CHAPITRE II

ACTION DE L'ÉMULSINE D'AMANDE DUREE EUSLLANTEOSIDE

On a vu précédemment, dès le début de ce travail, que l’action de l’émulsine d'amande sur la liqueur extractive de Laurier de Portugal, — qui se traduit par le retour vers la droite de la rotation polarimétrique de la liqueur primitive, — s’est poursuivie avec lenteur pendant un très long temps, la valeur de ce retour s’exprimant toutefois par un chiffre élevé. Ce résultat qui allait nous engager à poursuivre avec succès l'étude biochimique des principes hétérosidiques du Laurier de Portugal et nous a conduit, en fait, à l'extraction du lusitanicoside, nous a amené, d’autre part, à essayer directement l’action de l’émulsine sur ce dernier hétéroside obtenu à l’état pur.

Au cours d'essais de dédoublement du lusitanicoside par les ferments, en vue de nous orienter sur sa constitution, nous avions vu, en effet, comme nous l’avons précédemment mentionné, que le ferment qui nous apparaissait le plus approprié pour cette hydrolyse était non pas l’émulsine, mais la poudre fermentaire obtenue avec la feuille de C. lusitanica. Il y avait donc lieu de se demander si le ferment spécifique du dédoublement est bien l’émulsine d'amande elle-même, envisagée comme d-glucosidase 6.

Pour éclaircir cette question, un certain nombre d’essais ont été institués :

I. — On a préparé une solution, — ou mieux une suspension, — d’émulsine d'amande, en agitant pendant environ une heure 1 g. de poudre de cette dernière avec 100 cm* d’eau distillée et décantant, sans filtrer, pour éliminer

seulement quelques parties grossières non dissoutes. On a mélangé 50 cm de cette suspension (a — — 40’, / — 2, après filtration) avec 150 cm* d'une solution aqueuse toluénée de lusitanicoside à 1 g., 9981 pour 100 cm? (a — — 2956,/ — 2). Le mélange ne réduisait pas la liqueur cupro-potassique et accusait une rotation de — 2022’ (? — 2). Après 66 jours, à la température du laboratoire, on a observé une rotation de — 206’ ; il n’y avait donc eu qu'un retour de 18’ vers la droite et la liqueur n’était devenue que faiblement réductrice.

Cependant, l’émulsine utilisée, essayée sur des solutions d'’aucuboside et d'’amygdaloside, s'était montrée très active sur ces hétérosides ; ainsi, dans les conditions de l'essai ci-dessus, on obtenait, en 2 jours, un dédoublement de 88 pour 100 de l’amygdaloside mis en œuvre.

A titre d'essai comparatif, on avait mis à part 50 cm° du mélange initial (a — = 2022, | — 2), auxquels on avait ajouté 1 gramme de poudre fermentaire de Laurier de Portugal et on avait constaté, après 4 jours, une formation de sucre réducteur correspondant à 35,1 p. 100 de l’hétéroside mis en œuvre et, après 18 jours, à 40,1 p. 100. On a vu, dans les essais antérieurement rapportés (pp. 11 et 12), qu'on avait obtenu, par la poudre fermentaire seule, des valeurs oscillant de 39 à 40 p. 100.

IT. — On à brové, dans un mortier de verre, o g., 5059 de lusitanicoside avec o g., 50 d’'émulsine d'amande et quantité suffisante d’eau pour faire 25 cm*. — Après défécation, le mélange présentait une rotation de — 307

(1 = 2), ramenée par le calcul au volume primitif. Après 7 jours, à la température du laboratoire la rotation était devenue — 2051” ; elle était de — 2040” après 35 Jours.

Ces essais montrent que l’émulsine des amandes n’a qu’une très faible action hydrolysante sur le lusitanicoside, alors que la poudre fermentaire de la plante agit rapidement ; on constate qu’on observe l’inverse lorsque, au lieu de lusitanicoside, on met en œuvre l’amygdaloside comme substance à hydrolyser.

Il semble donc bien que le lusitanicoside exige, pour son hydrolyse, un ferment spécifique approprié et que la faible action observée avec l’émulsine résulte de la présence, dans cette dernière, de traces de ce dernier ferment. On pourrait peut-être désigner celui-ci sous le nom de lusilanicosidase, étant bien entendu qu'il est susceptible sans doute de s'attaquer non seulement au lusitanicoside, mais aussi à des composés présentant une structure se rapprochant de celle de cet hétéroside.

