PROPRIÉTÉS ANTIMICROBIENNES IN VITRO

L'activité antibactérienne de la tyrothricine a pu être déterminée au laboratoire par plusieurs méthodes :

1° La méthode des tubes de bouillon de culture (BROCH) ; 4

2° La méthode des suspensions microbiennes (Dusos) ; ;

\ 3° La méthode. des Cclae de tissu (HERREL et DoROTHY HEILMAN).

Nous ne rentrerons pas dans le détail de ces différents procédés qui dépasserait le cadre de notre étude.

Les résultats obtenus montrent que l’action antimicrobienne de l’antibiote s’exerce particulièrement sur les germes prenant le Gram. En effet, l'addition de petites doses de tyrothricine à des bouillons de culture de cocci Gram positifs empêche le développement de ceux-ci.

Le germe le plus sensible à la bactériostase est le pneumocoque, au point qu’une quantité de 0,5 à 2,5 microgrammes de l’antibiotique arrête son développement. Ensuite viennent, par ordre

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de sensibilité décroissante, les différents streptocoques, le bacille diphtérique, la bactéridie charbonneuse et différentes souches de staphy- s locoques. D'autre part, certains germes anaérobies comme Cl. septicum, B. tetani sont également très sensibles à la tyrothricine.

En revanche, les microbes aérobies Gram négatifs tels que gonocoque, colibacille, méningocoque non seulement ne sont pas influencés dans leur croissance par la présence de lantibiote, mais encore peuvent sécréter dans des filtrats de culture un produit capable de l’inhiber.

D’après M. le professeur PREVOST, de l’Institut. Pasteur cependant, des germes anaérobies Gram négatifs se montrent très sensibles à la tyrothricine. Ainsi, le bacille fusiforme, agent de l’angine de Vincent, de la stomatite ulcero-membraneuse, ne lui résiste pas.

En ce qui concerne le bacille de Koch, ses différentes variétés : type humain, type bovin et type aviaire, sont touchées par l’antibiote, comme l’a montré R. Dupos grâce à sa méthode de culture rapide. En effet, 1/4 de microgrammes de tyrothricine par centimètre cube de milieu de cultures de B. K. aviaires suffit à entraver leur développement. |

A cette action bactériostatique, s'ajoute un pouvoir bactéricide vis-à-vis des cocci Gram positiis si la tyrothricine se trouve en concentration suffisante. Ces concentrations varient avec les différents germes auxquels on a affaire. Ainsi, tandis que le pneumocoque, le streptococcus viri-

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dans, certains streptocoques hemolytiques ne . sont tués qu'avec 0,01 mg de l’antibiotique pour 10° cellules, certains autres streptocoques hemolytiques ne succombent qu'avec une quantité comprise entré 1 à 5 mg.

Enlin, nous devons signaler u une certaine in bactériolytique de la tyrothricine vis-à-vis des pneumocoques et des staphylocoques, mais non. des streptocoques.

Il n’y aurait donc pas de parallélisme entre fa bactériolyse et la bactéricidie. Cet effet lytique apparait comme un phénomène secondaire, dû à des enzymes autolytiques labiles présentes dans le corps cellulaire, car en chauffant les pneumocoques et les staphylocoques, la lyse ne se produit plus. Le chauffage détruit donc les enzymes autolytiques que normalement l’'antibiote se contente d’activer.

Les actions bactériostatique et bactéricide paraissent provenir d’un trouble du métabolisme de la cellule bactérienne : l’inactivation-de la glucose — deshydrogénase en fournit la preuve à la théorie de R. Dugos. En eflet, les cocci Gram positifs, mis à l’étuve à 37° dans un milieu contenant de la tyrothricine perdent leur pouvoir de réduire le bleu de tone en présence de glucose.

En outre, l’antibiote n’a aucune Hire sur la glucose-deshydrogénase chez les cocci Gram négatifs.

