QUINZIÈME LEÇON

(13 f.^rier 1879) Cellules connectives de la cornée.

Élude des phénomènes qui se produisent à la mort des cellules. Manière d'apparaître du noyau. Son double contour indiquant l'existence d'une membrane d'enveloppe.

Expériences sur l'action de courants très forts appliqués d l'œil tout entier et traversant la cornée seulement en deux points limités. Manière de fixer les résultats obtenus et de les rendre accessibles à l'observation microscopique. Fragmentation des noyaux aux points où a passé le courant. — Causes de cette fragmentation. Action brisante de l'électricité. — Discussion sur l'action cataphorique. — L'autodigestion cellulaire complète la destruction des noyaux.

Rapports des cellules fixes de la cornée avec les lames connectives.

Injections interstitielles dans les cornées du type membraniforme (chien, cochon d'Inde, rat).

Me.ssieurs,

Dans la dernière leçon je vous ai rendu compte de quelques expériences faites dans le but de déterminer si les cellules fixes de la cornée sont irritables, c'està-dire si elles réagissent par un mouvement quand leur sensibilité est mise en jeu.

Il résulte de ces expériences que l'irritabilité des cellules de la cornée n'est pas démontrée. Cependant, comme cette irritabilité a été affirmée par des auteurs qui jouissent d'une grande considération dans le monde

•2r>(» ClîLl.ULKS C().N^'I■C11V1 s l)K l.\ CORNÉE.

scientifique, Kiihno et Rollelt, j'ai cru devoir reprendre encore une fois la vérification des faits qu'ils onl annoncés.

Je me suis placé dans les meilleures conditions; j'ai disposé une cornée dans une chambre humide bien construite, avec de l'eau dans le fond; j'ai eu soin qu'elle fût bien exacti'ment en contact avec les deux électrodes d'un porte-objet électrique que j'avais construit exprès pour la circonstance. Puis, examinant de temps à autre cette coinée, j'ai attendu trois ou quatre heures jusqu'à ce que ses cellules fixes devinssent très apparentes et parfaitement nettes. Choisissant alors pour l'observer un point de la cornée situé sur le trajet du courant, à peu de distance de l'un des électrodes et dans lequel il y avait deux ou trois cellules de forme bien caractéristique, j'ai excité la cornée par des décharges d'induction. J'ai d'abord essayé des courants de force moyenne, ceux que l'on emploie, par exemple, pour l'excitation des muscles du lapin. J'ai opéré comme Kiihnc, faisant dix interruptions du courant à une seconde d'intei'valle l'une de l'autre, puis attendant trois minutes poui" observer si un ctT'et se produisait, et regardant attentivement les cellules pendant ce temps. Je n'y ai remarqué aucune modification.

Puis, rapprochantsuccessivement les deux bobines, j'ai opéré plusieurs fois de la môme façon avec des courants de plus en plus forts, et en attendant chaque fois trois minutes. L'examen le plus minutieux ne m"a permis d'observer aucune modification, ni dans les cellules, ni dans leurs prolongements.

Lors({ue les bobines, à peu près complètement enga-

ACTION DliS CUUuANTS d'iNDUCTIOV. ^87

gées rune (.liinsTaulre, doiiiiaieiil j)i'(3.s({ue \v iiiaxiiiium (lu courant, les dix secousses, ayant été répétées à une seconde d'intervalle, amenèrent la mort des cellules, qui se traduisit au bout dune minute par la diffluence du proloplasnia, l'apparition des granulations et surtout Tapparitiondu noyau. Parconséquent aucun effet du tout ou la mort, c'est ainsi que Ion peut définir l'action des courants d'induction sur les cellules fixes de la cornée.

Cette vérification faite, je reprends le récit des expériences dont j'ai commencé à ^ous rendre compte à la fin de la dernière leçon. Je vous ai dit qu'après avoir fait asfir un même courant d'induction sur les deux cornées d'une même grenouille, di?posées de la même façon sur deux porte-objet électriques , les noyaux s'étaient montrés dans les cellules au bout de deux minutes, dans la cc^rnée examinée à une température de 23 degrés, tandis que dans l'autre cornée maintenue à ui'.e température de 2 degrés ils n'étaient devenus distincts qu'au bout de vingt-cinq et même de quarantecinq minutes.

De cette expérience nous avons dû conclure que la température a une influence considérable sur la rapidité d'apparition du noyau. Quant à cette apparition ellemême, nous l'avons expliquée par l'autodigestion de la cellule, résultant de la diflfusion dans toute sa masse des liquides digestifs qu'elle contenait.

