ONZIEME LEÇON

(30 janvier 1879) Celluloïd conncctiTCB de la cornée.

Forme et rapports des cellules isolées par le procédé de 11 is, — Leurs crêtes d'empreinte. — Critique de riuterprétatiori de Sciiwciggcr-Seidel et de celle de His,

Elude des cellules de la cornée à l'aide des imprégnalmis d'argent. — Théories de His et de Ueclilingliausen. — Procédé à suivre pour obtenir une bonne imprégnation — Cornée de la grenouille. Forme des cellules. Coloration du fond.

Étendue relative des cellules dans les cornées de différents animaux.

Imprégnations positives. Elles ne se produisent pas d'emblée. Manière de les obtenir. Les imprégnations positives et négatives révèlent les mêmes formes de cellules.

Discussion des imprégnations négatives. — Explication de la coloration plus intense du fond au voisinage immédiat des cellules. — Les espaces réservés en blanc correspondent à des cellules, les espaces colorés à de l'albumine plasmuti(jue ou intercellulaire.

Mes.sleurs,

Nous avons abordé dans la dernière leçon l'élude des cellules fixes de la cornée. Je vous ai dit pourquoi il convient de les observer d'abord à l'aide de diverses méthodes avant de les examiner à l'état vivant dans leur propre plasma.

J'ai commencé à vous indiquer ces méthodes. Je vous ai parlé du procédé de His qui permet d'isoler les cel-

CRKTKS d'empreinte. | ()0

Iules en dissolvant le tissu corncen, et je vous ai signalé les perfectionnements qu'on peut y apporter. Je n'y reviendrai pas. Cependant, je vous dois encore quelques renseignements sur la forme et les rapports de ces cellules.

?]lles sont anastomosées les unes avec les autres et forment soit de petits réseaux séparés, soit un seul réseau interrompu par places et comme partiellement déchiré. Elles présentent des crêtes d'empreinte, les unes à leur face supérieure et parallèles entre elles, les autres à leur face inférieure et dirigées perpendiculairement aux premières.

Bien qu'il soit facile d'observer ces crêtes d'empreinti; dans des préparations faites par la méthode primitive de His, ni cet auteur, ni ses successeurs n'en avaient reconnu l'existence. Cependant, la description que Schweigger-Seidel a donnée des cellules fixes de la cornée laisse soupçonner qu'il en avait aperçu quelque chose. Il pensLiit, ainsi que je vous Fai déjà dit (voy. p. 8*2), que ces cellules sont aplaties et possèdent sur une de leurs faces une lame mince et régulière, tandis que sur l'autre, au niveau du noyau, il existerait un amas de protoplasma inégal et muni de prolongements rayonnes. Si Schweigger-Seidel n'avait pas été séduit par certaines idées préconçues sur la forme et la nature des cellules de la cornée, il aurait reconnu qu'elles possèdent des rayons protoplasmiques sur leurs deux faces, et cette observation l'aurait certainement amené à comprendre autrement la constitution de ces cellules.

Les préparations des cellules de la cornée faites au

170 CELLlLliS CONNECTIVES DE LA CORXÉE.

moyen de l'acide sulfiiiiiiue sont certainement belles et jusqu'à un certain point démonstratives, mais elles ne tranchent pas toutes les difficultés et permettent des interprétations diverses. En isolant des cellules anastomosées. His croyait avoir démontré jusqu'à l'évidence l'existence d'un réseau plasmatique. Mais Recklinghausen ne se rendit pas; il soutint que l'acide sulfurique déterminait d'abord la coagulation d'un liquide albumineux contenu dans les canaux du suc et isolait ensuite le coagulum ainsi formé en dissolvant tout le reste.

Cette objection, qui parut forte à l'époque où elle se produisit, n'est plus soutenable aujourd'hui. Je ne veux pas cependant vous conseiller de vous ranger à l'opinion de His ; nous savons trop bien aujourd'hui que les cellules de la cornée ne sont pas creuses, pour être tentés de revenir à la théorie des cellules plasmatiques.

Mais continuons à passer en revue les différents modes de préparation qiti ont été applitiués aux cellules de la cornée.

