DOUZIEME LEÇON

(i" février 1879) Cellules connccUves de In cornée.

Étude des cellules de la cornée à Vaide des imprégnations d'argent. — Méthode à suivre pour démontrer que les espaces clairs réservés par l'argent correspondent réellement à des cellules. — Formes desnoyauxdcs cellules de la cornée.

Les cellules de la cornée sont-elles individualisées ou fondues en un réseau? — Ce réseau provient-il de la fusion de cellules distinctes, ou de la division incomplète d'une cellule ou d'un certain nombre de cellules qui se seraient multipliées? — Importance de cette question au point de vue de la morphologie cellulaire.

FAude des cellules de la cornée par la méthode de l'or. — Procédé du jus de citron. Conditions dans lesquelles il réussit le mieux. — Forme et disposition des cellules. — Leurs deux types principaux : type corpusculaire (lézard) ; type membraniforme (rat). — Démonstration des crêtes d'empreinte sur îles coupes perpendiculaires à la surface de la cornée. — Preuve que l'action prolongée de l'or nuit à la coloration des cellules.

Messieurs,

Nous avons vu, dans la leçon préccdenle, que le nitrate d'argent, dans les imprégnations dites négatives, se réduit dans d(>s espaces remplis d'albumine plasmatique. Nous sommes ainsi arrivés à une conclusion diamétralement opposée à colle de Recklinghausen. Cet auteur pensait en effet que, dans les imprégnations

IMPRÉGNATIONS d'aRGIÎNT. 183

négatives, le nitrate d'argent ménage les canaux. Or, ce réactif ne les ménage pas quand ils sont remplis d'un li([uide albumineux ou de plasma sanguin, c'est-à-dire quiind ils ont une certaine analogie avec les canaux du suc de Uecklingliausen ; il les ménage au contraire lorsqu'ils sont occupés par des cellules ou de l'albumine protoplasmatique.

Avant d'en finir avec les imprégnations au nitrate d'argent, je dois encore discuter avec vous deux (luestions importantes qui s'y rattachent. La première est celle-ci: les grands espaces clairs, les confluents du réseau ménagé en blanc, correspondent-ils à des cellules, ou bien n'ont-ils aucun contenu figuré ?

Sur la plupart des préparations on ne peut rien distinguer dans leur intérieur. Si l'on y reconnaissait des noyaux, il serait prouvé que ces espaces correspondent à des cellules.

Au premier abord, on serait tenté de croire qu'il suffit pour cela de colorer la préparation par le carmin. Mais, en faisant l'expérience, on se convaincra qu'après l'imprégnalion par le nitrate d'argent le carmin ammoniacal, le carmin neutre ou le picrocarminalene produisent qu'une coloration diffuse. Pour faire apparaître les noyaux, il faut déterminer l'élection de la matière colorante au moyen d'un acide. Or, parmi les acides, la plupart dissolvent l'albuminate d'argent et font par conséquent disparaître l'imprégnation. Aussi est-il impossible d'employer les acides acétique et forinique, dont on se sert généralement pour faire apparaître les noyaux.

184 ci-Li.ri.Ks r.()\M:cTiVfc;s ni- i..\ coum-k.

Il y a jiliis (le dix ans (i), j'ai proposé une méthode qui coiidiiil au l'ésultat désiré. Elle consiste à traiter la préparation par le picrocarmiiiated'ainnioniaque de manière à obtenir une coloration rouge difTuse, puis à la plonger pendant une demi-heure dans une solution d'acide oxali(pie à 10 pour 100 et à la monter ensuite dans la glycérine. A la suite de ce traitement, les noyaux deviennent nettement visibles; sur la préparation que j'ai disposée sous un de ces microscopes, vous pouvez ?'econnaître cpi'il s'en trouve un dans l'intérieur de chacun des confluents limités par l'argent.

