TECHNIQUE DE PRÉPARATION

Dés souris blanches de 16-18 gr., inioctilées par voie nasale sous anesthésie générale à l’éther avec : uné dilution à 1/10 de poumon de souris de pissage, sont sacrifiées mourantes en état d'hypothérmie prononcée éntre la 4o° et la 6o° heure. Les lésions sont impottantes. Le poutnon est prélevé : le poids ioyen est dé 0,30-0,46 &r. On vérifie par colorätion äu Castañedä sa richesse en Rickettsies. Les poumons sont broyés dans un broyeur spécial en vérré Pÿréx (broyeur de Durand) ou dans un broyeur à billes en acier. Le broyat est émulsionné en sérum humain

où équin dilué à 1/5 en eau physidlogiqué phosphatée (PH à 7,4) et formolé à 2 0/00 avant L'em- ploi. ‘émulsion est centrifugée 5 minutes à 8 reprises pour séparer les cellules et les gros débris qui à chaque fois sont repris et broyés à nouveau. L'émulsion est ensuite centrifugée 1 heure à 7.000 tours-minute ; les liquides surnageants sont élimi- ‘nés et le culot est à nouveau émulsionné dans le même mélange sérum-eau physiologique formolée. La coloration à la eyanoquine ou au Castañeda montre que les 9/10 du culot sont constitués de Rickettsies.

Le vacein, mis en ampoules, est conservé D jours à la glacière avant d'être utilisé. L'inoculation à hautes doses au cobaye montre son absence totale de vi-

rulence.