Les noyaux n'apparaissent pas subitement dans l'intérieur des cellules. On les voit se dessiner vaguement tl'abord, sans contour bien déterminé. Puis ils deviennent plus visibles, et leur bord finit par être bien dis-

■238 CELLULKS CONNECTIVES DE LA COUNIÎIE.

tinct. En même temps, le protoplasma cellulaire devient de plus en plus vague; bientôt on ne voit plus nettement les bords de la cellule; ses prolongements fins et délicats ont disparu sans laisser de trace, quelques rares granulations marquent la place des plus gros, et finalement toute la cellule n'est plus représentée que par une zone granuleuse que l'on distingue bien autour du noyau, mais dont on ne saurait préciser la limite.

Quant au noyau, il montre un double contour, et son observation dans ces conditions permet d'affirmer qu'il possède réellement une membrane d'enveloppe.

Avant d'aller plus loin, je dois vous signaler un fait qui peut devenir une cause d'erreur dans l'observation de la cornée à l'état vivant; je veux parler de l'action délétère que l'humeur aqueuse exerce sur les cellules de la cornée.

Il arrive fréquemment que, lorsqu'on balaye avec le pinceau la face postérieure de la cornée pour la débarrasser du pigment de l'iris ou des autres impuretés qui gêneraient l'observation, on détache plus on moins l'épithélium de la membrane de Descemet. On remarque alors que les cellules fixes qui se trouvent dans les deux couches les plus rapprochées de l'œil de l'observateur et qui ont été exposées au contact immédiat de l'humeur aqueuse montrent leur noyau parfaitement net, ce qui est un indice de leur mort, tandis que les cellules situées plus profondément sont encore vivantes.

Il est indispensable d'être averti de ce fait, pour n'être pas induit en erreur dans les expériences où l'on excite la cornée par des courants d'induction ; autrement, on

ACTION DES COURANTS d' INDUCTION. 239

pourrait attribuer à l'action de l'électricité la mort de ses cellules, qui est due à une tout autre cause. Aussi faut-il avoir soin, avant toute expérience, de bien examiner la cornée dans tous ses plans et de s'assurer que toutes ses cellules sont à l'état vivant.

Je passe maintenant aux expériences que nous avons faites pour analyser plus exactement les phénomènes d 'autodigestion qui se produisent dans les cellules quand elles sont mortes ou qu'on les a fait mourir. Dans celles dont je vous ai rendu compte jusqu'à présent, nous n'avions pas poussé l'observation assez loin pour être témoin des résultats ultimes de l'autodigestion. Dans cette nouvelle série nous avons procédé d'une façon un peu différente; au lieu d'enlever la cornée et de l'étaler sur une lamelle de verre pour l'clectriser sur la platine du microscope, nous avons opéré sur l'œil entier de la grenouille. Après l'avoir détaché, nous avons appliqué aux deux extrémités de l'un des diamètres de la cornée les deux pointes en platine de la pince électrique, à travers laquelle nous avons fait passer un courant d'induction tétanisant pendant dix secondes, les bobines se recouvrante! donnant le maximum d'intensité de l'appareil.

Lorsque l'on opère ainsi, le courant électrique ne passe pas par la cornée; prenant le chemin le plus court, il passe à travers l'humeur aqueuse. Il ne traverse donc la cornée que dans les points où sont appHqués les électrodes, de sorte qu'elle présente ensuite deux zones où les cellules ont subi l'action du courant d'in-

^40 CELLULES CONNECTlVhS DE L\ CORNÉE.

duction, tandis que dans le reste de son étendue elles

ne sont pas modifiées.

Les deux yeux de la même grenouille ayant été ainsi

traités (et nous savons que l'action du courant pendant

dix secondes est plus que i^uffisante pour tuer les cellules de la cornée), ils sont mis chacun dans un petit flacon bien bouché. L'un de ces flacons, placé dans de la glace fondante, se trouve maintenu à zéro ou à une température voisine de zéro , l'autre est porté dans l'étuve à une température de 3/i" C.

Au bout d'une heure, on retire les deux yeux de leurs flacons respectifs, on détache les cornées en se plaçant dans un milieu d'une température de 5 à 6 degrés, on étale chaque cornée sur une lame de verre dans une chambre humide, la face profonde en haut, et l'on procède à un examen comparatif.