Vous serez frappés des formes variées et bizarres que présentent ces noyaux, et vous serez tentés sans doute de les attribuer au traitement compliqué auquel la cornée a été soumise. 11 serait possible, en effet, que l'acide oxalique déformât les noyaux ; aussi faut-il recourir à un autre moyen pour s'assurer que telle est bien leur forme normale. Voici la méthode que je vous recommande; elle est applicable aux batraciens anoures aussi bien qu'aux urodèles, mais il vaut mieux choisir ces derniers, parce que, chez eux, les cellules de la cornée étant plus étendues, les noyaux sont également plus grands :

L'œil d'un triton ou d'une salamandre est enlevé et plongé tout entier dans une solution de purpurine (2); après qu'il y a séjourné vingt-quatre heures, on sépare la cornée, on chasse avec le pinceau ou l'on racle avec le

(1) Procédé pour faire .ipparailn: les miyaux ilaiis les tissus imprégnés (Pabarfl par le nitrate (Pargent (Arcldi'. de phiisiolorjie, ISG8, t. [, p. GOOj.

(2) Voy. Traité lechnuine d'Itislolonie, p. 2S(i.

IMPRÉGNATIONS d'aKGKNT. I (ST)

scalpel l'épilhélium antérieur et répithélium postérieur, et on la place de nouveau clans la purpurine pendant vingt-quatre heures. Au bout de ce temps, la coloration est produite et les noyaux sont fixés dans leur forme. La préparation, montée dans la glycérine, se conserve par-

Via. 18. — Coinde du triton i-iôlé, fixcc et colorée par la solulion île purpurine, et conserve'c dans la glycérine.

faitement. Sur celle que j'ai fait disposer sous \os yeux (voy. fig. 18), vous remarquerez que les noyaux ont les formes les plus variées. Les uns sont arrondis, d'autres elliptiques, d'autres très allongés ; certains présentent des échancrures profondes qui les divisent en deux parties

|!^(> CELLULlîS CONNKCTIVES DK LA CORNÉE.

inégales et dissumblables. En un mot, ces noyaux n'ont aucune forme réguliènî. lisse montrent entourés d'une zone granuleuse correspondant au protoplasma des cellules qui les renferment.

Je passe à la seconde question. Les cellules de la corni'e sont-elles distinctes ou bien sont-elles fondues les unes avec les antres de manière à former un réseau protoplasmiijue continu ?

Hoyor a résolu la question dans le sens de l'individualité des éléments cellulaires (voy. p. 72). Pour apprécier l'exactitude des conclusions de cet histologisle, je me suis placé d'abord dans les conditions qu'il avait indiquées, et, comme lui, j'ai examiné les couches profondes de la cornée du jeune chat, après les avoir imprégnées parle nitrate d'argent. J'ai obtenu des résul-

■M ri

FiO, 1!l. — Cuiiclii' |iri>l'i)iiili' t]r l.i Cumul- Ju juuin; clial iiii|irogiioc par le nili'atc d'ariroiit.

tats semblables à ceux qu'il a signalés, ainsi (jue vous pourrez le voir vous - mêmes sur cette préparation (fig. 19) : les cellules fixes de la cornée, ménagées en clair, sont ramifiées et largement anastomosées de ma-

IMPRÉGNATIONS l)'AllGliNT. 187

liière à former un réseau, mais elles sont séparées les unes des autres par des lignes intercellulaires semblables à celles qui limitent les cellules dans les endothéliums imprégnés d'argent.

Kxaminez attentivement des cornées d'autres animaux sur lesquelles l'imprégnation négative a bien réussi, vous y trouverez toujours en certains points des lignes noires qui séparent deux cellules et qui sont l'indice d'un ciment intercellulaire.

Mais, si ces lignes se montrent d'ordinaire dans les couches profondes de la cornée du jeune chat, si elles se renconlrenl également par places chez d'autres animaux, il n'en est pas moins vrai qu'en général elles sont rares. Nous savons en outre que les cellules fixes de la cornée isolées à l'aide de l'acide sulfurique se montrent sous la forme d'un réseau continu, et dès lors il n'est guère possible d'admettre qu'elles sont absolumt'ut individiuiHséos et qu'elles sont simplemciit soudées par un ciment analogue à celui (|ui unit entre elles les cellules endothéliales.