Les observations et les expériences les plus importantes sur lesquelles Uecklinghansen a fondé sa théorie ont été faites à l'aide du nitrate d'argent.

Vous vous rappelez que His et Recklinghausen se sont disputé la priorité de l'application de ce réactif à l'étude de la cornée.

His était arrivé à obtenir des imprégnations négatives, c'est-à-dire dans lesquelles les cellules étaient réservées au blanc, et des imprégnations positives dans lesquelles,

IMPRl'GNATIONS d'aRGENT. 1 7'i

au contraire, la substance fondamentale étant incolore, les cellules étaient colorées. Il avait cru trouver dans ces faits la preuve que réellement les cellules étaient creuses et anastomosées par des canaux : dans le premier cas, ces canaux étaient ménagés; dans le second, l'argent se déposait dans leur intérieur et sur leurs parois.

Recklinghausen,au contraire, influencé déjà, comme je vous l'ai dit, par les notions nouvelles sur la constitution de la cellule formulées par Max Schultze, mais partageant cependant encore les idées de Virchow sur la circulation plasmatique, chercha à accorder ces deux conceptions. La trace de cette préoccupation se reconnaît dès son premier travail, puisque, comme je vous l'ai fait remarquer, il a pour objet de distinguer les parties creuses et les parties pleines (voy. p. 55). Il fui ainsi conduit à imaginer le système des canaux du suc, système plasmatique dans lequel les cellules, massives désormais, sont logées dans les points nodaux d'un réseau de canalicules.

Il est évident que His et Recklinghausen, tout en les interprétant de façon différente, avaient en réalité sous les yeux les mêmes faits. Aussi devons-nous, avant de critiquer ces auteurs, examiner à notre tour des préparations de la cornée faites au moyen du nitrate d'argent.

Pour imprégner la cornée par le nitrate d'argent, on peut avoir recours au procédé de Coccius (cristal de nitrate d'argent passé sur la cornée) ou à l'immersion dans une solution de nitrate d'argent à i pour 300 ou \ pour 500. L'imprégnation par immersion se fait mal

17^2 CELLULES CONNtCTlVIiS DE L\ CORNÉE.

si on laisse en place répithéliuin antérieur; d'autre part, si on l'enlève par le raclage, soit directement, soit après l'avoir soumis à l'action d'un jet de vapeur, comme l'a conseillé Recklinghausen, on altère les cellules fixes de la cornée.

Il vaut donc mieux avoir recours au nitrate d'argent solide que l'on fera agir sur la cornée entière. Voici quelques indications pratiques sur le mode d'opérer : L'œil de l'animal (grenouille ou tout autre vertébré) est enlevé tout entier ; un fragment de cristal de nitrate d'argent, saisi avec une pince, est passé rapidement et régulièrement sur toute la cornée. Pour lacoi'née de la grenouille, il suffit que le cristal soit promené deux ou trois fois à sa surface; pour une cornée épaisse, comme celle du lapin et encore plus pour celle du cheval ou du bœuf, il fciut agir beaucoup plus longtemps si l'on veut atteindre les couches profondes. La cornée est placée ensuite dans l'eau distillée et exposée à la lumière du jour. Au soleil, la réduction se fait rapidement; par les temps sombres, elle est beaucoup plus lente et ne s'effectue jamais d'une façon complète; néanmoins elle est d'ordinaire suffisante pour permettre de se rendre compte des faits.

Pour enlever l'épithélium, on peut ou bien racler fortement avec un scalpel, ce qui ne modifiera plus les cellules de la cornée désormais fixées dans leur forme ; ou bien placer la cornée pendant cinq minutes dans une solution d'acide acétique à i pour 100, qui ramollit les couches épilhéliales et permet de les enlever sans difficult*'. Entin la cornée est entaillée sur les bords

IMPRÉGNATIONS d'aRGENT. 173

OU divisée en frasçnients de manière qu'on puisse l'étaler entre la lame et la lamelle et l'observer à plat.

