B. — FAITS PERSONNELS

La réaction de fixation dans la diphtérie.

À priori,si l’on admet le principe delaréaction de fixation, elle est applicable dans le cas qui nous occupe. Sans faire état des diverses affections, où elle fournit des renseignements de première valeur, sans discuter en particulier la réaction de Wassermann, il nous suffira de citer l’étude de la réaction de fixation dans la dothiénentérie, et les résultats qu’elle a donnés à Widal et Le Sourd pour montrer le parti qu’on peut espérer en tirer.

Mais si, à côté de sa haute valeur, on veut objecter tous les abus qu’on a faits de la méthode, toutes les erreurs qu’on lui a imputées, il devient nécessaire, si on veut l’étudier à fond, d’en démontrer la légitimité, et faisant table rase des faits antérieurs, de reprendre à sa base la réaction de fixation en montrant :

1° Qu'en présence d’antigènes diphtériques les anticorps diphtériques dévient le complément ;

2° Owen présence d’antigènes diphtériques les anticorps non diphtériques ne dévient pas le complément;

3° Qu'en présence d’antigènes non diphtériques les anticorps diphtériques ne dévient pas le complément.

C’est par l’étude des faits établissant la vérité des trois énoncés précédents que nous entrerons dans le sujet,lorsque nous aurons brièvement indiqué la technique utilisée.

Les principaux points de technique. — Le Procédé utilisé. — Nous avons délibérément écarté les procédés dits « simplifiés ».

Lévy. 8

Défendables dans la réaction de Wassermann, il nous paraissent à rejeter dans les autres applications de la réaction de fixation. Les quelques essais que nous en avons tentés nous les ont fait abandonner.

Nousnousensommes donc tenus à la « méthodecomplète»,

Si nous passons une rapide revue des éléments de la réaction, et de l’application que nous en avons faite, nous avons utilisé les matériaux suivants :

1° Sérum hémolytique lapin anti-mouton;

2° Dilution de globules de mouton;

3° Complément ;

4° Antigènes;

5° Anticorps.

1. SÉRUM HÉMOLYTIQUE. — Ce sérum provenait de lapins ayant reçu 4 ou 5 injections intra-péritonéales de globules de moutons lavés.

Il a été titré et utilisé durant toutes nos expériences au taux de 1/15.

2. GLOBULES DE MouTONs. — Notre provision de globules de mouton était toujours assez fraîche, étant renouvelée 2 fois par semaine, et le reste du temps conservée à la glacière. On les lavait 3 à 5 fois dans du sérum physiologique avant l'emploi.

3. CompLément., — Nous avons eu, durant la période des essais, de longs déboires,tant que nous n’avons pas dosé le complément pour chaque antigène. Les variations suivant le sexe, l’âge, l’état de santé ou de maladie, de gestation ou de lactation des cobayes, d’une part,etd’un autre côté les variations des autres matériaux utilisés, sérums, globules plus ou moins vieux, et surtout antigènes, nous ont fait une obligation absolue, que nous avons érigée en règle invariable, de doser pour chaque expérience le complément, en

présence du système hémolytique et de lantigène qui devaient être utilisés à la réaction terminale.

Les mélanges de > ou 3 sérums frais de cobaye, recommandés par Noguchi pour la réaction de Wassermann, ont “été assez souvent utilisés.

Relativement au dosage, ilest une remarque qu’il faut faire ici et qui a son importance :

Quand on dose le complément, en présence du système hémolytique (sérum de lapin antimouton-globules) il faut, pour que les résultats dela réaction complète soient comparables à ceux du dosage préalable du complément, que ni celui-ci, ni le mélange hémolysine-globules n’aient sensiblement varié dans l'intervalle.

Comme à tous ceux sans doute qui ont fait de semblables recherches il nous est arrivé souvent de constater qu'après avoir dosé un ‘complément et trouvé qu’il fallait en employer une certaine quantité pour arriver à l’hémolyse en présence d’un seul corps, l’antigène, il en fallait, à la réaction terminale, beaucoup moins pour hémolyser le tube qui contenait un corps de plus, et qui, rationnellement, aurait dû exiger pour la dissolution globulaire plus decomplément.

Ayant reconnu et vérifié que, dans de tels cas, on ne pouvait incriminer ni le sérum en expérience (qui avait été dûment inactivé), ni la présence d’hémolÿsines abondantes dans ce sérum dont onavait essayé l’action sur des globules de mouton, on ne pouvait soupçonner le complément d’augmenter de puissance en vieillissant de 2 heures.

Il fallait donc soupçonner le mélange hémolytique.

