CHAPITRE III

Expérimentation

De nombreux expérimentateurs se sont efforcés en utilisant la toxine diphtérique de reproduire chez l'animal les troubles observés en clinique :

— Gordon Sharp dès 1897, perfusant ainsi le cœur de la grenouille note après une courte période d’excitation, un ralentissement progressif, puis l'arrêt au diastole. II compare cet effet à celui des sels de potasse, de la muscarine.

—— Chantmesse et Lamy (1900) observent ie même effet après une période latente, sur le cœur perfusé de la tortue.

— Chevalier et Clerc (1905) opérant sur le cœur isolé du lapin arrivent à des résultats comparables.

— Mentl, enfin en 1926, étudiant l’action de la toxine diphtérique sur des lambeaux isolés du myocarde de divers animaux: lapin, grenouille, escargot, constate surtout chez le premier une accélération durable avec augmentation de l’amplitude des battements, succédant à une courte période de bradycardie et que suit longtemps après une phase d’affaiblissement progressif des contractions. À toutes périodes et chez tous les animaux considérés, l’action habituelle de l’adrénaline pouvait être retrouvée.

Comme on le voit, les conditions dans lesquelles ont été réalisées ces expériences sont par trop éloignées de la clinique pour qu’on puisse en tirer des conclusions utiles. L’inconvénient majeur de ces méthodes, comme nous avons pu nous-mêmes en juger par des expériences portant également sur le cœur isolé du lapin, et de l'escargot, est le suivant: en dehors des simples troubles de nutrition qu'elle détermine si on l’employe à doses massives, une toxine microbienne, bien différente en cela d’un

poison proprement dit ne produit d'effet qu'après une phase fort longue de latence, de plusieurs heures au moins, souvent de plusieurs jours, en tout cas dépassant la période de survie d’un cœur isolé,

Beaucoup plus intéressantes sont les expériences fondées sur l'emploi de l’e.c.g. et permettant de saisir les anomalies dans des conditions bien plus favorables, très comparables à celles que l’on observe en clinique humaine

— Rohmer des 1911, constate par ce procédé qu'il n'existe pas chez le lapin d’affinité particulière du faisceau de His pour la toxine diphtérique.

— Fraser en 1915, releve déjà chez le même animal l'allongement de l’espace P.-Q., des altérations des complexes, des déviations évolutives de l’axe électrique, et rapporte ces troubles à des lésions anatomiques qu'il retrouve dans le myocarde.

— Plus récemment, il faut mentionner tout spécialement les intéressants travaux de Lutembacher (1925-1930), qui s’est attaché surtout à l’étude des anomalies du rythme.

Injectant dans les veines du lapin des doses minimes et répétées de toxine très diluée, il obtient des tracés reproduisant toute la série des troubles rencontrés chez l’homme. Ils traduisent — soit l’hyperexcitabilité des centres automatiques héterotopes : extra-systoles auriculaires, septales, ventriculaires, pouvant encore réaliser le rythme septal, la tachycardie ventriculaire. —— soit l’inhibition des voies de conduction: blocage simple, incomplet, dissociation totale, bloc de branches

Les effets différent suivant la quantité de toxine injectée : aux doses très faibles correspond une imprégnation légère pouvant évoluer vers la guérison et qui se manifeste par des extra-systoles. Des doses plus fortes au contraire déterminent à la fois une inhibition des voies de conduction et une hyperexcita-

bilité des centres hétéretopes, l'association réalisant des arythmies complexes de caractère souvent préfibrillatoire.

Si la toxine par voie intra-veineuse agit tout particulièrement sur le faisceau de His, injectée au contraire dans le péricarde même, elle détermine surtout des troubles du sinus: excitation puis inhibition progressive libérant l’automatisme des centres sousjacents.

D'autre part, l’auteur établit l'existence d'un ralentissement sinusal précoce, seule anomalie qui puisse être attribuée à une influence du système nerveux, et qui succède à une période de latente, absolument constante, s'étendant souvent sur plusieurs jours. Il confirme enfin l’origine myocardique des troubles chservés par l'examen histologique montrant des altérations à la fois du parenchyme et du tissu interstitiel, le faisceau de His n’étant pas spécialement interessé.

— Citons encore les travaux de Nathanson (1929) qui, injectant chez le chat et le lapin des doses minima mortelles de toxine, obtient des altérations presques constante portant sur le complexe ventriculaire et en particulier l'onde T. Il démontre de plus que de semblables anomalies ne peuvent s’expliquer par une action du système nerveux.

— Travaux expérimentaux personnels.

a) Dans une première série d'expériences pratiquées dans le laboratoire du Docteur Lesné et sur ses indications, nous avons essayé de déceler une action de fixation de la toxine diphtérique par le tissu myocardique, en nous basant sur les travaux déjà anciens de Wassermann et Takaki, de Metchnikoff. Ces auteurs démontraient en effet une pareille action du tissu nerveux pour la toxine tétanique.