Je ne veux pas soutenir cependant qu'il y ait dans la cornée un seul réseau de cellules fixes ; il est probable qu'il y en a plusieurs, d'étendue variable, soudés les uns aux autres au niveau des lignes manifestées par Timprégnation d'argent.

Cette question mérite de nous arrêter quelques instants encore, à cause de sa portée générale. En effet, si l'on admet qu'il existe des réseaux cellulaires formés par un certain nombre de cellules fondues ensemble, il se présente à l'esprit deux hypothèses pour en expliquer la formation.

D'après la première, les cellules d'abord individualisées se seraient ensuite soudées et fusionnées les unes avec les autres. D'après la seconde, au contraire, un réseau proviendrait tout entier d'une seule cellule qui se serait séparée incomplètement en un grand nombic de parties, contenant chacune un noyau issu du noyau primitif par voie de division.

Je suis porté à croire que cette seconde hypothèse est la meilleure. Cependant, cooime je n'ai pas suivi le développement du réseau cellulaire de la cornée chez l'embryon, je ne pourrai l'appuyer que sur des preuves indirectes.

En général, chez les vertébrés, lorsque des cellules se sont unies pour former des fibres ou des réseaux, elles ne sont pas fondues les unes avec les autres, mais simplement soudées entre elles.

C'est ainsi qu'on peut démontrer l'individualité des cellules qui constituent le réseau myocardique, soit au moyen de la potasse à 40 pour 100 qui les isole, soit avec le nitrate d'argent qui décèle le ciment qui les unit.

A l'aide des mêmes méthodes ou peut établir que certains réseaux musculaires lisses sont formés de cellules distinctes. Enfin, les différents segments qui composent la membrane d'enveloppe des tubes nerveux ne sont jamais complètement fondus, et l'on peut toujours reconnaître au moyen du nitrate d'argent les anneaux de matière cimentante qui les séparent.

Je dois maintenant étudier avec vous les cellules fixes de la cornée au moyen de la méthode de l'or. Cette mé-

MbriioDic DE l'or. 189

thode est celle c^iii en donne les préparations les plus belles et les plus démonstratives.

En employant l'un quelconque des procédés qui ont été publiés, ctîlui de Cohnheim, ceux de Gerlach, d'Hénocque et de Lœwit, on peut obtenir de très belles préparai ions dans lesquelles les cellules sont parfaitement nettes. Seulement, on ne les obtient pas d'une façon constante; c'est de temps à autre, et pour ainsi dire par hasard, que l'on réussit. Suivant des conditions qui ne sont pas encore déterminées, la coloration des cellules varie depuis le rose jusqu'au noir en passant par tous les degrés du violet.

On obtient déjà des résultais beaucoup plus constants en employant un procédé que j'ai indiqué il y a un an environ (1).

Il consiste à plonger la cornée qu'on .vient d'enlever dans du jus de citron fraîchement exprimé et (iltré sur de la flanelle. Après qu'elle y a séjourné cinq minutes, elle est lavée r.ipidement à l'eau distillée et mise pendant un quart d'heure à vingt minutes dans quelques centimètres cubes d'une solution de chlorure d'or à 1 pour 100; puis elle en est retirée, et la réduction s'opère à la lumière du jour dans de l'eau légèrement acétifiée (deux gouttes d'acide acétique pour 50 grammes d'eau).

Entrons maintenant dans quehpies détails. Je dois vous dire d'abord que, chose bizarre et inexplicable au point de vue chimique, plus la cornée reste longtemps

(I) De la inélkode de l'or et den ternii liaisons des nerfs da:is les muscles lisses {Comptes rendus de l'Acad. des sciences, G mai 1878).

l'JU CKl.LUI.l'S CONNECllVKS Dlî LA CORNlilî.