Examinons d'abord la cornée de la grenouille. Nous y remarquerons (fig. 16) sur un fond color«; les cellules réservées en blanc et des prolongenienls qui en partent

^-4-*^fè> & ^

FiG. d6. — Conicc de la grenouille vorte, imprdgncu ncgativemcnl p.jr le nitrate d'argent. L'irapre'gnatioii a été produite en loucliant la surface antérieure de lu corac'e avec un cristal do nilrate d'ar-TUt.

suivant deux directions perpendiculaires entre elles; ces prolongements sont munis de prolongements secondaires qui leui' sont également perpendiculaires. En s'anastomosant entre eux, ces prolongements réunissent en un réseau les cellules de la cornée.

Ce réseau se détache sur un fond coloré dont la teinte peut varier du jaune brun jusqu'au brun violacé.

Suivant que l'imprégnation a plus ou moins bien réussi, les cellules sont dessinées d'une façon plus ou

17i Cl.I.LLlLlvS CONNECTIVLS DE LA COUNlIlli.

moins pure. Mais dans toutes les préparations, vous remarquerez 1(» fait suivant, que je signale à votre attention }iour y revenir tout à l'heure : au voisinage immédiat de la cellule, le fond est plus fortement teinté qu'ailleurs; cette coloration va en se dégradant peu à peu jusqu'à se confondre avec la teinte générale du fond.

Chez la grenouille, les cellules et le réseau qu'elles forment ont une étendue considérahle relativement au fond sur lequel elles se détachent.

Chez le triton, cette disposition est*encore exagérée : les cellules sont très grandes et ce que l'on voit du fond est presque insignifiant; il se trouve réduit à que^iues taches brunes logées entre les prolongements cellulaires.

En revanche, chez le lézard, le fond a une grande iniportance relativement aux cellules. Petites et rares, munies de prolongements très minces, ces dernières ressendjlent aux corpuscules osseux, et la cornée donne une image assez analogue à celle que présentent les ]3laques osseuses de l'opercule du cyprin doré.

Si nous nous bornons, pour la cornée des batraciens et des reptiles, aux quelques types dont je viens de vous parler, nous voyons qu'on peut les ranger, suivant l'importance croissante des cellules, dans une série qui commence au lézard et qui passe par la grenouille pour arriver au triton .

Examinons maintenant la cornée des mammifères.

Le bœuf et le cheval présentent des cellules rares relativement au fond, et munies de longs prolongements. Chez l'homme, le chien, le chat, les cellules sont beaucoup plus étendues, comme vous pourrez vous en con-

IMPRliGN.VTIONS d'aRCÎENï. 175

vaiiici'O sur les préparations disposées devant vous; puis vient le lapin ; enfin le cochon d'Inde et le rat, chez lesquels les cellules ont une importance équivalente à celle ((u'elles possèdent chez le triton.

Chez le rat, elles se dessinent sous forme de plaques claires donnant naissance à des prolongements ramifiés très courts, et elles sont serrées les unes contre les au- Ircs, de telle façon que le fond coloré ne fait guère à chacune d'elles qu'une mince bordure interrompue par les prolongements cellulaires comme par les fils d'une dentelle.

Étudions encore la cornée de (juelques poissons. Chez la carpe, par exemple, les cellules occupent une étendue relative plus considérable encore que chez le rat, le triton ou le cochon d'Inde; dans beaucoup de points elles se touchent par leurs bords et ne se montrent séparées les unes des autres que par des lignes noires analogues à celles deseiidothéliums. Chez larait^ les cellules sont plus petites et laissent à découvert une partie beaucoup plus grande du fond.

Voilà les faits bruts relatifs à l'imprégnation négative par le nitrate d'argent; vous pourrez les véritier sur les préparations placées sous ces microscopes.

Occupons-nous maintenant des imprégnations positives.

Tandis (pie les imprégnations négatives se produisent directement, soit que l'on passe un cristal de nitrate d'argent sur la cornée, soit que l'on plonge cette membrane dans la solution du môme sel. les imprégnations

17() CLLI.LI.LS CONNI'CTIVES Di: lA COUNËi;.

positives ne s'obtiennont jamais d'emblée ; elles ont toujours été précédées d'une imprégnation négative. Nous ne connaissons pas jusqu'à présent de procédé qui permette d'obtenir directement une imprégnation positive. 11 est proltable qu'il en existe, mais je n'ai pas chercbé à les découvrir; cela n'est pas important.