Après contact prolongé de toxine diphtérique diluée et fraîche avec différents organes broyés cœur, muscles lombaires, cerveau, surrénales, peau,

nous avons pratiqué respectivement sur différents cobayes l’inoculation sous-cutanée de ces divers mélanges contenant des doses égales de toxine. Simultanément des animaux témoins recevaient des doses semblables de toxine non mélangée.

Nos résultats n'ont pas été assez constants pour nous permettre de conclure à une fixation nette par le myocarde ni d’ailleurs par tout autre tissu, y compris le tissu nerveux: Le plus souvent, en effet la période de survie des animaux inoculés avec les divers mélanges ne dépassait pas d’un temps appréciablé celle des animaux témoins ayant recu la même dose de toxine non mélangée.

Toutefois, opérant d'autre part sur des organes de cobayes antérieurement immunisés par l’anatoxine de Ramon, nous avons obtenu des résultats plus nets. Et l'expérience suivante semble prouver dans ces circonstances un certain degré de fixation:

Le7 Septembre sont sacrifié 2 cobayes:

1° Cobaye n° 62: non vacciné;

2° Cohbaye n° 1: vacciné antérieurement par 2 injections intra musculaires d'anatoxine diphtérique aux doses suivantes:

1cCeMS Juillet;

CCM EUNULLIE

Sur chaque animal sont prélevés le cœur et le cerveau qui sont respectivement broyés dans la (oxine diphtérique fraîche provenant de l'Institut Pasteur, diluée à 1/500 et ajoutée en quantité proportionnelle au poids de l'organe,

Contact à la température ordinaire. Durée: 2 heures.

Puis on pratique les inoculations suivantes:

a) Toxine non mélangée, — Cobaye témoin n° 52. Poids: 245 gr: Injection sous-cutanée de: 0 ec 5 de toxine au 1/500 non mélangée: Mort le 10 Septembre.

Cobaye témoin n° 64. Poids: 260 gr: Injection sous cutanée de: 0 ce 25 de toxine au 1/500 non mélangée: Mort le 14 Septembre.

b) Toxine + organes de cobaye non vacciné. — Cobaye n° 65.

Poids 270 gr.: Injection sous cutanée de: 0 ce 5 du mélange:

cœur du cobaye 62 non vacciné + Toxine au 1/500. Mort le 14 Septembre à 15 heures.

Cobave n° 58. Poids 270 gr.: Injection sous cutané de: 0 ce 5 du mélange: cerveau du cobaye n° 62 non vacciné + Toxine au 1/500: Mort le 11 Septembre.

e) Toxine + organes du cobaye vacciné. — Cobaye n° DJ? | Poids 265 gr.: Injection sous cutanée avec 0 cc 5 du mélange: Cœur du cobaye n° À vacciné + Toxine au 1/500: Mori le 15 Septembre à 15 heures.

Cobave n° 60. Poid 265 gr.: Injection sous cutanée avec 0 ce 5 du mélange: Cerveau du cobaye n° 1 vacciné + Toxine au 1/500: Survie.

b) D'autre part, nous avons expérimenté l’action de la toxine diphtérique sur le cœur isolé et perfusé du lapin, sur le cœur de l’escargot, et nous avons noté diverses modifications du rythme et de la contraction.

Toutefois, pour les raisons indiquées plus haut, relatives à la période de latence précédant l'effet véritable d'une toxine microbienne, nous ne croyons pas qu’il soit possible de tirer de ces faits une conclusion transposable ou clinique.

c) Enfin, nous avons utilisé dans notre expérimen- {ation la méthode e.c.g. (1).

I. Après injections sous-cutanées au lapin de doses variables de toxine, nous avons pu retrouver les résultats déjà signalés par différents auteurs.

Cependant, à l’exception de la bradycardie relative sinusale marquant le début de l’intoxication, nous n'avons pas noté de troubles nets du rythme alors qu’au contraire nous constations dans la m2jorité des cas, des altérations des complexes, très comparables dans leur forme et dans leur évolution à ceux que nous avons rencontrés chez l'enfant.

Nous en citerons comme exemple l’expérience suivante: (Lapin N° 4, poids 2 kg 135, voir fig. 7, page 98) où l'examen des tracés successifs montre:

1) Une période de latence succédant à l'injection sous cutanée de 1 ce,5 de toxine diphtérique fraîche, diluée au 1/500, la seule modification étant une légère bradycardie totale d'origine sinusale,

2°) L'apparition progressive d'anomalies isolées de l’onde T,,

(4) Expériences pratiquées dans le laboratoire d’électrocardiologie du Pr. Clerc,

s'associant à l’aplatissement de l'onde auriculaire. Sueccessivement, on assiste à l'aplatissement, l'inversion, l'ébaucha d'une déformation dite «en dûme», cette dernière élant en général rattachée à des troubles coronariens.

