INTRODUCTION

Le pigment purique se présente exclusivement (*) chez les Vertébrés inférieurs sous forme de cristaux incolores de guanine ou de guanates, contenus dans des éléments particuliers, Les guanophores (?). Ceux-ci n'ont pas jusqu'à présent obtenu de la part des chercheurs l'attention qu'ils méritent. Tandis que les travaux consacrés à d’autres cellules pigmentaires, les mélanophores, sont innombrables, la liste des articles qui concernent les guanophores est vite close, si l’on en excepte ceux où ils sont simplement mentionnés.

Ces cellules fort répandues, très spéciales et connues depuis plus d'un demi-siècle, étaient jusqu'à ces dernières années assez négligées (cette sorte d'abandon tient sans doute à des raisons techniques car quelques-unes des méthodes de fixation et de coloration les plus couramment employées détruisent les guanophores ou les altèrent), si bien que c'est vraiment faire œuvre nouvelle que d'étudier leur cytologie, leur mode d'apparition, leur topographie précise et surtout, en même temps que leur signification physiologique, la manière dont elles réagissent à l’action de divers facteurs expérimentaux.

Ces questions apparaissent d’ailleurs du plus haut intérèt si l’on songe qu'elles se rattachent directement à deux grands problèmes de biologie générale : métabolisme des corps puriques, signification générale de la pigmentation.

J'ai limité mes recherches aux Vertébrés inférieurs. En outre de l'impossibilité où j'étais d'étudier la guanine dans toute la série animale, le fait que le pigment purique se présente chez

(') On rencontre souvent des concrétions uriques dans le rein de certains Reptiles, mais il ne s’agit pas là de pigment.

{?) Plusieurs termes servent actuellement à désigner ces éléments. Le nom d'éridocyte fait allusion à l'éclat dont ils brillent dans certaines conditions d’éclairement. Les noms de leucophore et d'interferensselle sont employés par la majorité des auteurs allemands, Je leur préférerai le terme moins usité de guanophore (créé par Scamor (1912)) malgré son élymologie fâcheusement hybride, parce qu'il renseigne sur le contenu chimique caractéristique de la cellule, parce qu'il est l'homologue du terme mélanophore. J'ai rejeté le terme d'iridocyte, habituellement employé en France, pour éviter toute confusion avec les cellules de la choroïde des carnassiers qu'on désigne sous ce nom,

les Poissons, les Reptiles et les Batraciens sous des formes tout à fait comparables circonscrivait naturellement mon sujet. Je laisse donc complètement de côté les « iridocytes » particuliers des Géphalopodes, les concrétions puriques des Arachnides et toutes Les formations analogues qu’on rencontre chez les Invertébrés.

L'étude que j'ai entreprise comporte trois parties.

Dans la première, morphologique, j'indiquerai les caractères cytologiques, la topographie et le mode de formation des guanophores,

Dans la seconde, j'exposerai la nature et les caractères chimiques des cristaux de guanine et je fournirai quelques données sur lesquelles on pourrait peut-être fonder une coloration élective de ces éléments.

Dans la troisième, expérimentale, je décrirai l'effet sur le pigment purique de la modification de certains facteurs internes et externes : action de la lumière, variations qualitatives et quantitatives de l'alimentation, action de certaines hormones.

Je traiterai successivement chacune de ces parties.

Je suis particulièrement reconnaissant au Professeur PRenanr de m'avoir donné un sujet de thèse où l’observation histologique soit utilisée non seulement pour elle-même et pour mettre au point des questions de structure mais pour contrôler et interpréter des recherches et des expériences chimiques et biologiques. Je suis heureux de m’engager — après d’autres et en particulier après mon ami Jean Verne () — dans la voie nouvelle et féconde de l’histophysiologie. Bien que je ne méprise pas les notions et les recherches morphologiques qui sont le fondement nécessaire et primordial de tout travail histologique sérieux, je me sens particulièrement attiré par des études où le contrôle microscopique permet de donner toute leur signification aux données expérimentales.

Je désire ajouter un mot sur la manière dont j'ai fait ma bibliographie. |

Sur la foi de leurs titres, j'ai dû lire de très nombreux articles qui ne concernaient que les mélanophores, tout en parais-

(1) Veuxe, Les pigments tégumentaires des Crustacés Décapodes, Thèse de la Faculté des Sciences de Paris, 1921,

sant traiter du pigment en général. Ils ne figurent pas dans ma liste, à l'exception de ceux que j'ai été amené à citer dans ce travail par suite de leur valeur générale. Je serai satisfait si ce dépouillement, qui m'a demandé beaucoup de temps et m'a paru souvent fastidieux, pouvait éviter à ceux qui s'intéresseront après moi au pigment purique de lire des textes inutiles.

