ET DES COUPES HISTOLOGIQUES

acétique cristallisable, complétés par le séjour dans l'alcool, sont moins défavorables qu'on ne le pensait d'abord pour la coloration des bacilles. On aura recours à ces méthodes de durcissement quand il s'agira d'étudier les détails histologiques, notamment les figures karyokinétiques. Les coupes doivent être aussi minces et aussi régulières que possible, ce qui s'obtient aisément par l'emploi du microtome. Elles seront aussitôt placées dans le bain colorant, oii elles séjourneront douze à vingt-quatre heures et même plus longtemps sans inconvénient. L'emploi de la chaleur povu- aider la coloration n'est pas à conseiller sans restrictions pour les coupes, à cause du ratatinement qu'elle pi'ovoque; toutefois une chaleur modérée, le séjour pendant quelques heures à l'étuve à 40 ou 50° hâte beaucoup la coloration sans endommager la coupe.

Les lamelles ainsi que les coupes, au sortir du liquide d'Ehrlich, sont colorées d'une façon très intense, en bleu foncé presque noir ou en rouge sombre. Dans cet état, la préparation se trouve colorée dans toute sa masse et aucun détail, môme grossier, n'est appréciable. Pour rendre ces préparations propres à l'examen microscopique, il faut les débarrasser de l'excès de couleur. Dans ce but, on peut employer l'acide nitrique dilué de deux parties d'eau (Ehrlich). L'acide nitrique doit être pur d'acide nitreux qui décolorerait les bacilles, à la façon du chlore ou de l'iode. L'acide chlorhydrique (Orth) ou l'acide sulfurique au tiers (Neelsen) n'exposent pas à cet inconvénient. On peut du reste étendre davantage ces acides minéraux (dans 3 ou 4 volumes d'eau) sans inconvénient; les acides ainsi dilués présentent l'avantage de moins altérer les éléments histologiques'. Au sortir du bain colorant, on agite la lamelle ou la coupe, pendant quelques secondes, dans l'acide nitrique au tiers; il se produit dans le liquide un nuage jaune ou verdàtre, selon que la couleur employée est la fuchsine ou le violet de méthyle. Puis on retire la préparation et on la lave dans l'eau, oii elle reprend une légère coloration rougeàtre ou bleue;. dans

1. On peut aussi employer comme décolorant l'alcool faiblement 'acidulé avec l'acide nitrique (Rindfleiscli) ; ou même des acides organiques, l'acide acétique glacial (Pétri), l'acide formiquc (Watson Cheyne), l'acide oxalique (Cornil, Alvarez et Tavcl). — Si l'on fait agir les acides minéraux « chaud, les bacilles de la tuberculose sont décolorés instantanément.