3°) Pendant 6 jours, l'onde T est seule touchée, puis, déformalions du complexe dans son ensemble, apparaissant brusquement et précédant la mort de 24 heures,

A aucun moment, sauf quelques minutes avant la fin n’ont pu être observés des troubles du rythme.

Par son évolution s'étendant sur une semaine, l'existence d'anomalies isolées de l'onde T annonçant de longtemps un bouleversement brusque des profils électriques, cette dernière modification précédant de peu la mort, on peut rapprocher, cette observation expérimentale de certaines formes d'angines hypertoxiques rencontrées chez l’enfant.

Dans d’autres circonstances, nous avons pu obtenir, par l'emploi de doses massives : 2 ce de toxine fraiche diluée au 1/100, et peu de temps avant la mort des déformations combinées des complexes reproduisant l’aspect du bloc intra-ventriculaire ou du bloc atypique de branches: Lapin N° 1 (voir fig. &, page 99).

IT. Nous avons également vérifié la solidité de l’immunité conférée par l’anatoxine diphtérique.

N’en n’en citerons pour preuve que l’observation suivante, démontrant qu'une dose de toxine déterminant la mort en 8 jours chez un lapin non vacciné, ne produit sur un animal immunisé aucun trouble apparent, mais seulement des modifications e.c.g. minimes et de courte durée:

Lapin n° 7. Poids: 1 kg 680

Le 31 Août, injection intra-musculaire de 2 ce d’anatoxine,

Le 12 Septembre injection intra-musculaire de 3 ce d'anatoxine. Poids au 12 Septembre: 1 kg 695.

Le 24 Septembre. Poids: 2 kg 020; 1° tracé: normal: Injection sous-cutanée de 1 ee 5 de toxine diphtérique fraîche, diluée au 1/500;

Le 26 Septembre; 2° tracé: légère augmentation du voltage de R. Aspect normal dans l’ensemble;

Fic. 7 (Lapin N° 4). — Déformation progressive de l'onde T après. injection sous-cutanée de 1,5 cc. de towine diphtérique fraiche diluée à 1/500.

en a). — Tracé normal avant l'injection, Rythme 250.

en b). — Tracé 24 heures après l'injection. Normal, Léger ralentissement du rythme: 200.

en c). — Tracé au 4° jour. Rythme: 240. Apiatissement des ondes P et T

en d). — Tracé au 6 jour. Rythme : 210. .Inversion nette de T

en e). — Tracé au 7° jour. Renflement en dôme de l'onde T qui se

greffe sur la branche descendante de R,

en f). — Tracé au 8° jour. o h. 15. Enorme déformation des complexes. Rythme: 210.

en g). — Tracé au 8 jour. 9 h. 20. Bradycardie irrégulière aux

environs de 23,

en h). — Tracé au S jour, 9 h. 50, 5 minutes avant la mort,

Ere. 8..— (Lapin Nour)

Tracé du 19 juin à 9 h. 30 (40 heures

après injection sous-cutanée de 2 cc

de toxine diphtérique fraîche et diluée au 1/100

Déformation et élargissement du groupe QRS. Onde T inverse dans les 3 dérivations. Prédominance gauche, Aspect de bloc de la branche droite.

Le 28 Septembre; 3° tracé: identique au précédent; Le 2 Octobre; 4° tracé: Forte augmentation de lPamplitude

de l'onde T;

Le 4 Octobre: 5° tracé: L’amplitude de l'onde T tend à baisser;

Le 7 Octobre et jours suivants; Tracés d'aspect normal. l'onde T a repris sa forme primitive.

Une injection ultérieure chez le même animal de 3 ce de Toxine au 1/500 n’a produit aucune modification appréciable des tracés.

IT. Enfin l'examen e.c.g. quotidien après injection d’anatoxine nous a permis dans plusieurs cas de constater des modifications légères:

— Alternance électrique dans un cas;

—— Plus souvent variations peu accentuées du voltage de l’onde T.

Ces altérations d’ailleurs étaient de courte durée: 2 à 5 jours, ne se reproduisaient pas après les injections ultérieures d’anatoxine et ne s’accompagnaient d’aucunes modifications apparentes de l’état de santé de l’animal.

Rjmarquons qu’en raison de l’emploi de doses relativement énormes par rapport au poids d'animal (2 cc à 3 ce pour un lapin de 2 à 3 kgs), rien ne permet de conclure à la possibilité de pareilles modifications chez l'homme dans les conditions habituelles de la vaccination anti-diphtérique.