QUATORZIEME LEÇON

(8 février 1879) Cellnlos connoctivcs do la cornée.

Elude des cellules de la cornée à l'état vivant. — Expériences servant à démontrer que l'apparition des cellules doit être attribuée à l'imbibition des fibres connectives par le liquide de la préparation.

Expériences sur l'irritabilité des cellules de la cornée. — Moyens divers pour exciter mécaniquement ces cellules tout en continuant de les observer. Le changement de forme qu'elles subissent est purement passif. — Excitations électriques. Manière de les appliquer. Porte-objet électrique. Les cellules fixes ne changent pas de forme sous l'influence des courants d'induction, à moins qu'elles ne soient tuées. — Explication des résultats obtenus par Rollelt et par Kiihne.

Expériences sur les causes qui déterminent i'fipparition du noyau lors de la mort des cellules. — Hypothèses à ce sujet.

Messieurs,

Nous avons commencé dans la dernière leçon l'élude de la cornée dans la chambre humide. Vous avez vu que, dans les conditions bien définies où nous l'avons examinée, imbibée d'humeur aqueuse et suspendue librement à la face inférieure d'une lamelle dans un petit espace clos, les cellules ne s'y montrent pas toujours de la môme façon. Tantôt elles apparaissent dèsledébut; tantôt on n'en distingue d'abord que quelques indices qui s'accusent peu à peu, de telle sorte qu'au bout d'une ou deux heures elles sont bien distinctes;

"l'''!"! CELLULES CONNECTIVES DE LA CORNÉE

tantôt enfin elles n'apparaissent nettement à aucune période.

Pour expliquer ces phénomènes, j'ai dû abandonner lo théorie de Kïihne sur l'irritabilité des cellules fixes et en adoptei' une autre. Me fondant sur un ensemble de faits sur lequel je ne reviens pas aujourd'hui, j'ai pensé que les cellules sont d'abord invisibles dans la cornée parce qu'elles ont exactement la même réfringence que la substance fibrillaire dans laquelle elles sont comprises. La préparation s'améliorerait parce que les fibres de la cornée, s'imbibant d'eau, diminueraient de réfringence, tandis que les cellules, résistant à Timbibition, conserveraient la leur et dès lors, se trouvant dans un milieu moins réfringent que leur propre substance, y deviendraient visibles.

Ce n'était encore là qu'une hypothèse. Il fallait en vérifier l'exactitude par l'expérimentation. Voici comment j'ai procédé : J'ai enlevé à une grenouille ses deux cornées ; je les ai préparées de la même façon dans l'humeur aqueuse, et je les ai placées chacune dans une chambre humide. Seulement, dans le fond d'une de ces chambres j'ai déposé une goutte d'eau, en prenant des précautions pour qu'elle ne remontât pas par capillarité le long de ses bords et ne vînt pas atteindre la cornée. Dans le fond de l'autre chan)bre humide, j'ai mis une goutte de glycérine en prenant les mêmes précautions^ Les deux cornées étaient dans les mêmes conditions, sauf une seule : Thumidité du milieu. La première se trouvait dans un espace saturé de vapeur d'eau; la seconde, au contraire, grâce à l'aflinité de la glycérine

EXAMINÉES A l'eTAT YIVAN^. '223

pour l'eau, devait se trouver clans un liquide de plus en plus concentré. Les deux préparations étant disposées sous deux microscopes, je les ai examinées simultanément.

La seconde cornée, celle qui subissait Tinfluence indirecte de la glycérine, présenta d'abord en quelques points des cellules assez nettes; mais leur, image alla en s'affaiblissant peu à peu, et au bout de vingt-cinq minutes à une demi -heure elles avaient tout à fait disparu.

Pendant ce temps l'autre cornée s'améliora notablement et arriva à une netteté que je n'avais jamais vue jusque-là, quelle que fût la quantité d'humeur aqueuse dans laquelle la cornée avait été plongée. J'ai disposé cette seconde préparation sous un de ces microscopes. En l'examinant, vous serez frappés de l'épaisseur considérable que la cornée a acquise; cette épaisseur est telle qu'il devient impossible d'arriver, avec l'objectif? de Vérick, jusqu'à l'épithélium antérieur. Vous remarquerez en même temps que la substance fibrillaire est absolument homogène, ce que vous comprendrez aisément si vous avez présents à l'esprit les détails dans lesquels je suis entré sur le gontlemenl des fibres de la cornée.