(Unis le sel d'or (au ilelà d'une certaine limite), moins on a de chances de voir les cellules se colorer. Ainsi, par exemple, si on a laissé une cornée de lapin pendant plus d'une heure dans le chlorure d'or, quel que soit le procédé de réduction que l'on emploie ensuite, on ne verra pas se manifester les cellules. Ce fait nous paraît singulier, ])arce que, en général, c'est précisément rinverse qu'on observe dans la coloration des éléments anatomiques; mais il faut bien remarquer qu'ici nous avons affaire à la réduction d'un métal, ce qui est bien différent de l'action d'une matière colorante proprement dite.

De tous les procédés d'application de la méthode de l'or, celui qui réussit le mieux pour démontrer et bien colorer les cellules de la cornée chez la grenouille et chez les autres i)atraciens est le suivant :

La cornée enlevée est placée dans du jus de citron fraîchement exprimé et filtré sur de la flanelle; après (ju'elle y a séjourné cinq minutes, elle en est retirée, lavée à l'eau distillée et plongée pendant un quart d'heure dans ^ à 3 centimètres cubes d'une solution de chlorure double d'or etde potassium à i pour 100 ; puis elle est lavée une seconde fois à l'eau distillée et mise dans "^ à 3 centimètres cubes d'un mélange d'eau (■{ d'acide formique : eau ?», acide formique i. Elle y est aha'idonnée pendant vingt-quatre heures à l'abri delà lumière; puis elle est placée dans l'eau distillée et l'on enlève au moyen du pinceau IN'pilhélium antérieur et l'épilhélium postérieur, ou du moins ce qui en est resté. La cornée est alors entaillée pour (pi'on puisse

MiaiIODE DE l'or. 191

l'étaler à phil sur la lame do verre. En la recouvrant d'une lamelle et en mettant de la glycérine on obtient une préparation persistante.

Dans ces préparations, les cellules sont d'un rose violacé, cl comme la substance fibrillaire de la cornée est parfaitement incolore, on peut les étudier aussi aisément que si elles étaient lop^ées dans une masse homogène et transparente.

Je ne m'étendrai pas longuement sur la description de ces éléments cellulaires, puisque vous les connaissez déjà. On distingue parfaitement (fig. 20) les détails de

1"'1G. '20. — Cornée de l:i yiciioiiille vpi'lo, Iraile'c! successivemoiit pai le jus de citroa, le cliloriire d'or et de |iotassium et l'acide i'ormique.

leur structure : les prolongements y sont bien dessinés, les crêtes d'empreinte bien marquées, et les noyaux incolores tranchent sur le fond violacé du corps cellulaire. Les différentes cellules sont anastomosées les unes avec les autres par des prolongements plus ou moins

192 CLI.l.liLLS CONNECTIVLS 1)K LA COHNKi:.

longs, plus ou moins étendus, plus ou moins aplatis el dont la direction se confond avec celle des fibres constitutives des lames entre lesquelles ils sont compris. Ces prolongements sont donc parallèles dans un même plan. Mais, si on les considère dans les plans successifs, on voit qu'ils changent d'orientation suivant un angle qui est à peu près le môme d'un plan à un autre.

Lorsqu'on abaisse un peu rapidement l'objectif, l'image que donnent les cellules et leurs prolongements paraît tourner et si, par exemple, on observe une corn('e par sa face postérieure, (juel que soit le point de son étendue que l'on examine, cette rotation paraît toujours se faire de gauche à droite, c'est-à-dire dans le sens du mouvement des aiguilles d'une montre.

J'ai disposé sous ces microscopes les cornées de divers animaux, de manière que vous puissiez bien les comparer. En examinant la cornée du rat, du cheval, du bœuf, du pigeon, de la grenouille, du lapin, du cochon d'Inde, du lézard, vous serez frappés de la différence qu'y présentent les cellules. Vous pourrez en reconnaître deux types : le type que j'appellerai corpusculaire, parce ([u'i! possède une certaine analogie avec le corpuscule osseux ; et le type auquel je donnerai le nom de membranifonnc, pour indi(|uer que les, cellules y sont étendues en membranes et réunies par de larges prolongements rubanés.