On ignore le mécanisme chimique par lequel une imprégnation négative se transforme en positive; la seule chose que l'on sache, ce sont les conditions dans lesquelles cette transformation s'obtient.

His, qui avait soutenu d'abord que les solutions faibles donnaient des imprégnations positives et les fortes des négatives, revint dans son second travail sur ses assertions antérieures. Il avait découvert dans sa première observation une cause d'erreur. En réalité, il obtenait des imprégnations positives lorsque, après avoir passé le crayon de nitrate d'argent sur la cornée d'un animal vivant, il la laissait en place pendant deux ou trois jours et l'enlevait seulement alors pour l'étudier. Il avait ci'u d'abord que ce résultat tenait à ce que, pendant ce temps, le sel d'argent s'était dilué dans les liquides de la cornée et agissait comme une solution faible; mais, en reprenant son expérience, il reconnut que les conditions étaient beaucoup plus coiuplexes. Il chercha dès lors à réaliser l'imprégnation positive en dehors de l'organisme, et il affirme qu'on l'obtient en plaçant pendant quelque temps la cornée traitée par le nitrate d'argent dans des solutions diluées de chlorure de sodium ou d'acide chlorhydrique.

La méthode que je vais vous indiquer est encore plus

IMrUKdNAJlONS lyAlUiliM", 177

simple. On prend une cornée un peu (Caisse, une cornée de bœuf ou de cheval par exemple, et on la touche plusieurs fois, sur une portion limitée de sa surface, avec un cristal de nitrate d'argent. La cornée est mise ensuite dans l'eau distillée : les parties qui n'ont pas été atteintes par le réactif se gonflent d'abord; puis le gontlement envahit peu à peu les limites de la région imprégnée. Dans ces parties imprégnées et gonflées tout à la fois, l'argent se montre réduit sur les éléments cellulaires, tandis que la substance fdjrillaire est incolore.

C'est ainsi que j'ai fait la préparation disposée sous vos yeux (fig. 17). J'ai pris une cornée de bœuf sur laquelle j'ai passé le crayon de nitrate d'argent dans le tiers ou le quart environ de sa surface et de manière à imprégner à peu près jusqu'aux trois quarts de son épaisseur. Je l'ai placée ensuite dans l'eau distillée pendant quatre jours, puis, au moyen de deux pinces, j'en ai séparé des lames que j'ai montées en préparation dans la glycérine. Dans les portions de la région touchée par l'argent qui ont participé au gonflement, l'imprégnation est positive, dans les autres elle est restée négative.

Ce qui frappe l'observateur lorsqu'il compare les imprégnations positives et négatives d'une même cornée, c'est que les deux images, quand elles sont toutes deux bien complètes, pourraient être jusqu'à un certain point superposées, c'est-à-dire que par les deux procédés les cellules ont des formes semblables. Il faut pour cela, bien entendu, que les deux imprégnations soient excellentes. 11 n'en est pas toujours ainsi, et, dans

RANVlEK. — Anat. gcuéralc, li. — Iri

les iniprégnatioos né2:ativos, il y a souvent des prolongements ijui ne sont pas ménagés par l'argent et qui manquent par conséquent à l'image de la cellule.

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FiG. 17. — Cornée du bœuf imprégnée positivciucnt jiar le nilratc ct'arg'eiil.

Je dois vous faire remarquiM' encore l'analogie que présenlent les cellules dessinres par l'imprégnalion positive avec celles qui ont él(3 isolées par l'acide sulfuriipie. Cedei'nier réactif rétracte, il est vrai, le corps cellulaire, ([ui dès lors paraît beaucoup plus petit; niais on reconnaît la même disposition générale et les mômes croies d'empreinte dans les unes et dans les autre?.