On constate d'abord que , dans la cornée qui a séjourné pendant une heure dans l'étuve à 34 degrés, les noyaux sont très apparents dans les cellules, aux points touchés par les électrodes et dans la zone environnante. Dans la cornée conservée à zéro, les noyaux ne se montrent pas dans les régions corres- Ijondantes.

On reprend alors la même expérience en faisant durer pendant trois heures le séjour des deux cornées dans des milieux de température différente. Observant ensuite ces cornées dans l'humeur aqueuse et avec les précautions que j'ai déjà indiquées, on remarque que, sur la cornée qui a séjourné pendant trois heures dans un milieu élevé à 3/i degrés, après que l'œil a

ACTION UliS COURANTS DINDUCTION. 241

été soumis pentlunldix secondes à l'action d'un courant tétanisant, les noyaux sont décomposés en granulations de nombre et de grandeur variable, comme s'ils avaient été cassés en morceaux.

Avant de discuter la manière dont celte division s'est opérée, je dois vous renseigner sur les moyens qui m'ont permis de fixer ces résultats de manière à vous les montrer aujourd'hui. Ces moyens, vous les connaissez déjà; vous les avez vu appliquer devant vous. Ils consistent à exposer l'œil aux vapeurs d'acide osmique pendant dix minutes, un quart d'heure ou une demi-heure (on peut dépasser ces limites sans inconvénient), en le suspendant, au moyen d'une épingle recourbée, à la face inférieure d'un bouchon fermant un petit flacon dans le fond duquel ou a versé quelques gouttes d'une solution d'acide osmique à 2 pour 100. L'œil est porté dans l'eau distillée, la cornée détachée au moyen des ciseaux, incisée sur ses bords, raclée sur ses deux faces avec un scalpel pour en enlever l'épithélium antérieur et l'épithélium postérieur, et portée ensuite dans une solution de purpurine (1) pendant vingt-quatre heures, ou pendant quarante huit heures si au bout d'un jour la coloration n'est pas suffisante. La membrane est ensuite lavée à l'eau distillée et montée dans la glycérine.

C'est ainsi qu'ont été faites les préparations que vous allez examiner.

Vous y remarquerez d'abord, en observant les points de la cornée sur lesquels n'a pas porté l'action du

(1) Voy. Traité tecliniciue d'histologie, p. 280.

R\NVIER. — Allât, iréiiérale. II. — 16

courant électrique, que les éléments cellulaires si délicats de cette membrane, éléments que vous connaissez maintenantd'une façon suffisante, sont absolument fixés dans leur forme. Vous reconnaîtrez leurs prolongements les plus minces, et vous constaterez que dans l'intérieur de leur protoplasma on ne peut pas distinsfuer trace du noyau. Les cellules sont colorées uniformément en rose; l'application de la purpurine n'a même pas pu faire prendre à leurs noyaux une coloration plus accusée que celle du protoplasma cellulaire.

Dans le voisinage de ces cellules, vous remarquerez des noyaux colorés en fouge par la purpurine el

entourés d'une atmo- A^o sphère granuleuse, dont

'^''' il n'est pas possible de

déterminer exaclemeiit

la limite. Puis, tout

à côté, vous observerez

d'autres noyaux, et ce

sont les plus nombreux

dans la zone atteinte

par l'action du courant

«<94» qui sont représentés

^•> par des grou pes de gra-

„ . ,. , nulations dont l'ensem-

l'ic. S!/. — Noyaux do celluks fixes de la cornée de In jçienouillo veile, fingnieillôs soUs blc rappcllC hl fomiC du l'influence de décliarye» d'induction. Après

r.ction du courant éli^lrique, la cornée a nOyaU duqUelellCS prO^ été laissée pendant une heure dans une étuve o i i

ri.auflëe à 34 degrés ccniipradcs, et fixée PU- vieunent , mals saus

suite par les vapeurs d'acide osniique.

qu'une ligne limitante en indique le contour (fig. 27). Ces granulations, vive-

ACTION DKS œUKANTS DliSOUCriON. 'i^'J

ment colorées par la purpurine et par conséquent bien nettes, ont des dimensions très variables; tantôt toutes celles qui procèdent d'un même noyau sont également fines et réparties à peu près uniformément dans tout l'espace qu'il occupait ; tantôt, au milieu de granulations très fines, on en remarque une beaucoup plus grosse; tantôt enfin quelques granulations de dimension moyenne dessinent pour ainsi dire le pourtour du noyau en laissant son milieu complètement vide.

