B. — CULTURES
Nous avons étudié deux souches qui nous ont donné, sur les différents milieux, des résultats sensiblement analogues. Le bacille de Whitmore pousse bien sur les milieux usuels et nous avons pu observer que, si la température optima est atteinte dans l’étuve à 370, les écarts de température peuvent être assez importants sans déterminer de modifications appréciables des
cultures.
SUR GÉLOSE ORDINAIRE apparaissent après vingtquatre heures de petites colonies arrondies, transparentes. Elles s'étendent en surface et, après quarantehuit heures, leurs bords deviennent irréguliers, tandis que les colonies, légèrement opacifiées, prennent un reflet métallique caractéristique.
Dès lors on peut voir la surface de certaines colonies se plisser, devenir de plus en plus irrégulière, tandis que les bords apparaissent déchiquetés.
Mais cet aspect bien spécial des cultures apparaît avec beaucoup plus de netteté si l'on incorpore à la
gélose une certaine quantité de glycérine.
SUR GÉLOSE GLYCÉRINÉE. — Les colonies prennent en effet une disposition bien curieuse. Nous avons constitué une série de tubes contenant des doses de glycérine progressivement croissantes, allant de 1 à 20 de glycérine pour 100 de gélose.
Dès le second jour, les cultures, particulièrement
luxuriantes dans:les tubes contenant de 2 à 5% de
glycérine, commencèrent à se plisser. Cet aspect alla en s'accentuant dans les jours suivants en même temps qu'apparaissait une coloration jaune clair qui devint rapidement jaune orangée, et même fortement foncée après une quinzaine de jours. La teinte jaune des cultures était d'autant plus accentuée que la dose de glycérine était plus importante.
À partir de la même souche nous avons donc pu obtenir après quelques jours à l’étuve, deux types de colonies absoluments différents (1) :
— les unes (rough pour les Anglais) sont grasses, épaisses et luisantes ;
— les autres (smooth) sont sèches, rugueuses et finement plissées, analogues à de vieilles cultures de bacille tuberculeux comme l'avait vu WHITMORE, ainsi que STANTON et FLETCHER.
Le polymorphisme de ces cultures pourrait, au premier abord, en imposer pour une souillure alors qu’il s'agit simplement là de deux aspects morphologiques du même microbe.
Ces deux variétés correspondraient cependant, pour STANTON et FLETCHER, à des différences dans la qualité des réactions sur les divers milieux. C’est ainsi que, pour ces auteurs, les cultures très plissées seraient plus virulentes, plus agglutinables que les colonies grasses.
Remarquons que ceci semble en contradiction avec
1. La planche I montre dans le tube de gauche une culture grasse, luisante, poussée sur un milieu de Pétroff qui est presque entièrement digéré ; dans le tube de droite une large culture fortement plissée et de teinte plus sombre, obtenue sur gélose glycérinée,
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les constatations de Lecroux et MaGroux (1920) qui observèrent, dans les colonies plissées, une lyse importante d’une grande quantité de bactéries. Ces auteurs admettent cependant qu’il existe certaines différences entre les réactions des colonies grasses et plissées, sur le lait et les sucres en particulier.
Pour notre part, les recherches effectuées dans ce sens, notamment sur la fermentation des sucres, ne nous ont pas permis de mettre en évidence de grandes différences de réactions avec l’un ou l’autre type de
cultures.
SUR GÉLOSE ASCITE. — Les colonies ne poussent pas mieux que sur les milieux précédents. Elles sont généralement sèches, plissées et prennent rapidement l’as-
pect en cocarde.
EN BOUILLON ORDINAIRE. — Le bacille de Whitmore pousse très bien. Après vingt-quatre heures on voit apparaître un léger trouble ; la simple agitation du tube suffit à faire apparaître des ondes moirées. Dès le premier jour, on observe de légers amas en surface.
Après quarante-huit heures existe un trouble intense avec un épais dépôt au fond du tube.
En même temps que la culture vieillit les amas existant en surface deviennent de plus en plus épais. Parfois ils tombent au fond du tube, augmentant le culot microbien qui s'y trouve déjà; parfois au contraire ils deviennent coalescents au point de former en surface un voile épais, blanchâtre, adhérent aux parois,
commençant à se plisser après quarante-huit heures.
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Notons en outre que ces cultures en milieu liquide
dégagent une forte odeur de choux.
SUR GÉLOSE VEILLON. — La culture prend un aspect bien spécial. Après vingt-quatre heures elle est déjà typique et, quoique le microbe ait été généralement décrit comme un aérobie strict, on décèle cinq zones distinctes de haut en bas du tube ensemencé par une piqüre profonde.
Cet aspect en bandes transversales rappelle les zones alternantes décrites pour certains germes anaérobies.