Vous voyez, Messieurs, que l'hypothèse a pour les recherches d'anatomie générale une importance égale à celle qu'elle possède dans les autres sciences. Nous observions des variations qui se produisaient malgré des conditions en apparence identiques; c'est l'hypothèse de l'imbibition des fibres qui nous a conduit à faire des

224 CELLULES COiNNECTlVES DE LA CORNÉE

expériences décisives et nous a permis d'élucider cette question si complexe et si controversée.

Vous voyez aussi que je tiens la promesse que je vous ai faite au commencement de ces leçons : vous faire assister à toutes mes recherches, vous rendre témoins des tâtonnements qu'elles nécessitent, vous communiquer toutes les hypothèses qu'elles me suggèrent.

Si la cornée gonflée par l'eau laisse voir ses cellules, s'il est démontré maintenant que l'amélioration de l'image qu'elle présente est liée à l'imbihition de ses fibres, il ne s'ensuit pas nécessairement que ses cellules fixes ne soient pas irritables. C'est là un point important qui doit fixer maintenant toute notre attention.

Pour résoudre la question de l'irritabilité des cellules de la cornée, nous pouvons avoir recours aux excitants mécaniques et aux excitants électriques. Commençons par les excitants mécaniques. Le procédé de Kiihne, qui consiste à défaire la préparation et à mettre la cornée à nu pour la tirailler, puis à la replacer dans la chambre humide, expose presque nécessairement, comme je vous l'ai dit, à ne pas retrouver le point observé d'abord.

Aussi ai-je renoncé à ce moyen. Au lieu de placer la cornée dans une chambre humide, j'en fais une préparation ordinaire entre une lame et une lamelle, et lorsque j'ai trouvé un point où les cellules sont bien nettes, laissant lu préparation au même endroit sur la platine du microscope, j'appuie à plusieurs reprises avec la pointe d'une aiguille sur la lamelle de verre recouvrante. Des expériences faites sur d'autres éléments anatomiques m'ont démontré que l'on exerce ainsi une irritation

EXAMINÉES A i/lTAT VIVANT. '225

assez notable. Après celle opéralion, je consUile ({110 les cellules fixes ne sont pas devenues fusiformes.

.l'ai égalenienl employé le compresseur. Cet instrument, qui était d'un grand usage autrefois, est tombé en désuétude aujourd'hui et ajuste titre. On en a fait de différents modèles; voici celui dont je me suis servi et qu'il est inutile de décrire.

Une cornée étant placée sous ce compresseur, examinons-la avec un grossissement de 400 à 500 diamètres. Choisissons une région dans laquelle les cellules soient nettes et exerçons la compression au moyen de la vis. Le po intde la vision distincte est déplacé ; mais il est facile, en abaissant l'objectif, de suivre constamment les cellules sur lesquelles porte l'observation.

Les effets de la pression paraissent différents suivant f[ue l'on examine les couches profondes de la préparalion ou les superficielles. Dans les premières, celles qui sont les plus éloignées de l'œil de l'observateur, les cellules diminuent peu à peu de netteté; leur éclat faiblit, et elles finissent par disparaître. A ce moment, la substance fondamentale de la cornée, qui jusque-là paraissait homogène, se montre fibrillaire, et Ton y dislingue l'entrecroisement des petits faisceaux dont je vous ai parlé dans une précf'denle leçon (voy. p. 109-M5). Si l'on décomprime, en relevant en même temps l'objectif, on retrouve les cellules que l'on avait examinées d'abord avec leur forme primitive; elles n'avaient donc pas été détruites, elles avaient simplement disparu.

Si l'on choisit pour l'observer une cellule située à la face superficielle de la préparation el qu'on la suive

KANViKi!. — Anat. i^iMiôiMlc. II. — ir>

attentivement pendatit que l'on exerce une compression très graduée, on la voit augmenter d'étendue en s'éta- [ant de plus en plus, comme le ferait tout autre corps mou comprimé entre deux plans résistants. Puis, lorsque l'on décomprime, elle se rétrécit et reprend peu à peu ses dimensions premières. On peut répéter cette manœuvre plusieurs fois de suite et retrouver toujours la cellule dans sa forme primitive après la décompression. Il est certain qu'un tiraillement pareil constitue une excitation mécanique bien suffisante pour irriter les cellules; et si dans ces conditions elles ne se rétractent pas, si elles ne prennent pas la forme en fuseau décrite par Kïihne, c'est qu'aucune excitation mécanique ne les fera contracter, c'est qu'en réalité elles ne sont pas irritables.

