SANTE

réaction et la coloration propre du réactif est gênante. Enfin la façon d’exprimer les résulats est toute conventionnelle. Il serait préférable de les exprimer directement en adrénaline.

Méthode de A. Zangfrognini [31].

Le réactif colorant est une solution de permanganate de potassium additionnée d’acide lactique.

L’extraction est faite par l’acide acétique à 2/1.000. IL est nécessaire de chauffer à 70°. L’extrait est ensuite décoloré par le sulfate d’ammonium. ñ

CRITIQUE. — 1° Extration : Le mode d’extraction est probablement insuffisant à cause de la faible acidité. Il est regrettable de faire cette extraction à chaud parce que ladrénaline peut être altérée.

2° Dosage proprement dit : L'auteur n’indique pas comment on peut éliminer l’excès de réactif. Cependant sa coloration propre gêne l’appréciation des résultats.

Méthode de A. Seidell [27].

Seidell emploie une réaction voisine de celle de A. Zangfrognini. L’agent colorant est le bioxyde de manganèse. C’est une méthode de dosage de l’adrénaline dans les poudres commerciales de glandes surrénales. Elle ne peut donc être employée sans modification pour les glandes fraîches. Elle présente en outre le défaut que la coloration produite n’est pas comparable à celle qui est obtenue avec une solution pure d’adrénaline. Il faut recourir à un étalon artificiel. L’adrénaline n’est donc pas la seule substance intervenant dans la réaction. Le même reproche pourrait sans doute être adressé à la méthode dé A. Zangfrognini.

Er A

Méthode de 0. Folin, W.-B. Cannon et W. Denis [16].

Ces auteurs ont proposé en 1913 une méthode de dosage de l’adrénaline par leur réactif pour l’acide urique. Il donne une coloration bleue très intense avec l’adrénaline. Il possède toutefois un grave défaut, c’est sa non spécificité : il réagit en effet aussi avec l’acide urique, l’adrénalone, les polyphénols. P. Gley rapporte l’expérience suivante : « On prépare un extrait d’organe quelconque, thyroïde, foie, rein, etc, et l’on fait sur cet extrait, d’une part la réaction de Folin, et d'autre part la réaction de l’iode. On constate que la seconde ne donne aucune coloration, tandis que la réaction de Folin donne avec intensité la magnifique coloration bleue, (soi-disant) caractéristique de la présence de l’adrénaline ». Une telle critique nous paraît suffisante pour renoncer à l’emploi de cette méthode.

En outre, l’extraction de l’adrénaline est effectuée à l’ébullition, ce qui, on le sait, peut altérer l’adrénaline.

Méthode de M. Paget | 24].

Elle utilise la coloration brune que donne l’adrénaline avec le molybdate d’ammonium. M. Paget publie cette méthode pour le dosage de l’adrénaline dans les solutions commerciales, mais il conseille de ne pas l’appliquer aux glandes surrénales parce que la réaction n’est pas spécifique.

Trois autres méthodes ont retenu plus longuement notre attention, parce qu’elles nous ont paru suffisamment spécifiques, et parce que nous n’avons relevé contre elles aucune critique sérieuse. Nous en avons donc fait une étude plus approfondie.

Ces méthodes sont basées sur les réactions suivantes : réaction à l’iode, réaction au bichlorure de mercure et réaction au persulfate de potassium.

DAT Réaction À l’iode

C’est la réaction signalée par A. Vulpian. Elle consiste en la production d’une coloration rouge-carmin lorsqu'on ajoute de l’iode à une solution aqueuse d’adrénaline.

Trois méthodes de dosage sont basées sur cette réaction :

Méthode de J.-E. Abelous, A. Soulié et G. Toujan [4].

Ces auteurs ont utilisé les premiers cette réaction, en 1905, pour le dosage de l’adrénaline. Leur technique est la suivante :

a) Extraction : Broyer 10 gr. de capsules surrénales avec du sable ; ajouter peu à peu 100 cm° de sérum physiologique préalablement bouilli et maintenu à 40-50°. Ajouter quelques gouttes de CIH au 1/10 jusqu’à acidification très légère et faire bouillir pendant quelques secondes. Filtrer et épuiser le résidu par de l’eau distillée bouillante, de façon à obtenir 150 cm° de filtrat. Ce filtrat est clair, incolore et ne renferme plus que des traces d’albumine.