Quelle est la cause de ce singulier phénomène? Ce n'est pas l'autodigestion seule, puisque tout à côté des noyaux ainsi fragmentés vous en observerez d'autres qui sont parfaitement intacts et entourés de leur membrane d'enveloppe caractérisée par son double contour. Ces derniers noyaux appartiennent aussi à des cellules tuées par l'électricité, puisqu'ils sont apparents. L'autodigestion qui modifie le protoplasma cellulaire n'atteint donc pas nécessairement le noyau, et sa fragmentation doit avoir encore une autre cause.

Si vous examinez plus attentivement et dans un plus grand nombre de régions les préparations qui sont disposées sous ces microscopes, vous y rencontrerez, outre les noyaux complètement fragmentés en granulations et ceux qui ont conservé intact leur double contour, certains noyaux plus rares {a, fig. *27) dans lesquels le double contour est encore reconnaissable sur plusieurs points, tandis qu'en d'autres il est interrompu, ce qui montre que la membrane à laquelle correspond ce double contour a été brisée à leur niveau.

Ces fractures de la membrane du noyau seul iinpor-

tantes à noter; elles nous serviront de guide pour l'interprétation du phénomène que je viens de décrire.

Vous connaissez Taciion brisante des courants d'induction forts; vous avez sans doute été témoins des effets que l'on obtient avec les grandes bobines de RhumkorfT; vous avez vu comment un courant passant à travers un morceau de sucre le réduit en poussière; passant à travers un bloc de cristal, y trace une ligne de brisures. Il est donc probable que c'est à l'action brisante du courant électrique qu'il faut attribuer la fragmentation des noyaux.

Il y a aussi une autre action qui pourrait être mise en cause, c'est ce que l'on nomme l'action cataphoi'ique du couiant. Lorsque l'on fait passer un courant électrique dans un espace plus ou moins restreint dans lequel se trouve un liquide tenant en suspension des particules solides légères (par exemple des spores de lycopode suspendues dans de l'eau), le liquide se rend à l'un des p(Mes, les particules solides à l'autre.

J'ai prié M. Tschiriew de répéter ces expériences devant nous, el nous avons constaté parfaitement le mouvement des spores de lycopode sous l'influence du courant. En changeant les pôles, on voyait les particules solides prendre un mouvement en sens inverse. Du resie, on sait aussi que, sous l'influence d'un courant faible, les granulations qui se trouvent dans l'intérieur d'une cellule sont portées d'un côté ou de l'autre, suivant la direction du courant.

Je ne crois pas que cette action cataphorique soit en jeu ici, car nous n'avons pas aifaire à des particules li-

ACTION DES COURANTS d'iNDUCTION. 245

bres, mais à une masse plus ou moins compacte, dans laquelle le courant peut exercer son action brisante comme dans les corps solides.

Lorsque les noyaux viennent d'êlre soumis à l'action de courants forts, ils sont brisés ; mais comme leurs différents fragments sont restés en place, ils paraissent encore intacts. C'est plus tard seulement qu'ils se montrent séparés en grains arrondis et plus ou moins éloignés les uns des autres.

Celte séparation et cette déformation des fragments doivent être attribuées à l'action des sucs digestifs de la cellule. Dans les cellules atteintes par le courant, on peut très bien observer les trois degrés dont je viens de parler. Dans certaines d'entre elles, le noyau est entier; dans d'autres, il se montre divisé en fragments irréguliers exactement juxtaposés; dans d'autres enfin, il est réduit en granulations. Ces granulations, pour le dire en passant, sont des débris de la membrane du noyau, et non pas de son contenu; ce contenu s'est confondu avec celui de la cellule.

Pour observer ces faits, il n'est pas nécessaire d'employer l'étuve ; nous nous en sommes servi seulement pour accélérer les phénomènes. Si, après avoir fait passer un courant d'induction à travers un œil de grenouille, on le conserve pendant vingt-quatre heures à la température ordinaire (10 à 15 degrés), dans un flacon bouché pour éviter l'évaporation, on constate sur la cornée tous les faits que je viens de signaler.

En résumé, les noyaux ne se montrent pas dans les cellules delà cornée lorsqu'elles sont vivantes.

%W HAPPORT'^ PÏÏS CEIXUÎ.KS CONNECTIVIiS.

Ils sont visibles dans l'intérieur de ces cellules quand elles sont mortes.

Ils n'apparaissent pas immédiatement après la mort des cellules.

