CARACTERES DE L’'AGENT PATHOGENE
L'agent infectieux responsable de la maladie dont nous venons d'étudier l’évolution est un virus dont voici les caractères principaux :
VISIBILITÉ. — Il n’est pas visible sur frottis, non plus que sur coupes, traités par les colorants d’aniline ordinaires, par le Giemsa ou ses dérivés. Les méthodes de Castaneda ou de Macchiavello, si pratiques pour la mise en évidence rapide des Rickettsias, ne réussissent pas mieux, non plus que l’imprégnation argentique ou l’ultra-microscope.
CuzTures. — Aucune culture d’un microbe particulier n’a été obtenue en ensemençant le sang, les organes ou les humeurs en bouillon, bouillon-sérum, sur gélose, gélose sanglante, en aérobiose ou en anaérobiose. Ces échecs se sont renouvelés un très grand nombre de fois, la stérilité du sang, de la rate ou de quelque autre organe des animaux sacrifiés ou morts ayant toujours été éprou-
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vée. Des microbes d'infection secondaire n'ont cultivé que de façon exceptionnelle, et ce fait est d'autant plus à noter que, dans le même laps de temps, il n’en a pas été de même avec des cobayes inoculés de typhus historique.
Aucune tentative de culture en présence de cellules en survie, ou sur des œufs incubés n’a encore été faite.
FizrraBiciré. — Les émulsions centrifugées et filtrées sur bougies Chamberland perdent une grande partie de leur virulence. Le filtrat n’est cependant pas inactif, comme le montrent les expériences suivantes prises comme exemples.
Une émulsion à 1/100 en bouillon de la rate du cobaye M 9%, centrifugée trente minutes à 6.500 tours et conservée 20 heures à + 4°, est inoculée à dose de 1 cc. sous la peau du cobaye S 77. Elle lui donne, au bout de 48 heures, une fièvre atteignant 41° à plusieurs reprises et durant 13 jours.
La même émulsion passée à travers une bougie L. 2, injectée à dose de 3 cc. sous la peau du cobaye S 72 lui donne, à partir du 5° jour, une fièvre qui persiste 5 jours &.
Le filtrat de L 2, passé à nouveau sur L 3, est inoculé à la même dose de 3 cc. sous la peau du cobaye S 73, qui fait trois poussées fébriles. Les deux premières, les 10° et 11° jours et le 17° jour, sont assez faibles ; la troisième, les 21° et 22 ;j., est plus forte et atteint 41°. Les deux cobayes S 72 et S 73 éprouvés au bout d'un mois sont immuns.
Le passage à travers des membranes calibrées de collodion (Gradocol) retient une quantité encore plus grande de virus.
Une émulsion à 1 % en bouillon de la rate du cobaye N 57 est centrifugée dans les mêmes conditions que la précédente
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et fait preuve d’une virulence du même ordre. On la filtre successivement à travers 6 à 8 mm. de pâte de papier filtre, puis à travers une membrane de Gradocol de 800 uu pour la dégrossir, et enfin à travers une membrane de 490 uu. Le dernier fitrat tel quel ou dilué, est inoculé (1 cc.) sous la peau de 5 cobayes. S 68 et P 46 qui ont reçu le liquide non dilué et dilué au 1/10 (soit 1/100 et 1/1.000 par rapport à la rate) meurent accidentellement. Le filtrat dilué à 1/100 (soit 1/10.000 de la rate) fait monter la température de C 156 du 9% au 16° jour, tandis que, dilué à 1/1.000 (1/100.000 de la rate), il donne à peine 40° le 16° jour au cobaye S 75. C 156 et S 75 éprouvés le 47° jour ne réagissent absolument pas.
Le cobaye P 55 qui a reçu du filtrat dilué à 1/10.000 (un millionième de la rate) fait un peu de fièvre du 16° au 18& jour, mais réagit nettement à l'épreuve.
Les filtrats ayant traversé une membrane de 160 uu, dilués ou non, ne donnent ni fièvre, ni immunité.
CoxsERVATION. — D'une façon générale le virus D se conserve bien. On peut sans grand inconvénient garder à la glacière (+ 4°), un temps assez long avant de l'inoculer, une émulsion en eau salée (1) contenue en am-
poules scellées.
L'émulsion à 1 % de rate du cobaye M 9, qui au bout de 20 heures montre la virulence.indiquée au paragraphe précédent, inoculée 18 jours plus tard au cobaye S 96 provoque après 36 heures d’incubation une fièvre de 12 jours atteignant 4198. (Lésions typiques inguinales, spléniques et pulmonaires après 24 heures d’apyrexie), La même émulsion, conservée de la même façon pendant 213 jours et inoculée à dose de 6 cc. sous la peau du cobaye N 188 lui donne au bout de 40 heures
(1) De préférence tamponnée à pH 7,5 par addition d’un mélange de phosphates.
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< PE une fièvre intense ; et des lésions typiques (sacrifié au 9% jour avec 4105).