Il nous paraît donc très important d’utliser au moment du dosage du complément le même mélange d’hémolysine et de globules que celui qui servira pour la réaction complète.

Or, en pratique, il arrive fréquemment qu'au moment où

on va effectuer le dosage du complément en présence de l’antigène, on prépare à l’avance le contenu des tubes : eau physiologique, dilutions d’antigènes, et ce n’est guère qu’au moment de mettre à l’étuve ce complexe augmenté du système hémolytique, qu'on prépare ce dernier extemporanément. On n’a pas donné à l’hémolysine un temps suffisant pour sensibiliser les globules que déjà on lui adjoint le complément qui doit les solubiliser.

Il est évident que, lorsque, » à 3 heures après, les tubes à réaction ayant séjourné à l’étuve, contenant chacun : complément, antigène et anticorps, quand on leur adjoindra le système hémolytique qui est celui qu’on a préparé 3 heures auparavant, l’hémolysine anti-mouton aura eu tout le temps desensibiliser les globules et il faudra à ceux-ci pour se laquer beaucoup moins de complément.

Donc, préparer à l’avance le système hémolytique, de manière que la sensibilisation des globules ait eu le temps de s’effectuer avant le dosage du complément (1 heure à 1 heure 1/2 d’étuve suffiront à cela), et ensuite on pourra garder le système hémolysine et globules à la glacière.

Est-ce à dire que cela mette à l'abri, avec la méthode du dosage préalable du complément, de toutes les erreurs, de toutes les surprises ? Malheureusement non, et, dans bien des cas, nous avons dû renoncer à interpréter des résultats.

Les notions actuellement à l’étude sur la complexité du complément (chaînon intermédiaire et chaïnon terminai) une fois bien élucidées, peut-être évitera-t-on bien des échecs.

h. Les ANTIGÈNES Er LES ANTICORPS. — Nous détaillerons plus loin leur préparation, leur dosage, et les limites dans lesquelles nous les avons employés.

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5. Les Témoins. — Dans la réaction, deux écueils sont à éviter :

1° Croire à une déviation inexistante, par suite d’un élément introduit dans les tubes et « empêchant » par sa seule présence l’hémolyse légitime. Les tubes témoins où sont respectivement isolés l’antigène et l’anticorps renseignent suffisamment sur ce point et mettent à l'abri de l’erreur.

Ces précautions nous ontpermis de constater que certains antigènes étaient normalement très anti-complémentaires. (Telles les dilutions de certaines souches de bacilles paratyphiques ou de colibacilles en cultures anciennes; tel le sérum anti-tuberculeux de Marmorek ; tels certains échantillons de toxine diphtérique ; certaines urines ou sérums, recueillis dans l'intervalle des repas.

2° Croire à l’absence de déviation, par suite de l’existence d’hémolysine dans l’antigène ou l’anticorps.

Ainsi, il nous a semblé pouvoir plusieurs fois reconnaître ce pouvoir à certains bacilles diphtériques, à quelques échantillons de sérum anti-diphtérique ou anti-microbien.

On peut reconnaître ces propriétés dans les cas qui paraissent ambigus en mettant les éléments suspectés au contact de globules de moutons. Dans plusieurs cas, nous avons pu essayer de supprimer cette cause d’achoppement en mettant avant de l'utiliser pour la réaction, l’antigène ou l’anti-corps suspect au contact de globules de mouton et à l’étuve, de manière à fixer sur les hématies la sensibilisatrice; puis on débarrassait ensuite par centrifugation rapide la solution des hématies. Ce procédé est évidemment une complication assez rare, et, d’autre part, les résultats de la réaction sont souvent faussés par ce traitement préalable.

6. InacrivaTioN Des ANTIGORPS. — Les sérums ont toujours été inactivés par un passage de 35 minutes à l'étuve

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De même, bien que les flacons de sérum antidiphtérique de l’Institut Pasteur,qui nous ont si souvent servi,aient déjà subi plusieurs chauffages à 52°, nous les ayons cependant soumis au même traitement.

Jl nous est arrivé, exceptionnellement, d’avoir à utiliser des fausses membranes, du liquide céphalo-rachidien. Quand les corps à examiner étaient susceptibles de contenir les éléments venus du sérum sanguin, ils étaient inactivés.

Dosage des éléments de la réaction. — La technique uulisée n’a rien de particulier, et nous ne nous y étendrons pas.

Après plusieurs périodes pendant lesquelles nous utilisions des proportions et des quantités un peu différentes, nous avons adopté pour la plupart des recherches les chiffres suivants, pour chaque tube à réaction :