En terminant je soulèverai une dernière question, la

IMPRÉGNATIONS d'aRGENT. 179

plus imporlaiite de toulcs : comiiiciit se ibiil les imprégnations négatives? L'explication donnée par His et par Recklinghausen, car ces deux auteurs s'entendent sur le mode d'action du nitrate d'argent, est que l'imprégnation négative ménage des creux, canaux, cavités ou lacunes de forme diverse, remplis de plasma. Voyons si cette interprétation peut se soutenir.

On connaît aujourd'hui un certain nombre de faits, ignorés à l'époque où His et Recklinghausen firent leurs premiers travaux, et qui vont nous ôlre utiles |)our la solution du problème posé.

Nous savons que dans tous les tissus le nitrate d'argent ménage d'abord les cellules, tandis qu'il se fixe et se réduit dans les espaces qui les séparent. Or, les espaces intercellulaires sont remplis de plasma , c'est-à-dire d'un liquide qui renferme une albumine semblable à l'albumine du sang, albumine plasmatique. L'albumine des cellules diffère au contraire de l'albumine du sang par quelques caractères : ainsi, l'alcool à un certain degré de dilution (alcool au tiers) ne coagule pas l'albumine plasmatique, tandis qu'il coagule l'albumine des cellules ou albumine proloplasmatique.

Le nitrate d'argent paraît donc se préci|)iter et se réduire avec plus de facilité partout où il y a de l'albumine plasmatique. Je puis vous montrer par plusieurs exemples qu'il en est réellement ainsi. Lorsque l'on imprègne une membrane contenant des capillaires remplis de sang, l'albumine du sang réduit le nitrate d'argent, et les capillaires deviennent noirs dans toute leur masse; cette circonstance constitue même une

180 CELLULES CONNECTIVliS DK LA CORNÉli.

(lifïîciillé notable pour obtenir de bonnes imprégna.lions de rendolliéHuni des capillaires.

Autre fait : lorsrpie l'on n'a pas soin, avant de prati- (pier rinipré£i;nation d'une membrane séreuse, d'en laver la surface avec un courant d'eau distillée, les lignes intercellulaires sont tachées, ainsi que la surface des cellules, par un grand nombre de grains d'albumine précipitée et noircie par l'argent.

Ces quelcpies exemples suffiront à vous montrer que le nitrate d'argent a plus d'affinité pour l'albumine plasmatique que pour l'albumine cellulaire.

Il y a, dans l'observation de la cornée elle-mAme, un fait que j'ai signalé à voire attention et qui aurait dû frapper His et Recklinghausen et les conduire à une autre interprétation des images qu'ils avaient sous les yeux.

Dans les imprégnations négatives bien réussies, on remarque toujours que, tout autour de la cellule réservée en blanc, il y a une bordure plus fortement colorée (jue le re'ste de la substance fondamentale (voy. fig. 16). C'est comme si l'on avait souligné les contours de la cellule par un trait noir dont la coloralion irait en se dégradant pour se confondre avec la teinte générale du fond. Celte bordure est plus marqu(';o autour du contour cellulaire pioprement dit f|u'aiitour des prolongements; elle n'existe pas du tout autour des plus minces.

Il est facile d'en saisir la raison si l'on se représente la cellule eu place. Comme elle possède une certaine épaisseur, les deux lames entre lesquelles elle est com-

IMPRl'GNATIONS d'aRGKNT. 181

priso no se rejoignent pas imniédiafement sur ses bords; elles ne sont pus assez sonpies pour celii, et leur point de jonction se faisani un peu au delà de la limile delà cellule, elles laissent entre elles et la masse protoplasmique de celte dernière un espace en forme de V. Cet espace est naturellement rempli de plasma, et, comme ce plasma réduit fortement l'argent, il doit se produire à son niveau une coloration plus marquée.

Ce fait à lui seul, s'il avait été observé et interprété exactement, aurait montré que l'argent, loin de ménager les creux, les colore quand ils contiennent de l'albumine plasmatique.

Nous arrivons ainsi, comme vous le voyez, à une conclusion absolument inverse de celle de His et de Hecklingbausen : les espaces remplis d'un liquide albumineux sont imprégnés; les parties résL'rvées correspondent à des objets pleins, à de l'albumine cellulaire ou j)rotoplasmati({ue.