Plus le type corpusculaire est marqué, plus les cellules sont petites et raies. Ce type est bien accusé chez le lézard, où elles sont peu nondjreuses, anastomosées par de minces prolongements filiformes, laissant à dé-

MliTIIODIi Dli L OU.

couvert entre elles une grande étendue de substance fondamentale.

FiG. 21. — Cornée du pigeon trailéc par le jus de citron et le chlorure d'or. Coupe parallèle à la surface.

Chez les oiseaux, du moins chez le pigeon et le canard, la dispo.sition des cellules est à peu près !a môme (fig. 21).

Chez le cheval et chez le bœuf, les cellules sont plus grandes et leurs prolongements plus aplatis.

RANVIER. — Anat. liéMérale.

194 MÉTHODE DE l'oR.

Le type membraniforine est très accusé chez le rat, moins marqué chez le lapin, chez le chien et chez l'homme.

La grenouille occupe dans celte classiQcalion une position intermédiaire; les cellules y sont assez aplaties pour être appelées membraniformes, et cependanl leurs prolongements sont si minces et si ramifiés qu'ils les rapprochent du type corpusculaire.

Étudions un peu plus en détail la disposition des cellules connectives chez le rat (fig. 22).

Aplaties et membraneuses, ces cellules sont unies les unes aux autres par des prolongements rubanés presque aussi larges qu'elles-mêmes, de sorte qu'elles ne laissent entre elles que des mailles assez petites et généralement arrondies. Elles possèdent des noyaux, (|ui sont incolores ou fortement colorés suivant le procédé qu'on a mis en usage, mais qui se détachent toujours assez nettement sur le fond violacé du corps cellulaire. En certains points, les rubans membraneux qui réunissent les cellules sont percés de trous simples ou réticulés.

Quelquefois on voit naître d'im point du réseau cellulaire un prolongement protoplasmique mince qui va rejoindre un autre point du même réseau, faisant ainsi exception à la forme membraneuse des prolongements en 2:énéral.

Chez le lapin (lig. 28), le type membraniforme des cellules est moins prononcé que chez le rat. A côté des prolongements aplatis et rubanés, on en observe un certain nombre qui sont minces et grêles. Ces prolongements, comme les cellules elles-mêmes, portent sur

CELLULES CONNECTIVES DE LA CORNI'E.

.imw'"'

FiG. ''2^2, — Cellules lixes do lu cornée du rat albinos, iiiiiireyiiées pur l'or après l'acliou du jus de citron. La réduction a été obtenue dans l'eau acétifiée et sous l'influence de la lumière.

FiG. 23. — Cellules fixes de la cornée du lapin, observées dans une lame do cotte membrane isolée par dissociation, après l'action du jus de citron et du chlorure d'or. La réduction du sel d'or a ét(; obtenue dans l'eau acétifiée.

196 CELLULES CONXECTIVES DE LA COUNÉE.

leurs deux faces des crOles d'empreinte ou du moins des stries plus foncées que nous avons regardées jusqu'ici sans hésitation comme des crêtes d'empreinte.

Il serait cependant possible, à la rigueur, que l'épaisseur plus grande de la cellule au niveau de ces stries fût due à un pli, ou môme que ces stries n'appartinssent pas du (oui à la cellule et provinssent, par exemple, de fibres qui leur seraient superposées. Dans des faits de ce genre, on ne saurait prendre trop de précautions pour se mettre à l'abri des erreurs, et, pour s'assurer de leur véritable signification, il est indispensable de faire varier autant que possible les conditions dans lesquelles on les examine.

Si les lignes foncées observées de face correspondent réellement à des crêtes saillantes qui s'élèvent du corps de la cellule, nous devons les retrouver sur des coupes perpendiculaires à la surface. Faisons l'expiTience : traitons une cornée par la méthode de l'or, de manière à en bien colorer les cellules; puis détachons- en des coupes minces perpendiculaires à sa surface et montons-les dans la glycérine.