Passons aux excitations électriques. Nous nous servons comme source d'électricité de la pile de Grenet, accompagnée d'un chariot d'induction : les deux électrodes de la bobine induite se rendent à un porte-objet électrique disposé sur la platine du microscope. Voici ce porte-objet : sur une lame de verre plus longue que le porte-objet ordinaire, sont fixés, par du baume de Canada, deux fils de platine aplatis, allant à la rencontre l'un de l'autre et laissant entre leurs extrémités une distance de 4 millimètres environ.

Une cornée de grenouille étant appliquée par sa face postérieure sur une lamelle de verre, celle-ci est placée sur le porte-objet, de telle façon que les deux bords de la membrane recouvrent les extrémités des électrodes; une ou deux gouttes d'humeur aqueuse sont introduites

EXAMINÉES A l'état VIVANT. ^"il

ijous lu lamelle, que l'on maintient par une bordure de paraffine appliquée de manière à éviter toute compression.

On examine alors la préparation pour s'assurer que les cellules sont nettes et, après avoir choisi pour l'observer un point qui soit sur le trajet du courant et à une petite distance de Tun des pôles, on fait passer des décharges d'induction.

Avant de vous parler des résultats de ces expériences, je dois vous rappeler ceux que Kiihne avait obtenus. Il faisait passer dans la cornée une série de décharges d'induction avec un courant relativement faible, à des intervalles d'une seconde. Une minute après qu'il avait cessé l'excitation, il voyait les cellules se contracter et prendre la forme en fuseau. Puis, les abandonnant à elles-mêmes, il les retrouvait au bout d'une ou deux heures dans leur forme normale. Il recommençait l'expérience et obtenait encore une fois le même résultat.

Rollett, qui a répété les expériences de Kûhne, n'a pas réussi à observer ces phénomènes ; mais, en opérant avec des courants très forts, il aurait obtenu une contraction des cellules, qui permettrait même, dit-il, de démontrer l'existence des canalicules du suc.

Voici le dessin que Rollett (4) donne d'une cellule cornéenne contractée. Vous voyez qu'autour de celte cellule qui paraît granuleuse est dessiné un second contour plus net; ce second contour serait, d'après Rollett, celui des lacunes ou des canaux du suc. Avant d'aller

(1) Rollett^ Manuel de Slrkker, p. 1117.

"l'iS CFXLULES COXNEGTIVES DE L\ CORM-E

plus loin, je dois vous rendre attentifs à l'erreur qui, suivant mon opinion, a donné naissance à ce dessin.

Vous savez que, lorsqu'une cellule est plus réfringente (pie le milieu dans leipiel on l'examine, elle devient brillante lorsqu'on éloigne un peu l'objectif au delà i\u point de la vision distincte; si, au contraire, on rapproche l'objectif U!i peu en deçà de ce point, elle devient obscure. C'est ainsi qu'une cellule fixe étant plus réfringente que la substance qui l'entoure paraît obscure, ainsi que ses prolongements, lorsqu'elle est examinée en deçà du point. Dans ces conditions, on aperçoit autour d'elle une bordure claire. Cette bordure, étant claire en deçà du point de la vision distincte, correspond à quelque chose de moins réfringent que la substance fondamentale de la cornée.

Or, les préparations à l'argent nous ont permis de reconnaître que, sur les bords des cellules fixes, se trouve un espace rempli de liquide plasmatique, moins réfringent que les cellules et que la substance fibrillaire* de la cornée (voy. p. 181). C'est doue cet espace rempli de liquide qui correspond à la bordure claire que l'on aperçoit autour de la cellule, lorsque l'objectif est en deçà du point.

C'est précisément dans ces conditions, je veux dire en deçà du point de la vision distincte, qu'a été dessinée la cellule cornéenne tigurée par Rollett, car elle est représentée obscure, ainsi que ses prolongements. On devait donc apercevoir autour d'elle le bord clair dont je viens de vous pailer, et c'est ce bord que Rollett a pris pour la limite des canalicules du suc.