G. Toujan [28] précise qu’il faut employer au maximum VI gouttes d’une solution de CIH au 1/10 pour 100 cm3 d'extrait.

b) Dosage proprement dit : I] se fait comparativement à une solution d’adrénaline à 0 gr. 10 p. 1.000. Ajouter 5 cm° d’iode N/10. Abandonner pendant 15 minutes à la température du laboratoire.

Eliminer l’iode en excès par une solution d’hyposulfite N/10, soit en présence d’empois d’amidon, soit simplement jusqu’à disparition de la teinte jaunâtre de l’iode et apparition de la teinte rose. Un excès d’hyposulfite n’agit d’ailleurs en rien sur l’intensité de la teinte. Etendre chaque solution à un même volume (50 cm).

Filtrer, s’il y a lieu, pour obtenir un liquide parfaitement clair. Cette précaution est indispensable pour les extraits, dans lesquels l’iode provoque un précipité.

tes

Effectuer la comparaison au colorimètre aussitôt, ou dans un espace de temps ne dépassant pas une heure.

CRITIQUE. — On peut adresser à cette méthode les critiques suivantes :

a) Extraction : Le procédé d’extraction n’est pas parfait : l’addition d’acide devrait être faite dès le début de l’opération et une acidification forte serait nécessaire pour entraîner complètement l’adrénaline. L’ébullition présente l'inconvénient de donner au liquide une teinte jaune plus ou moins foncée, qui gêne beaucoup le dosage ultérieur Elle cause en outre une certaine altération de l’adrénaline, probablement un début d’oxydation.

b) Le dosage proprement dit : La coloration se produit bien dans les conditions d’acidité prescrites par les auteurs. Cependant nous avons vu qu’une acidité plus forte serait nécessaire pour obtenir une extraction complète de l’adrénaline. Maïs alors la réaction à l’iode serait négative. G. Toujan a, en effet, constaté que la présence de 0 cm 2 de CIH au 1/10 pour 100 cm3 est suffisante pour empêcher l'apparition de la coloration rose.

Cette technique est donc peu recommandable.

Méthode de S. Frankel et R. Allers [17].

On peut la considérer comme une variante de la précédente. La coloration est obtenue par addition à chaud d’iodate de potassium N/100, en présence de quelques gouttes de PO{HB dilué. Les auteurs y avaient vu une réaction nouvelle. Mais c’est en réalité l’iode libéré par l’acide phosphorique qui est le véritable agent colorant. On peut en effet vérifier sa présence par l’empois d’amidon.

CRITIQUE. — Nous voyons peu d'avantage à cette méthode. Elle est sujette aux mêmes critiques que la précédente et elle est en outre d’une technique plus compliquée.

AA Eee Méthode de G. Weller [30].

C’est une modification de la méthode de J. E. Abelous, A. Soulié et G. Toujan. Les inconvénients que nous avons constatés chez cette dernière, sont ici supprimés. En effet :

1° L’extraction est complète parce qu’elle est faite par l'acide trichloracétique suivant une technique qui assure l'entraînement total de l’adrénaline.

2° La coloration de l’adrénaline par l’iode peut apparaître dans cet extrait avec toute l’intensité nécessaire parce que l’acidité de l’extrait est partiellement neutralisée par l'addition d’acétate de potassium jouant le rôle de tampon.

Nous avons pratiqué cette méthode en employant la technique suivante qui est celle de l’auteur à quelques modifications de détail près :

a) Extraction : Broyer très soigneusement les surrénales fraîches de chien avec du sable lavé, et triturer avec 2-3 cm° d'acide trichloracétique à 10 %, puis ajouter 20 cm° d’acide. Laisser le mélange pendant 20 minutes en l’agitant de temps en temps et filtrer au Büchner. Le résidu est additionné de 10 à 15 cm° d’acide à 10 % et est laissé 10 minutes en agitant. Filtrer et répéter encore deux fois l’extraction de la même facon. Il faut obtenir un volume d’extrait d’environ 60 cm° pour 1 gr. de glande. L’épuisement est ainsi complet. Rincer la fiole avec 1 ou 2 cm° d’acide à 10 %. L’extrait obtenu est absolument limpide et incolore si les surrénales sont fraîches. Déterminer exactement son volume V.