Ici, il existe après quarante-huit heures :
— une culture épaisse et grasse en surface ;
— une zone claire de 2 à 3 mm. ne contenant pas de cultures ;
— une zone moyenne de 1 mm. d'épaisseur environ formée par des flocons, constituant un piqueté de fines cultures ;
— une zone claire de 1/2 à 1 mm. d'épaisseur ;
— enfin une zone opaque où se développent abondamment les cultures, s'étendant jusqu'au fond du tube.
La culture reste absolument identique à elle-même dans les jours suivants. Les bandes deviennent de plus en plus nettes. En surface la colonie épaisse et grasse
commence à se plisser dès le troisième jour.
SUR MILIEU AU ROUGE NEUTRE. — Des cultures apparaissent en surface dès le premier jour et commencent à se plisser après quarante-huit heures. On observe un léger virage au jaune, souvent tardif et incomplet, dans la partie supérieure du tube.
SUR GÉLOSE AU PLOMB. — On n’observe pas de noircissement du milieu malgré l’existence de colonies qui
poussent le long de la piqüre.
SUR GÉLATINE. — Le milieu est rapidement liquéfié. La digestion qui s'étend en entonnoir à toute la hauteur du tube, commence dès le premier jour et se poursuit rapidement à 37° pour être complète vers le
cinquième jour.
SUR POMME DE TERRE ORDINAIRE. — On note après vingt-quatre heures l'apparition d’une traînée brillante, légèrement brunâtre qui s'épaissit et fonce les jours
suivants.
SUR POMME DE TERRE GLYCÉRINÉE. — On obtient après vingt-quatre heures un enduit blanchâtre, qui commence à se plisser après quarante-huit heures en même temps qu'apparaît une coloration jaunâtre. Par la suite la culture, de plus en plus surélevée, s’épaissit, s'étend, se plisse profondément ; la coloration s’accentue et devient jaune brunâtre.
On remarque dès le deuxième jour un voile épais qui se développe à la surface de la glycérine sous-
jacente et remonte le long des parois.
EN EAU PEPTONÉE. — Le bacille pousse moins bien qu'en bouillon ordinaire. La formation d'un voile plissé, adhérent au tube, est inconstante.
Il n’y a à aucun moment de formation d'indol.
SUR SÉRUM COAGULÉ. — On voit apparaître après
24 heures une série de petites colonies grêles tout le
long du trajet d'ensemencement. Elles s’accroissent, et on constate dès le troisième jour une légère digestion du milieu dans les régions immédiatement sousjacentes aux cultures. Le phénomène s’accentue, pendant les jours suivants. L'action protéolytique est d’ailleurs extrêmement variable selon la souche étudiée.
SUR MILIEU AU LAIT. — 1l existe après quarante-huit heures une légère digestion en surface. Le troisième jour, le lait est coagulé et la digestion se poursuit len-
tement.
SUR MILIEU A L'ŒUF. — On note le même phénomène de digestion lente qui ne débute que le troisième ou quatrième jour, selon l'activité de la souche ense-
mencée.
SUR MILIEU DE PETROFF. — On obtient une culture grasse, abondante, couvrant toute la surface ensemencée. Le troisième jour les cultures siluées à la partie inférieure du tube commencent à se plisser alors que dans les parties supérieures les colonies restent épaisses et luxuriantes. Pour certaines souches le plissage s’étend parfois à toute la hauteur du milieu.
Du quatrième au cinquième jour le milieu commence à se fendiller ; il se ramollit en même temps qu'on perçoit une odeur de choux tout à fait caractéristique.
Le septième jour la digestion est très importante
(Voir planche TI). Après dix à quinze jours il ne
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reste plus qu'une bouillie informe dans le fond du tube.
SUR MILIEU TRUCHE. -— Le bacille ne pousse pas.
SUR PETIT LAIT TOURNESOLÉ. — On obtient généralement un virage plus ou moins complet après quatre
à cinq jours à l’étuve.
ACTION SUR LES SUCRES. — Les cultures poussent
abondamment sur les milieux sucrés.
Classiquement on obtient :
— un virage complet, sans formation de gaz après quarante-huit heures en milieu glucosé ; un virage incomplet en milieu maltosé ;
— après soixante-douze heures le virage serait net, toujours sans formation de gaz dans les milieux contenant : glucose, maltose, mannite, lactose ou saccharose.
En fait nous n'avons obtenu avec les deux souches étudiées au laboratoire que des résultats négatifs au point de vue saccharolytique. Seuls les milieux mannités donnèrent un virage appréciable, et uniquement dans les parties inférieures du tube correspondant aux zones de cultures plissées.
Ceci nous. montre, comme le signalent déjà, Lecroux et GÉNEVRAY « le peu d'importance qu'il faut attacher pour l'identification d'un germe, à des réactions des sucres, aussi inconstantes et irrégulières » (Annales de l'Institut Pasteur, 1933, p. 249).
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