EXAMINIES A l'ÉTAT VIVANT. 'l^'^ii)

Dans loiiles les expériences que nous avons faites au moyen de décharges d'induction, pour contrôler celles de kijhne et celles de Rolletl, nous avons constaté un seul résultat, la mort des cellules; lorsque le courant électrique n'est pas suffisant pour les tuer, il n'exerce aucune action sur elles.

La mort des cellules se reconnaît à la diminution de réfrin2;ence de leur protoplasma, qui prend un aspect lé2;èrement granuleux, et à l'image de plus en plus vague du contour cellulaire. Elle est caractérisée surtout par l'apparition du noyau.

A ce propos, je dois revenir encore sur le dessin de Rollett, dont je viens de vous parler. La cellule contractée qu'il y figure présente un noyau très net; c'est donc une cellule morte qu'il a observée, car je ne suppose pas qu'il y ait ajouté un noyau uniquement pour embellir son dessin. Kiihne a évité celte faute; aucune des cellules contractées qu'il figure ne présente de noyau.

Quant aux résultats des excitations mécaniques indiqués par Kùhne, je crois que je puis serrer de plus près son observation et me rendre compte de la cause de son erreur. Pour pratiquer ces excitations, Ki'iline sortait la cornée de la chambre humide et la portait sur une lame de verre. Cela étant donné, le changement de forme des cellules me paraît simple à expliquer : pendant que la cornée était manipulée, elle se desséchait; les fibres reprenaient leur indice de réfraction pi'imiti et masquaient les cellules. Lorsqu'elle était ensuite replacée dans la cluunbre humide, les fibres s'imbibaient de nouveau, et les cellules, se montrant avec (ous leurs

détails, semblaient ainsi reprendre leur forme prcmi ère.

Il est facile de reproduire expérimentalement ces conditions successives et d'en observer les effets. Pour cela, on place la cornée dans une chambre humide, dans le fond de laquelle on a disposé une goutte de glycérine, en ayant soin qu'elle ne puisse pas atteindre la cornée. Ce réactif agissant à distance sur cette membrane, en lui enlevant de l'eau, les cellules cornéennes pâlissent peu à peu, puis disparaissent. On détache alors la lamelle avec la cornée qui y adhère et, dans le fond de la chambre humide, on remplace la glycérine par de l'eau. Remise en place, bordée à la paraffine, la préparation commence bientôt à s'améliorer, et au bout d'un quart d'heure à une demi-heure les cellules sont de nouveau tout à fait nettes.

C'est donc à la dessiccation de la cornée et non à l'irritabilité des cellules fixes qu'il faut attribuer leur différence d'aspect dans l'expérience de Kiihne.

Je vous ai dit que les décharges électriques amènent la mort des cellules de la cornée. Leur protoplasma perd de sa réfringence et devient granuleux, et leur noyau apparaît. Je dois revenir sur ces faits, et je terminerai cette leçon par l'exposé d'une série d'expériences sur la mort des cellules et sur les phénomènes successifs qui se produisent ensuite dans leur intérieur. Ces expériences m'intéressaient d'une façon toute particulière, et vous allez voir pourquoi.

L'année dernière, en étudiant avec vous le système

liXAMTNl5l-:S A l'état VIVANT. 231

glandulaire, et cette année, lorsque je suis revenu en quelques mots sur les résultats généraux de celte étude (voy. p. i3), je vous ai montré que, sans nier la différenciation bien marquée des cellules glandulaires proprement dites, on peut soutenir avec raison que toutes les cellules sont plus ou moins glandulaires. Je m'appuyais sur ce fciit que certaines cellules prennent dans le milieu où elles vivent des substances variées ; des matières albuminoïdes , des matières grasses, des matières amylacées, se les incorporent et Unissent par se les assimiler. Or nous savons que pour digérer des matières albuminoïdes, il faut un ferment peptique ; pour digérer des matières amylacées, de la diastase; pour digérer des matières grasses, du ferment pancréatique. La cellule qui s'assimile ces matières doit nécessairement, pour les digérer, avoir produit en elle ces différents ferments; elle est donc une cellule glandulaire.

Ces réflexions m'ont conduit à m'occuperde nouveau d'une question que je m'étais posée bien des fois déjà sans lui trouver une réponse satisfaisante, à savoir pourquoi le noyau, ({ui ne se distingue pas dans une cellule vivante, apparaît nettement quand elle est morte.