b) Dosage proprement dit : Mesurer à la pipette 10 cm° d'extrait dans deux béchers. Ajouter dans l’un d’eux 2 cm d’une solution d’adrénaline à 0,10 p. 1.000 dans lacide trichloracétique à 10%, ce qui correspond à 0 mgr.2 d’adrénaline. Dans l’autre bécher ajouter 2 cm° d’acide trichloracétique à 10 %. Dissoudre ensuite dans chacun d’eux 1 gr. 20 d’acétate de potassium cristallisé. Lorsque la dissolution est complète, verser dans chaque becher 5 cm° d’iode en-

Lanxade 2

chine

viron N/100. Laisser 15 minutes en contact. Eliminer l’excès d’iode par quelques gouttes d’hyposulfite de sodium environ N/100. Il apparaît alors une belle coloration violette. Les solutions demeurent toujours parfaitement limpides. Il faut éviter de verser un excès d’hyposulfite qui peut modifier légèrement la teinte ; on y arrive facilement en employant de l’hyposulfite N/50 au lieu d’hyposulfite N/10 pour achever l'opération. Amener les deux solutions au même volume, soit en versant quelques gouttes d’eau dans le becher où l’on aura mis le moins d’hyposulfite, soit en complétant à 20 cm° avec de l’eau distillée.

Comparer les deux solutions au colorimètre Duboscq. L'augmentation de la coloration dans lune d’elle est due à la présence de l’adrénaline ajoutée. On obtiendra un chiffre n représentant le rapport des deux colorations, et qui devra être inférieur à l’unité.

Calculer la quantité d’adrénaline en milligrammes, contenue dans l'extrait total, en employant cette formule :

n. x ‘02 % V 1— n 10 Pour avoir la quantité d’adrénaline contenue dans 1 gr.

de glande, diviser le nombre obtenu par le poids de glandes employé pour le dosage.

CRITIQUE. — G. Weller justifie l'emploi de cette technique par les arguments suivants :

a) Extraction : Pour être complète, l’extraction doit être faite avec une solution suffisamment acide. L'auteur a choisi l'acide trichloracétique à 10 % qui permet un épuisement total des surrénales. L. C. Baker et G. F. Marrian [6] avaient déjà préconisé l'emploi de cet acide. L. Binet et G. Weller [12] ont effectué des dosages d’adrénaline par liode sur deux portions de lots de pulpe surrénale fraîche ; une des portions a été épuisée par l’acide trichloracétique à 10 % et l’autre par l’acide sulfurique selon les indications de O. Bailly [5]. Pour 2 lots de surrénales, les résultats ont été les suivants :

Ur A 1 Il

Extraction par :

L’acide trichloracétique....... 1 mgr. 642 4 mgr. 354 Éfacrde SULUrIQUE. SN. Le 1 mgr. 342 0 mer. 975

Des dosages effectués sur le sang additionné d’une quantité connue d’adrénaline, ont montré que l’adrénaline était totalement entraînée par l’acide trichloracétique à 10 % et partiellement seulement par l’acide trichloracétique à 5 %.

Cet acide a, en outre, l’avantage d’éliminer complètement les matières protéiques qui, même présentes en faible quantité, causent des erreurs par excès dans le dosage de l’adrénaline. Enfin, il est inutile de recourir au chauffage, comme on le fait dans la plupart des autres méthodes, afin de coaguler les albumines, chauffage qui a l’inconvénient d’altérer partiellement l’adrénaline et de donner des extraits colorés en jaune.

b) Dosage : Il est impossible de faire apparaître la coloration rose par l’iode dans l’extrait obtenu avec l’acide trichloracétique à 10 %, à cause de l’acidité trop élevée. Elle ne se produit que lorsque le pH atteint 3, mais elle est faible encore. À partir de pH—4, la coloration rouge est très intense et atteint son maximum 3 à 5 minutes après l'addition d’iode. L’acétate de potassium permet de substituer l’acidité acétique à l’acidité trichloracétique, donc d'élever le pH. Avec la proportion employée dans la technique de G. Weller, on obtient un pH supérieur à 4, et la réaction colorée se produit parfaitement bien. D’autres sels d’un acide faible avec une base forte donnent d’ailleurs des résultats équivalents.

I1 faut souligner la technique très particulière adoptée ici pour le dosage colorimétrique. Après la production de la coloration par l’iode, la solution extractive n’est pas comparée à une solution pure d’adrénaline, comme on le fait habituellement. Elle est comparée à une solution préparée semblablement à partir de l’extrait et additionnée d’une quantité connue d’adrénaline. De la sorte, on détermine