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Temps

3 heures

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Déviations photométriques

| Bacillus subtilis | Staphylogoque doré | B. de Timothée

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Heures

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Dans ce cas, la courbe présente un maximum pour un séjour de 48 heures à l’étuve à 37°.

Retirer les tubes de l’étuve et introduire 0,05 cc. de la dilution de Pénicilline-étalon à 0,25 U.L. par cc. dans le premier tube, dans le 2° tube mettre 0,05 cc. à 0,5 U.I. Dartece etc. Faire de même avec la solution de Pénicilline à examiner. Les deux derniers tubes servant de témoins, disposer dans chacun d’eux 0,05 cc. d’eau distillée.

Porter 6 heures à l’étuve à 37°.

Les solutions suffisamment concentrées de Pénicilline vont inhiber complètement la croissance du B. subtilis: dans les tubes correspondants nous observons la bactériostase.

Les solutions plus diluées permettront encore la croissance de la bactérie.

La bactériostase est mise en évidence à l’aide d’une solution aqueuse fraîche à 1% de Colorant vital: Chlorure de 2, 3, 5 triphényl-tétrazole (Synonyme: Vita-Stain Ciba). Il suffit d'ajouter une goutte de cette solution de colorant après les 6 heures d’étuve dont il est question plus haut.

Il se forme immédiatement un anneau rouge plus ou moins intense à la surface des milieux dans lesquels les solutions de Pénicilline. n’étaient pas assez concentrées.

S'il y a bactériostase., la surface du milieu ne change pas d'aspect. Par contre les tubes témoins se colorent en rouge très intense.

Pour interpréter les résultats, il suffira simplement de comparer les concentrations des solutions de Pénicillineétalon et de Pénicilline à examiner pour lesquelles il v a bactériostase et de faire leur rapport.

Nous avons contrôlé que le laps de temps de 6 h. à l’étuve à 37°, après addition des solutions d’Antibiotique était nécessaire et suffisant. Pour cela nous avons préparé des dilutions convenables d’une Pénicilline connue et effectué son dosage en mettant le colorant après 1 heure, 2 heures, 3 heures, 10 heures d’étuve.

L’intensité de coloration du premier tube coloré, à partir de celui où il y a bactériostase, diminue rapidement par suite de l’action de la Pénicilline, puis cette action se faisant plus faiblement sentir, la prolifération du germe reprend et entraîne une augmentation de l’intensité de coloration qui passe par un maximum après 6 heures et diminue à nouveau par suite du vieillissement de la culture (Tableau N° 3 et courbe N° 4).

Nous donnons ci-dessous les propriétés du Colorant vital employé dans notre méthode et l'explication du fait qu’il se colore en rouge en présence de cellules en prolifération.

Déviations

Tableau No 3

2 heures

10 Heures

RD es

Sa formule ionique peut être représentée par le schéma suivant:

NN AT HE | CeH5 — C | ok:

NN CSH5 Poids moléculaire 334,79, poudre blanche cristalline qui, exposée à la lumière, se colore rapidement en jaune clair. La combinaison fond vers 243-245° en se décomposant. Ce corps est soluble dans l’eau, l’alcool, l’acétone; insoluble dans l’éther.

Réaction chimique d’oxydo-réduction:

H NN ER CT N — N — C6H5 4 7 CH — C + 24 — CH — C + HCI \ N ; N = N — C6H5 N=N CH ChlornTeder2/2595 Triphénylformazane triphényltétrazole

Cette réaction est déclenchée même à la lumière du jour, mais particulièrement à la lumière vive du soleil, c’est pourquoi la solution doit toujours être préparée fraichement et conservée à l’obscurité.