Au premier abord, ces préparations (fig. 24) présentent une grande analogie avec les coupes faites après dessiccation et colorées au picrocarminate dVamnioniaque. On y reconnaît également les différentes lames superposées, séparées par des lits de cellules. Mais, en examinant plus attentivement, on remarque que de chaque cellule fortement colorée en violet se dégagent, perpendiculairement à sa surface et s'enfonçant dans la substance incolore des lames, un certain nombre de

MliTHODE DE l'oR. 197

piquants également violets qui semblent nnplantés dans la cellule conmie les poils el'une brosse. Cette comparaison est d'autant plus juste que la plupart des cellules ne présentent de ces [)i(piants que d'un côté. Toutes cell^^s (pii font partie d'une même série ont leurs piquants du même côté, du côté superficiel par exemple, tandis que celles de la série suivante les ont du côté profond. Enfin, certaines cellules en présentent des deux côtés.

FiG. 24. — Cornée (lu lapin traiU'c par c jns de citron et le chlorure Coupe perpendiculaire à la surface de la membrane.

A un fort grossissement, on reconnaît, en abaissant el en élevant successivement l'objectif, que ces piquants correspondent à des saillies qui se continuent dans l'épaisseur de la préparation. Ce ne sont donc pas des filaments, mais des lames, perpendiculaires à la surface de la coupe.

Dès lors on comprend aisément pourquoi ces saillies ne s'ob.servent généralement que sur un des côtés des cellules. L'examen de la cornée à plat nous a a|)pris que

les crêtes d'empreinte de l'une des faces sont à peu près perpendiculaires à celles de l'autre. Si donc la coupe a atteint les crêtes d'empreinte de la face supérieure, par exemple, perpendiculairement àleui* direction, leur section se montrera comme un piquant, tandis que celles de la face inférieure, étant parallèles à la direction de la coupe, apparaîtront seulement lorstjue l'on abaissera l'objeclif à leur niveau, et cela sous la forme de petits prolongements membraneux .

Une cellule se montre cependant avec des saillies ou des crêtes d'empreinte sur ses deux faces, lorsque la coupe a été faite obliquement aux fibres des deux lames entre lesquelles elle est comprise.

Je dois revenir maintenant sur un point de technique que je n'ai fait qu'effleurer. Je vous ai dit que si la cornée séjourne trop longtemps dans le chlorure d'or les cellules ne se colorent pas. Je vais vous en donner la preuve, au moins d'une façon indirecte.

J'ai pris une cornée de cheval dont j'ai découpé un segment comprenant toute l'épaisseur de la membrane et ayant 1 centimètre 1/2 de largeur. Je l'ai plongé dans le jus de citron pendant cinq minutes, puis dans le chlorure d'or pendant deux heures.

Ensuite je l'ai lavé dans l'eau distillée, et la réduction a été obtenue dans l'eau acétifiée, sous l'influence de la lumière du jour. Après vingt-quatre heures elle était complète. J'ai dissocié la cornée en lames, que j'ai examinées successivement, en m'attachant surtout à l'observation de celles de la couche moyenne. J'ai disposé sous un microscope simple une de ces dernières, afin

MÉTHODE DE l'oU. 199

que vous puissiez vous rendre compte de la manière dont ]'or a agi.

Vous y remarquerez au voisinage du centre un anneau coloré en violet, tandis que le centre lui-même et les parties périphériques sont restés incolores. Un examen plus attentif vous montrera que cet anneau est formé de grains colorés ; ce sont les cellules fixes de la cornée, imprégnées seulement dans cette zone restreinte.

Or il est évident que le chlorure d'or a été plus longtemps en contact avec les parties périphériques qu'avec les centrales, oii il n'est arrivé que plus tard. Au centre même il n'a pas pénétré du tout, et c'est pour cela que les éléments cellulaires n'y sont pas manifestés. Mais si, tout autour de l'anneau bien limité où la réduction s'est produite, les cellules sont restées incolores, cela ne peut être attribué qu'à l'action trop longtemps prolongée du seld'or. Cette seule préparation suffit donc à vous démontrer que, passé certaines limites de la durée d'im mersion, l'or ne colore plus les éléments cellulaires.