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seræ un peu important, le poumon me sera pas ulilisé pour la fabrication du vacein ; de même il ne sera pas utilisé pour l'inoculation d’autres lapins si l'on observe le développement d'une seule colonie d’un germe quelconque.

. Autre opération très importante, on contrôle sur lame la richesse en Rickettsies du poumon prélevé. Le même fragment de poumon qui avait servi à ensemencer le bouillon pour le contrôle de stérilité bactérienne, est repris, séché rapidement sur papier buvard et appliqué par décalque sur une lime. Les frottis non fixés (un pour chacun des deux poumons) sont colorés par la méthode de Macchiavello, suivant la technique exposée plus haut. On observe alors, sous le microscope, le degré d’abondance des Ricketisies, leur aspect et leur affinité tinctoriale. On observe d’ailleurs que a richesse du poumon en Rickettsies n’est pas absolument proportionnelle à l'augmentation, du poids de l'organe. De ces données, on:tient compte pour le choix des poumons qui seront utilisés à Tinoculation de nouveaux lapins.

Broyage des poumons et préparation de l'émulsion

Ces opérations sont pratiquées en grand lorsqu'on dispose d'un nombre de poumons suffisant.

Entre temps, ils sont consers ‘és. au frigorifique à 5.288: PAREUEE ; L “bRdtque nr poumons, de lapins, noue

arce issoucte M:-moitiéavecda souche HS SR. sont broyés dans un broyeur du {pe Latapie. Le broyat

ést recueilli aseptiquement au fur et à mesure de son -écoulément et mélangé à du sérum de cheval dilué à r/5 en eau physiologique stérile phosphatée —( pH=7,2), à raison de 30 gr. dé poumons par” litre. Le mélangé est additionné de formol du commerce à raison de 0,2 %.

L'émulsion obtenue, répartie en pots à centri-. fuger, est soumise à 4 centrifugations successives lentes d’une dizaine de minutes chacune pour élimi- - ner les gros débris. On est alors en possession du vaccin, que l’on conserve 5 jours à là glacière à + 4° avant toute utilisation.

Comme on le voit, les liquides d'extraction ne sont pas rejelés comme dans la préparation du vaccin à base de poumon formolé de souris. Cette mo- : dification de technique, quoique toute récente, a une grande importance, étant donné le pouvoir antigène deslextran. |

Quoi qu'il en soit, le. vaccin ainsi préparé est. .soumis à de nouveaux examens.

On contrôle la stérilité par de nouveaux ensemencements en bouillon, gélose-sérum-extrait globulaire et gélose de Véillon. On pratiqué un contrôle de toxicité par injection sous-cutanée de vaccin, à la dose de 2 ec. chez des souris, de 16 ec. chez des : cobayés, et l’on suit Févolution de leur courbe thermique, ce qui permet de s'assurer que le vaccin est Sas dénué de virulence. : |

On dogé le formél: libre Fe le: +-chlorhydrate de

phénylhydrazine.

Le She

Enfin, sur une lame, dans un carré de 1 cm. de côlé, 1/100 de cc. de vaccin déposé à l’aide d'une pipette étalonnée est séché et coloré par le Giemsa chauffé. L'examen microscopique perméêt alors d’'évaluer approximativement la richesse de l’émulsion en Rickettsies.