Une première hypothèse que l'on peut faire est celleci : Sous l'influence de la mort, la tonicité vitale de la cellule disparaît; la fibre protoplasmique (si l'on peut s'exprimer ainsi) se relâche, devient par là moins réfringente, et le noyau apparaît parce qu'il a conservé son indice de réfraction élevé.

La seconde hypothèse qui peut expliquer l'apparition

'^^tî CELLULES CONNliCTlVES 1)K LA CORNl-i:

du noyau est celle d'une transforuiation chimique du protoplasma, d'une sorte d'aiitodigestion.

Je ne vois (jue ces deux hypothèses possibles, car je dois en éliminer d'emblée une troisième qui consisterait à attribuer la manifestation du noyau et la modiflcation de la cellule à une action du milieu extérieur. Voici pourquoi je ne saurais admettre cette hypothèse. Si vous observez soit des cellules lymphatiques, soit un bouquet de cellules i) cils vibratiles, soit des cellules de la cornée à l'état vivant, vous pourrez voir l'une ou l'autre de ces cellules mourir et son noyau apparaître, tandis que la cellule la plus voisine continuera à vivre pendant longtemps encore. Ce seul fait du voisinage dans une même préparation de cellules vivantes et de cellules mortes suffit à exclure absolument l'action du milieu extérieur.

L'hypothèse d'après laquelle certains sucs, cantonnés jusque-là dans quelques départements de la cellule, se répandraient après la mort dans toute la masse protoplasmique et dès lors se mettraient à la digérer, celte hypothèse, dis-je, était séduisante; mais il était nécessaire de la vérifier, et aucun organe ne se prêtait mieux que la cornée aux expériences que je me proposais de faire.

Je ne vous citerai aujourd'hui que deux des expériences nombreuses que j'ai tentées, mais vous verrez qu'elles sont décisives.

Ces expériences ont été faites pendant les froids de décembre et de janvier.

J'ai enlevé à une même grenouille ses deux cornées

EXAMINÉIÎS A l'jîITAT VIVANT. '288

ot je les ai disposées dans rhuuieur aqueuse sur deux porte- objets électriques semblables, placés chacun sur la platine d'un microscope. Toutes les conditions étaient identiques, sauf une seule : l'une des comités avait été préparée et était observée dans une chambre dont nous avions porté la température jusqu'à TS degrés centigrades (température que nous donnait le thermomètre placé sur la table à côté du microscope); l'autre était observée dans une autre pièce dont la fenêtre était ouverte et où le thermomètre placé à côté du microscope marquait-}- 'i" C.

Après avoir fixé le porte-objet de manière à observer un point de la première cornée situé sur le trajet du courant et à une petite distance de l'un des pôles, je tis passer à travers la membrane une série de décharges d'induction fréquentes pendant dix secondes. Pendant ce temps, il ne se manifesta aucune modification dans les cellules observées; immédiatement après le passaii;e du courant, elles se montraient encore les mêmes; mais, au bout d'une minute, je vis le protoplasma. devenir granuleux, pâlir, et le noyau se dessiner; au bout de deux minutes le noyau était absolument net, et le contour du protoplasma cellulaire était à peine reconnaissaltle.

La seconde cornée fut sou.. '. ' à l'action des mênfies décharges d'induction pendant dix secondes. Durant le passage du courant et immédiatement après, les cellules observées ne furent pas modifiées, et elles continuèrent à garder leur forme et leur aspect pendant quarante-cinq miimtes, au bout desquelles leurs noyaux apparurent. (Dans différentes expériences de contrôle, cette durée

234 CELÏ.ULES CONNECTIVES DE LA CORNÉE.

varia de vinsjt-cinq minutes à quarante- cinq minutes.) Ces expériences montrent que la température a une influence considérable sur l'apparition du noyau. Elles excluent la première hypothèse que nous avions émise, En efTet, du moment que le noyau n'apparaît pas immédiatement après la mort de la cellule, son apparition ne peut être attribuée à la suppression de la tonicité cellulaire.

Elles nous confirment au contraire dans notre seconde hypothèse, car on conçoit très bien que pour les réactions chimiques, pour l'autodigeslion du protoplasma, par exemple, la température doive être un facteur important.