les granulations des Mastzellen en violet bleuâtre (monobasophilie).

Azeo de Tribondeau. — Ce colorant est un éosinate d'azur additionné d’un excès d'azur libre, tous les deux en solution dans l'alcool éthylique glycériné à 1 pour 4. C'est un colorant neutre qui correspond à la solution de Giemsa et au Panchrome de Pappenheim. Il sera aussi équivalent au bi-éosinate et donnera une coloration panoptique si on emploie d’abord la solution (1) de bi-éosinate comme s'il s'agissait du May-Grünwald.

Lorsqu'on emploie la solution d’azéo à 1 pour 20 d’eau disullée, on obtient les mêmes résultats qu'avec une solution de panchrome; les noyaux et les cyloplasmes des ceilules mononucléaires apparaissent teinté en bleu (basophilie), les granulations de ses cellules ne sont pas visibles (donc anazurophilie) les granulations neutrophiles, lorsqu'on laisse agir la solution pendant un temps assez long, apparaissent rougeviolacé (neutrophilie pure) les granulations des cellules éosinophiles en rose foncé (oxyphilie) et les granulations des Mastzellen en bleu violacé (monobasophilie).

Triacide d'Ehrlich. — Ce mélange colorant est le mélangelype du colorant acide; c’est un exemple de coloration simul-

(1) En nous servant de l'éosinate de bleu de méthylène de Tribondeau nous avons suivi la technique employée avec le May-Grünwald.