La conservation paraît un peu moins bonne en récipients simplement bouchés au coton.
À des températures.plus élevées, le virus perd peu à peu de son activité.
La même émulsion de rate à 1 + du cobaye M 99 maintenue pendant 18 jours en ampoules scellées à la température du laboratoire (18 à 20°) ne donne plus de fièvre au cobaye que du 8° au 12 jour (immunité consécutive). Maintenue le même temps à l’étuve à 37°, elle ne donne plus ni fièvre ni immunité.
La glycérine neutralisée ei diluée à 50 % avec du sérum physiologique stérile, ou mieux phosphatée suivant la technique de P. Lépine, n’est pas nocive. Elle conserve bien les fragments d'organes qui y sont immergés. La mixture à parties égales de glycérine neutralisée et d’'émulsion virulente à 1/100, maintenue de 18 à 213 jours à + 4° est, à volumes correspondants, aussi active que l’émulsion non glycérinée conservée de même. A la température de + 18° à + 20° et surtout de + 37°, l’adjonction de glycérine paraît plutôt favorable, le mélange glycériné moculé après 18 jours d’étuve donnant encore au cobaye une maladie légère suivie d’immunité.
La congélation et le maintien à -15-18° est le procédé de conservation que nous avons le plus couramment utilisé, à cause de la sûreté et des facilités de travail qu'il offre. Les rates, cerveaux, poumons de cobayes ou de singes, contenus dans de larges tubes bouchés au caoutchouc ou dans de simples boîtes de Petri, sont déposés dans un appareil Frigidaire réglé à la température indi-
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quée. On peut très aisément prélever avec rapidité et à tout moment les fragments nécessaires et remettre en place l’organe restant qui n’a pas eu le temps de se dé- congeler. Il semble que la conservation est d'autant meilleure que le fragment d'organe congelé est plus volumineux. Bien qu'un accident ait ramené très au-dessus de 0° pendant près de 20 heures notre appareil frigorifique, nous avons noté entre autres les résultats suivants, après inoculation sous-cutanée au cobaye aux doses indiquées :
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Conservation Organe Dose Incubation Fièvre (jours)
292 Cerv. du singe 117 10 cg. 3 jours Intense
ID LL CETVEAUL CO). 0 T:89 1 gr. — Nulle (1) 235 Rate cob. T89 15 cg. Nulle (2) 210 Rate cob. S63 20 cg. 2jours£ Intense 210 Poumons cob. S64 20 cg. 4 jours Intense 157 Rate cob. R55 20 cg 3 — Intense 111 Rate cob. NOR P0RCL NS Intense
Les passages faits à partir des cobayes inoculés avec ces doses énormes d'organes conservés ramènent très rapidement la pleine activité du virus.
RÉSISTANCE A DIVERS AGENTS CHIMIQUES. — Le virus D qui se conserve bien, résiste également de façon remarquable à de nombreux agents.
La bile est sans action notable. Cette sécrétion peut d’ailleurs être virulente elle-même chez l'animal inoculé.
(1) Absence d’immunité consécutive.
(2) Immunité consécutive.
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Mélangée à parties égales avec de la bile de bœuf neutralisée et stérilisée, une émulsion à 1/100 de rate du cobaye M 99 ne semble rien perdre de sa virulence, aussi bien après 20 heures qu'après 18 jours de séjour à + 4°. Après 213 jours à la glacière, la même émulsion biliée provoque une fièvre intense au bout de 6 jours d’incubation chez le cobaye N 19%, qui en à reçu 1 cc. sous la peau; l'animal, sacrifié après 3 jours de fièvre, présente des lésions typiques.
L'acide phénique à 1 et 2 %o, agissant pendant 20 heures à + 4° sur une émulsion de rate à 1 %, atténué légèrement le virus (incubation plus longue, fièvre plus courte, À 5 %o, l'effet est encore plus net et l'incubation est portée à 10 Jours. À 10 %o la fièvre provoquée est presque négligeable, mais elle est toujours suivie d’immunité.
Il en va à peu près de même avec le formol.
A une émulsion à 1/1.000 de rate du cobaye M 66, on ajoute du formol aux doses de ?, 3, 4 et 5 pour 1.000, et on laisse 8 jours à + 4°. On inocule ensuite 2 cc. de chaque mélange sous la peau de deux cobayes. Alors que les témoins (virus non formolé) font une fièvre de 7 à 8 jours à partir du 4° ou du 6° jour, les cobayes virus-formol sont fébriles à partir du 8°-9° jour et pendant 5 jours au plus. Tous sont immunisés.
Quand on porte la dose de formol à 10 %o, même si le temps de contact à la glacière n'est que de 20 heures pour une émulsion à 1/100, le cobaye inoculé ne fait pas de fièvre, mais devient immun.
L'action de l’éther et du chloroforme a été essayée dans les conditions suivantes :
À 10 cc. d’une émulsion à 1 % de rate virulente, on ajoute 4 cc. de chloroforme, on agite violemment et on laisse reposer