Pour ce qui est des travaux concernant réellement les guanophores, je crois avoir été aussi complet que possible.

J'ai dû citer — exceptionnellement — certains articles de seconde main. Ce sont ceux que, malgré toutes mes recherches, je n'ai pu me procurer dans les bibliothèques parisiennes ; car il est actuellement impossible — et je le regrette — de faire à Paris une bibliographie complète.

TECHNIQUE Animaux étudiés

Voici la liste des animaux que j'ai étudiés.

Les nombreux Poissons de mer qui y figurent ont été examinés au laboratoire de Roscoff (*). Je les ai déterminés à l'aide de l’excellent ouvrage de M. Le Danois.

J'ai recueilli moi-même la plupart des Batraciens dans la région parisienne.

Envoyé en mission zoologique à Madagascar, j'ai eu la bonne fortune de pouvoir y récolter un certain nombre de Batraciens et de Reptiles qui m'ont permis d'étendre mes observations à un matériel tropical plus rarement étudié.

Poissons

Ordre des Sélaciens :

Raia punctata. Riss.

R. microcellata. Montagu.

Ordre des Téléostéens. — Sous-ordre des Lophobranches : Syngnathus acus. Linné.

() M. le Professeur Pérez, qui dirige ce Laboratoire, voudra bien trouver ici l'expression de ma reconnaissance pour sa bienveillante hospitalité,

Siphonostoma typhle. Linné.

Entelurus æquoreus. Linné.

Nerophis lumbriciformis. Bp.

Sous ordre des Acanthoptérygiens :

Trachinus vipera. Cuvier.

T. draco. L.

Blennius pholis. L.

B. gattorugine. Lacép.

Gunellus vulgaris. Cuvier.

Callionymus lyra. L.

Gobius ruthensparri. Euphr.

G. paganellus. Linné.

G. minutus. C. et Val.

G. niger.L.

Cottus bubalis. Euphr.

Scomber scomber. L.

Trachurus trachurus. L.

Zeus faber. L. À

Labrus bergylta. Ascanias.

Crenilabrus melops. L.

Gasterosteus aculeatus. 1.

Spinachia vulgaris. Flem.

Atherina presbyter. C. et Val.

Sous-ordre des Malacoptérygiens :

Ammodytes lanceolatus. Lesauv.

Gadus luscus. L.

Motella tricirrhata. Bonap.

M. mustela. 1.

Platessa vulgaris. Gottsche.

Lepadogaster sp.

. Carassius auratus. L.

Belone vulgaris. G. et Val.

Salmo fario lacustris. L.

Sous-ordre des Apodes : Conger vulgaris. Cuvier.

Batraciens

Ordre des Anoures :

Hyla arborea. L.

Mantidactylus lugqubris. Duméril, Rana labrosa. Cope. ù R. mascareniensis. Duméril et Bibron.

R. esculenta. L.

R. temporaria. L.

R. agilis. Thomas.

Bombinator igneus (têtards). Laur.

Pelodytes punctatus. Dug.

Alytes obstetricans. Laur.

Bufo vulgaris. Laur.

Ordre des Urodèles :

. Salamandra maculosa. Laur.

Triton maculatus. Schinz.

T. cristatus. Laur.

T. alpestris (larves). Laur.

T. palmatus. Tschb.

Amblystoma ligrinum.

Reptiles

Ordre des Chéloniens :

Testudo graeca. L.

Emys orbicularis. L.

Ordre des Sauriens :

Crocodilus madagascariensis.

Lacerta viridis. Gesn.

Anguis fraqulis. L.

Ordre des Caméléoniens :

Chamaæleo sp.

Ordre des Ophidiens :

Pelophilus madagascariensis.

Tropidonotus natrir. L.

Les Batraciens représentent pour l'étude des guanophores un matériel de choix. La facilité avec laquelle on se les procure

en abondance et avec laquelle on les nourrit, leur grande rusticité sont bien connues des expérimentateurs. Au point de vue histologique, ils fournissent des objets très favorables : la peau des Anoures est facile à isoler et à étaler ; chez Bufo, elle est, 1l est vrai, épaisse, granuleuse et très glandulaire, mais chez Rana et surtout chez Hyla, elle est mince, lisse et se laisse facilement étudier dans tous ses plans.