On peut ainsi se servir de la tyrothricine pour différencier et isoler les germes Gram négatiis,

are résistants, en culture avec des germes Gram positiis. à

Nous devons ajouter que les deux Ho peptides constituants offrent une certaine différence quant à leurs propriétés biologiques : si la gramicidine a une action bactériostatique beaucoup plus marquée que la tyrocidine, elle n’exerce pas, comme celle-ci, d’elfets bactéricide et bactérioly-. . tique. D’autre part, la tyrocidine, à l'encontre de

la gramicidine, semble à fortes concentrations inactiver légèrement les organismes - Gram négatifs. fine : ro

Enfin, la présence de bouillon de viande, de sang, de sérum, de lait ou d’extraits de tissus (éléments riches en protéines) diminue considérablement et même neutralise l’activité antimi crobienne de la tyrothricine et de la tyrocidine mais non de la gramicidine. Ce fait serait dû à la précipitation de la substance active par les électrolytes contenus dans les produits sus-cités. .

Certains facteurs entrainent des variations dans l’activité antibactérienne de la tyrothricine in vitro. Cette activité est d’autant plus marquée que la concentration est plus élevée, que le pH se trouve entre 5,5 et 6 et qu’enfin la température est à 37°, l’action antimicrobienne diminuant au fur et à mesure que le thermomètre descend pour être pratiquement nulle à 0°. Il y a donc, en ce qui concerne cette dernière constatation, une analogie avec la pénicilline ; or, si celle-ci se déti- tre assez rapidement à 37°, à cette même température, la tyrothricine se conserve stable.

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PROPRIÉTÉS ANTIMICROBIENNES IN VIVO D’après ses expériences faites in vivo, Dugos a - montré que la tyrothricine, en émulsion aqueuse, injectée à la dose de 2 mg. dans le péritoine de la

— Souris protège l’animal auquel on a inoculé par

la même voie 1.000 à 10.000 doses mortelles de 5 souches différentes de pneumocoques. Il en est de même pour les streptocoques. En revanche, des injections de l’antibiotique ne protègent pas les animaux inoculés avec. des germes Gram négatiis, ce qui confirme les résultats obtenus in vitro. DuBoS pensa alors avoir découvert un agent bactéricide puissant capable d’être employé dans le traitement des grandes infections à Gram positifs ; malheureusement sa toxicité par voie parentéräle, comme nous le verrons plus loin, n’a pas autorisé Son emploi dans ce genre de maladie.

RAMMELKAMP a établi également que l’action de la tyrothricine est efficace dans les pleurésies purulentes streptococciques déterminées expérimentalement chez le lapin, sauf si l'intervalle de temps séparant l'injection de l’antibiotique de . linfection dépasse 18 heures car, dans ce cas, l'animal meurt par extension de l'infection.

En revanche, les affections de la plèvre ou des articulations dûes à des staphylocoques se montrent beaucoup plus résistantes aux doses non irritantes de tyrothricine.

GAUSE et BRAZHNIKOVA, après avoir lacéré puis infecté avec du CI. WeELcni des plaies de muscles de cobaye, les ont traitées avec de la gramicidine S. ls ont ensuite suturé ces plaies et ont

Le DENON 3S

constaté que la mortalité matteignait que 5 % chez les animaux traités, tandis qu’elle dépassait 50 % chez les témoins.

En plus de cette action en la tyrothricine est douée d’une: action trophique cellulaire :

Dusos a observé en effet doute tte Hotte ment la croissance des cellules lorsqu'elle est au

contact d’une culture de tissus. À Moscou, GAUSE

et BRAZHNIKOVA ont montré également par la di des empreintes sur des lames de verre

u’à la surface des plaies traitées régulièrement à abondamment à la Gramicidine $, le développement des fibroplastes et . macrophages était très actif.