CE NAIMORVENMNI

PRÉSENCE DANSE MRIBREIDEMPORMTUCAT DE PRINCIPES IMMÉDIATS FOURNISSANT DE L'ACIDE VANILLIQUE ET DE L’ACIDE PROTOCATÉCHIQUE (1)

En collaboration avec MM. G. PorroT et J. RABATÉ (1), j'ai montré l'existence, dans les rameaux feuillus de Laurier de Portugal, de principes immédiats dans lesquels se trouvent engagés les acides protocatéchique et vanillique :

C—COOH (1) C—COOH (1) HCŸ/ . HCŸ .

| HC\ CÆOrG) nd le — OCH, (3) C — OH (4) CO)

Je rappellerai seulement, d’une façon très sommaire, la technique qui a conduit à ce résultat :

Les rameaux feuillus de Laurier de Portugal (2) étaient traités par l’eau ou l’alcool bouillants. La solution aqueuse de l'extrait résultant de ce traitement était additionnée d’acétate neutre de plomb, puis filtrée. A la liqueur limpide, on ajoutait du sous-acétate de plomb liquide. Le précipité produit par ce dernier réactif était seul recueilli, puis décomposé par l'acide sulfurique ou par l'hydrogène sulfuré. La liqueur finalement obtenue, fournissait,

(1) H. HÉRISSEv, G. PorroT et J. RABATÉ, « Présence dans les rameaux feuillus de Laurier de Portugal, Cerasus lusitanica LOIS., d'un complexe fournissant de l'acide vanillique et de l'acide protocatéchique » ; Journ. Pharm. et Chim., [8], XXIX, 337, 1930:

(2) Des recherches séparées ont été faites sur des rameaux récoltés à diverses époques de l’année ; elles ont toutes conduit au même résultat global.

après divers traitements appropriés, de l'acide protocatéchique et de l’acide vanillique.

Si l’acide protocatéchique et certains de ses dérivés ont été souvent rencontrés dans le règne végétal, il en est tout autrement de l'acide vanillique ; les cas dans lesquels on a signalé ce dernier sont, en effet, assez rares.

Il semble bien que les acides protocatéchique et vanillique ne préexistent pas, au moins en totalité, à l’état libre, dans le Laurier de Portugal, mais proviennent d’un ou de plusieurs complexes, susceptibles de libérer leurs composants sous l'influence des traitements qu'on fait subir au végétal et aux liqueurs extractives qui en dérivent. Les essais ci-dessous décrits appuient cette manière de voir.

On a traité, par l’alcool bouillant à 80°, 3.500 g. de rameaux feuillus frais récoltés en février 1938. Après distillation de l'alcool, la liqueur aqueuse résiduelle ne cède à l’éther que des traces infimes d'acide vanilhique. Cette liqueur aqueuse, soumise à la fermentation alcoolique par la levure de bière, est traitée par l’acétate neutre de plomb ; le précipité plombique peu abondant qui se produit dans ces conditions ne renferme pas de méthoxyles.

La liqueur aqueuse, filtrée, est ensuite additionnée de son volume d'alcool à 95° et d'extrait de Saturne qui y détermine la formation d'un volumineux précipité ; on constate qu'après ce traitement elle ne contient plus que des traces indosables de produits fournissant des méthoxyles, en même temps qu’elle ne donne qu’une très faible réaction colorée protocatéchique.

Les complexes à acides protocatéchique et vanillique sont entraînés de même si, comme agent précipitant, on utilise la baryte au lieu d'extrait de Saturne.

Les précipités plombiques produits par ce dernier agent sont décomposés par l'hydrogène sulfuré ; la liqueur aqueuse, siège de cette décomposition, est évaporée dans le vide ; le résidu d’évaporation est repris par l’acétone et les liqueurs acétoniques sont évaporées. Si, dans ces extraits acétoniques, on dose les méthoxyles, on est amené à considérer, — en rapportant en totalité le chiffre trouvé à de l'acide vanillique, — que les rameaux feuillus de Laurier de Portvgal doivent contenir sensiblement, pour 1.000 g. de produit sec 5 g.dé ce/dennièr.

PRINCTRESSROUERNISEPARSERERADRIPREDE PORTUGAL 20

Les extraits ainsi obtenus par décomposition du précipité plombique, purifiés par passage dans l’acétone, libèrent de l’acide vanillique par simple ébullition avec de l’eau et, mieux encore, par hydrolyse sulfurique, qui fournit également de l’acide protocatéchique paraissant plus difficilement libérable. Il est donc assez naturel d'admettre que les acides trouvés à l’état libre dans des liqueurs provenant de traitements de la plante par décoction dans l’eau résultent de leur mise en liberté dans un milieu favorable à cette dernière.

Au cours de plusieurs essais d’hydrolyse par les acides, nous avons constaté dans les liqueurs la présence de sucres réducteurs et nous avons même isolé du glucose et du rhamnose. Ces résultats peuvent amener à concevoir que les acides protocatéchique et vanillique seraient peut-être engagés dans une ou plusieurs combinaisons de nature hétérosidique. L’impossibilité d'attribuer tout caractère de composé défini et bien individualisé à un précipité aussi complexe que celui que produit le sous-acétate de plomb liquide dans une solution extractive végétale nous empêche d’insister sur cette hypothèse qu'il n’est cependant pas déraisonnable d'émettre.

GETAPISRRENTRTA