Pour ce qui est des têtards, il faut préférer à ceux de Bufo vulgaris ef de Rana temporaria, trop riches en pigment mélanique (d'origine ovulaire, épidermique) ceux de Rana esculenta qui donnent des préparations très lisibles.

Particularités de la technique histologique

Firation. — On doit éviter les fixateurs fortement acides ou alcalins qui dissolvent la guanine. L'acide acétique, dans les conditions ordinaires, n’a pas d'action nuisible. Par contre, l'acide picrique doit être proscrit, car le picrate de guanine se forme facilement. Le bichromate de potasse, l'acide osmique, le sublimé, l'alcool chloroforme conviennent parfaitement. Le formol ne peut être employé que s’il est rigoureusement neutre : le procédé courant qui consiste à neutraliser le liquide en y plaçant des fragments de craie ne suffit pas toujours ; il vaut mieux neutraliser par la soude en présence de phénolphtaléine,

Personnellement, je me suis surtout servi comme fixateurs des liquides de Carnoy, de Zenker et de Flemming.

Inciusion. — Y'ai surtout utilisé la méthode des coupes à la paraffine. Mais pour pouvoir étudier les rapports du pigment purique avec le pigment jaune, qui est soluble dans l'alcool, le xylol et le chloroforme, j'ai dû pratiquer aussi des coupes à la congélation, après fixation au formol neutralisé, par exemple.

Coloration.— L'hématoxyline s'est malheureusement révélée comme un colorant inutilisable. Dans la méthode régressive, lors du passage dans l’alun de fer, la guanine est dissoute et Les guanophores ne peuvent alors que difficilement être distingués des autres cellules. Dans la méthode de Weigert, le perchlorure de fer contenant toujours des traces d'acide chlorhydrique dis-

sout également le pigment.

Toutes les autres colorations courantes peuvent être employées ; l'acide picrique, qui doit être rejeté comme fixateur, peut être utilisé comme colorant par suite de la rapidité de son temps d'action dans ce dernier cas.

Examen à l'état frais. — J'ai complété et vérifié toutes les observations que je faisais sur des pièces fixées par de nombreux examens de tissus frais. Cette précaution est indispensable pour dépister les artefacts et pour faire un contrôle sérieux des résultats expérimentaux. J'ai examiné tantôt des fragments de peau, placés dans l'eau entre lame et lamelle, tantôt l’animal (têtard) vivant et entier, après l’avoir immobilisé par une trace d’anesthésique.

Je veux signaler ici le grand avantage qu'on trouve à étudier des étalements, plutôt que des coupes, lorsqu'il s'agit de cellules pigmentaires. Celles-ci, habituellement ramifiées dans un plan parallèle à la surface de la peau, n’ont qu'une faible épaisseur ct apparaissent souvent, en coupe transversale, réduites à une trainée de grains. Même pour des études nucléaires, j'ai préféré utiliser des étalements dont certains (périt ine) ont, du reste, une minceur et une transparence très suffisantes pour être examinés à l’immersion.

Lorsqu'on veut avoir un bon étalement de la peau d’un têtard, il est nécessaire de débarrasser celle-ci de l’épiderme fortement mélanique qui la recouvre et qui gêne beaucoup l'observation. Dans ce but, j'essuyais mes têtards, avant de les dépouiller, avec un linge un peu rude, qui enlevait mécaniquement les couches de cellules superficielles sans altérer les tissus sous-jacents.

La récherche des guanophores est particulièrement facilitée par les propriétés physiques de leur contenu. Les cristaux de ces cellules prennent à l'examen sur fond noir un aspect brillant tout à fait caractéristique. On peut beaucoup plus simplement réaliser le même aspect en inferposant un écran entre le miroir du microscope et lasource lumineuse (éclairage oblique). On voit alors étinceler, comme autant d'étoiles, les guanophores de la préparation. Seules les cellules très jeunes, dont les cristaux sont encore de petite taille, ne présentent pas le phénomène. Ce procédé rend les plus grands services lorsqu'il s'agit de se rendre compte rapidement de l'abondance, de la répartion, de l'état de contraction ou d'expansion des guanophores,

Il ne peut être utilisé que pour des grossissements assez faibles et pour des préparations suffisamment épaisses (étalements, ou coupes inférieures au 1/200°).

D'autre part, l'examen des guanophores en lumière polarisée fournit de précieux renseignements sur les propriétés optiques de leurs cristaux. À faible grossissement, la méthode a les mêmes avantages que la précédente. Mais elle permet en outre d'employer de forts grossissements et d'étudier en détail la forme et le groupement des cristaux de guanine.