B) MÉTHODES CHIMIQUES

te METHODES | DERIVEES DE CELLE DE

: CHARPENTIER. VOLHARD

Elles sont. riretaus et basées sur le principe

suivant : On commence par ‘détruire ou éliminer jes alburines du sang total, du sérum ou des glo-

- bules, -et on dose le chlore dans le liquide désalbu-

miné par la méthode classique de CHARPENTIER-

- VOLHARD. Les diverses méthodes entrant dans cette.

Hac eecnts elles par l’agent utilisé

pour désalbuminer le sang, le plasma ou les globules et par divers détails opératoires dont le plus important est la séparation ou la non séparation du précipité de chlorure d'argent avant la continuation du dosage.

a) MÉTHODES OU L’ON DÉTRUIT LES ALBUMINES PAR ' OXYDATION A CHAUD

Nous parlerons seulemént de la méthode de Lav- PAT que nous avons employée. LAUDAT, ayant remarqué que l'acide nitrique seul donne des liqueurs

jaunes sur lesquelles il est difficile de terminer cor-

Pie LT AVE a = A

rectement le dosage, propose l'addition de- perman- E ganate de potassium préalablement à celle de Ta-

cide nitrique. Cette modification a fait Fobjet de

multiples vérifications : LAUDAT a pu ainsi retrouver tout le chlore ajouté en quantité connue au sé-. =

rum sanguin, et montrer que la méthode donne des résultats sensiblement identiques à celle de Winx. et WARENTROPP. . SRE Er

Recherche du CL plasmatique

ne = ; n #

AROQDH SES PAR SAR (a) Solution décinormale rates d'argent.

rs Permanganäte de potassium en solution sa turée.

(e) Solution décinormale de sulfocyanate d ammoniaque.

Mode GRR ES à

1° On recueil le sang proprement. on É laisse

sédimenter. Puis on prend, à l’aide d’une pipette, 5 cm° de sérum, que l’on met dans une coupe en porcelaine, on ajoute successivement 10 cm° de NO° Ag, 6 cme. de MNO* K et 10 em° de NO° H.

2 On chauffe à l’ébullition jusqu’à obtention d’une couche claire dans laquelle se dépose le précipité de chlorure d'argent. On prolonge ensuite

l'ébullition pendant quelques minutes pour obtenir .

FAX EME

libération d'un. composé. chloré. “organique éven- | “pue Le Are

30 On refroidit et on complète à un volume de

100 em environ.

4 Puis, en présence de 3 cmc” * d'une ion sa >

iurée à à froid d’alun, on titre l'excès d’argent par une

solution de” ‘sulfocyanate . d’ammoniaque Jusque

Pobtention d’une coloration rouge.

Le sulfocyanate est mis dans une burette de our ei lon prend des repères très exacts. On verse alors, goutte à goutte, le sulfocyanate jusqu’à coloration

| Fe: rouge persistante. Dès qu he vire définitivement au

rose celà suffit. EC

Soit N le nombre de centimètres ne de solation + safosyanale nent été nécessaire penE obtenir la réaction. Net ; |

1 Éoe (10 — N) X | (0,00585 X 200) nous donne la quantité en grammes de chlorures dans un Jitre de sérum — (chlorures exprimés en Na Cl). — Pour obtenir la quantité en ions CI, une simple règle de trois suffit. On sait que le poids atomique du

Na est 23, celui du CI est -35,5 et, enfin, celui de Na Clsera 58,5. On aura donc :

Na CI X 35,5

— la quantité en CI.

Recherche du Cl dlobulaire

Ici, nous emploierons la technique préconisée par

le Professeur BRION. Le sang est recueilli soit sur

oxalate neutre de potassium ou de sodium à un taux ne dépassant pas + gramme par litre, soit sur

Das 7 &

ro rairaetoidiadtannte de nu (liquide Roche) at? Re ue a concentration de 0 gr. 20 par litre. C’est ce der. nr “0 * nier que nous avons ‘employé. Jl est nécessaire, Hour empêcher la coagulation partielle, : d’'agiter constamment avec. précaution, à l’aide d’une baguette. de - verre, le sang dans le tube à centrifugeuse qui Je. recoit. Tout aussitôt, le sang cest centrifugé, A une. | oi a vitesse de 4.000- 5. 000 tours, pendant 30 minutes. Ce D n’est que dans ces conditions qu’on isole parfaitement les globules : du plasma. I faut prendre garde a l’échauffement de la centrifugeuse au cours de cette opération : la température des tubes peut s’élever à 50° et 60°, ce qui ne manque pas de provo.. er ” quer lhémolyse. À défaut de centrifugeuse pété. Far à réfrigération, il n° Y a qu'à laisser celle-ci Rs EE ner à Pair. libre, c ’est-à- dire avec son. couvercle ou- PR . * vert-La séparation des globules et du. plasma étant Fi à complète, on siphone le plasma, en veillant à à ne pas . soulever la couche -globulaire par l'aspiration : on. parfait l'é élimination du liquide surnageant avec du RE papier buvard. La mesure de la prise d’ess e$sai ne comporte de difficulté que pour les globules, Ceuxci peuvent être évolués volumétriquement : la pi” pette qui les a prélevés | doit être rincée avec de l'eau additionnée de quelques gouttes d’ammoniaque. Le dosage du chlore est fait par la méthode - de CHARPENTIER-VOLHARD après désalbumination nitropermanganique; la quantité de solution saturée de permanganate à utiliser est de 2 cm!° par cm‘ si de plasma et de 6 à 8 cm° de globules ou de sang; on verse ensuite l’acide nitrique. Après chauffage, à Je liquide plasmatique devient toujours absolument incolore; le liquide globulaire reste souvent légèrement coloré en jaune. :