La température a une influence considérable sur le temps après lequel ils apparaissent.

Ils ont un double contour, ce qui indique qu'ils sont des vésiculos limitées par une membrane.

Sous l'action des courants forts, cette membrane se brise, et l'autodigestion la réduit en boules de dimensions variées.

Je passe à une autre question, voisine de celle que je viens de traiter. C'est une des plus difficiles et des plus discutées de l'histologie, et cependant elle est fondamentale. Il s'agit du rapport des cellules fixes de la cornée avec les lames de cette membrane. C'est un problème que je n'ai pas encore abordé, quoique nous ayons rencontré chemin faisant quelques fails importants qui y sont relatifs et qui pourront nous aider à en trouver la solution.

Voici ces faits :

i° La possibilité d'isoler des réseaux cellulaires parfaitement nets (voy. p. 466) ;

2" La possibilité de distinguer, sur les coupes transversales de la cornée faites après l'action du chlorure d'or, des crêtes d'empreinte coupées en travers sur l'une des faces de la cellule, et sur l'autre de petites membranes saillantes correspondant à des crêtes d'empreinte vues de profil (voy. p. 197);

WKC T.KS LAMRS DR LA CORNÉE. 247

3° Enfin, la distinction que nous avons défaire des cornées des différents animaux en deux groupes, suivant la forme des cellules fixes : cornées à cellules du type corpusculaire, cornées à cellules du type membraniforme.

Partons de cette classification, et revenons sur quelques renseignements que je vous ai donnés antérieurement et qui nous sont indispensables aujourd'hui.

Je vous ai montré (voy. p. 122) que, chez le cheval et le bœuf, on ol)tient par des injections, soit de bleu de Prusse, soit de térébenthine, et mieux encore par l'insufflation, de beaux tubes de Bowman. Les cornées où les injections interstitielles déterminent la production de ces tubes appartiennent nu type corpusculaire.

ïl est d'autres mammifères, le rat, le cochon d'Inde, le chien, dont les cornées appartiennent an contraire au type membraniforme. Lorsque l'on essaye par injection ou par insufflation d'y produire des tubes de Bowman, on n'y réussit pas Autour de la masse injectée qui paraît s'étendre en nappe, il y a bien quelquefois de petits épieux, mais ils sont à peine visibles à l'œil nu.

Si l'on injecte de l'air dans la cornée d'un chien, comme je le fais ici devant vous, au lieu de voir apparaître, comme chez le bœuf, une sorte d'étoile dont certains rayons sont très longs, vous voyez se produire simpleinentiine plaque blanche opaque (pii s'étend plus ou moins à partir de la pointe de la canule, et qui, par son apparence feutrée, fait ressembler la cornée à de la neige ou à de l'ouate.

Si, au lieu d'air, on injecte dans la cornée du chien

248 RAPPOUTS DliS CKLIAILES CONNECTlVIiS

du bleu de Prusse solubh' et que l'on examine ensuite cette cornée au microscope, ou a sous les yeux un réseau dune régularité aduiiral)le, qui, par l'étendue de ses mailles et la forme de ses travées, lappelle parfaitement le réseau cellulaire que font apparaître chez le même animal les imprégnations Itien réussies au chlorure d'or. Il rappelle également, mais seulement comme forme et non comme dimension, le réseau cellulaire que l'on isole au moyen de l'acide sulfurique.

Le résultat est le même lorsque l'on injecte du bleu dans la cornée du rat et du cochon d'Inde. Pour y réussir, il est important de connaître certains détails de technique. Il faut employer des canules en acier, très fines, à cause du peu d'épaisseur de la membrane dans laquelle elles doivent pénétrer, et aiguisées à pointe courte, de telle façon que leur calibre intérieur vienne s'ouvrir très près de la pointe. Les canules ordinaires ajustées aux seringues de Pravaz sont, au contraire, à pointe longue en fer de lance. Elles ont l'avantage de pénétrer plus facilement, mais elles ne peuvent être employées pour ces cornées très minces, où l'on ne pourrait les enfoncer un peu avant sans perforer complètement la membrane. Le mieux est d'arranger soimême la pointe de la canule en l'aiguisant sur une pierre d'Arkansas, la frottant d'abord sur le plat, du coté du calibre, pour en diminuer la longueur, puis sur les côtés pour la rendre bien tranchante. La seringue à laquelle on l'adapte est remplie de bleu de Prusse soluble ou d'une solution d'orcanette dans l'essence de térébenthine.