Comme nous venons ia le dire au paragraphe précédent, la tyrothricine possède un effet toxique considérable dû principalement à l’action destructive qu’elle exerce sur les hematies. Les premières expériences d'HERREL et DoROTHY HEIL- MAN ont montré qu’un taux très faible de produit actif (0,01 mg. de tyrothricine par cm°) suffit à entrainer en une heure et à 37°5 la lyse des suspensions à 1 % de globules rouges de lapin. Une concentration 10 fois moindre provoque encore une hémolyse complète en 24 heures. La présence ou l’absence de complément, l'addition de sérum ne modifient en rien le déclanchement de l’hémolyse. Ces deux auteurs ont ensuite expérimenté avec les deux composants de la tyrothri-

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cine et ont établi que, si la tyrocidine a un effet

hémolytique plus rapide que la gramicidine, cette dernière est douée d’un pouvoir destructeur beaucon plus élevé 2 à l'égard des globules rouges. à

On s’est alors efforcé de neutraliser cette propriété sans nuire à l’activité antibactérienne. IL fallut attendre l’année 1945 pour que LEWIS, aux Etats-Unis, obtienne des résultats intéressants en traitant la tyrothricine par le formol. Ainsi, il est arrivé à diminuer de 80 à 90 % l’activité hémoly- tique et seulement de 50 % l’activité antibiotique. En opérant de la même façon sur la gramicidine, il a obtenu une diminution comparable de lactivité hémolytique alors que l’activité antibiotique reste la même qu auparavant.

LEURQUIN, en Suisse, est arrivé aux mêmes constatations. LAWRENCE et THOMPSON ont utilisé des solutions de glucose qui protègent les hématies contre de nombreux agents hémolytiques ; malheureusement, les concentrations en dextrose nécessaires pour arrêter lactivité hémolytique sont trop élevées pour que l’on puisse injecter le mélange dans le sang des animaux et de l’homme.

Enfin, FRAENKELSCONRAT, LEWIS, DIMICK, Enwarps, REITZ et FERREL sont arrivés à obtenir un dérivé succinique, hydrosoluble, d’une innocuité complète en injections intraveineuses bien qu il présente encore un léger effet hémolytique in vitro.

Sur les autres éléments cellulaires de l’organisme, la tyrothricine n’a pas l’action nocive, sauf à des concentrations très élevées qui dépas-

NE sent d’ailleurs largement les concentrations thérapeutiques. ‘ |

. Deux auteurs, cependant, HEULE et LIHTLE ont observé que l’antibiotique à un taux de 10 microgrammes par cm° diminue et même arrête la mobi lité des spermatozoïdes.

= D’après ce qui vient d’être dit, on comprend aisément que la tyrothricine est particulièrement toxique si on l’injecte par voie intraveineuse. Les nombreuses expériences faites sur divers animaux de laboratoire et sur des chiens ont montré qu’une injection de 1 à 2 mg. par kilogramme de poids vif provoque la mort dans un espace de temps relativement court et l’on trouve à l’autopsie des lésions congestives et hémorragiques sur différents viscères, notamment au niveau de l'estomac, de l’intestin, des reins et de la rate. Les injections par voie intradermique, sous-cutanée et intramusculaire à des taux allant de 0,01 à 0,1 mg. provoquent la formation d’abcès stériles.

Les animaux supportent déjà mieux les injections intrapéritonéales et pour entrainer la mort, il faut opérer à des doses beaucoup plus importantes, dépassant les doses thérapeutiques. Per os, la tyrothricine est dépourvue de toxicité, mais, étant rapidement détruite dans le tube digestif, elle est sans ‘efficacité. |

En application locale enfin, sur la peau, même à de très grandes concentrations, Fantibiote n’entraine aucune réaction, même si l’on a produit au préalable un traumatisme. Au cours de notre ‘expérimentation, nous n'avons jamais

observé de phénomènes toxiques sur les animaux dont certains pourtant présentaient de grandes érosions du tégument.

Sur les muqueuses, les solutions dont les con- centrations dépassent 0,5 mg. par centimètre cube - sont quelquefois irritantes ; aussi, ne doit-on pas dépasser ce chiffre en clinique. Certains. auteurs signalent cependant qu’une injection d’une solution normale de tyrothricine dans l’utérus d’une vache atteinte d’endométrite catarrhale purulente peut être suivie d’un choc parfois alarmant qui se produit une heure après l'injection, dure deux à trois heures et se traduit par de l’hyperthermie, des frissons, du décubitus, puis tout rentre dans l’ordre. Mais, même appliquée sur les. muqueuses, la tyrothricine ne passe pas dans le sang. On pense que ce fait est dû à la grosseur de Ja molécule de l’antibiote.