RÉSUMÉ DES MÉTHODES DE COLORATION DES BACTÉRIES

l'examen des bactéries au microscope, nous voyons qu'il faut d'abord les examiner dans l'eau et dans la chambre humide. On les colore ensuite, après demi-dessiccation, par une solution aqueuse faible de violet de méthyl B pendant quelques minutes. Les bactéries ainsi colorées sont examinées immédiatement dans l'eau. Presque toutes se colorent bien par ce procédé.

En même temps que ces examens à l'état frais, on étale une couche très mince du liquide sur des lamelles et on fait sécher à l'air libre ou à la lampe des parcelles de la substance à examiner; on les colore ensuite. Pour iHre sûr de colorer toutes les bactéries, on emploie plusieurs méthodes: l^le procédé de Gram (page 74) ; 2° le procédé de Lœffler (page 80} à l'aide du bleu de méthylène ; 3" la méthode d'Ehrlich (page 76) ; enfin, on laisse pendant 2iheuresles coupes dans une solution d'aniline additionnée de fuchsine, on lave à l'eau distillée, on décolore par l'alcool, on laisse sécher et on monte dans le baume (Babes). Les capsules ou godets contenant ces différents bains colorés doivent être placés dans une chambre humide de Koch.

Les mêmes solutions servent pour la coloration des coupes. Nous recommandons aussi pour les coupes le procédé suivant, qui donne d'excellents résultats pour la plupart des bactéries et en particulier celles de la morve, de la fièvre typhoïde, du choléra, etc. On laisse séjourner les coupes pendant 24 heures dans une solution aqueuse faible de fuchsine ; on lave rapidement à l'eau très légèrement acidulée par l'acide acétique; on les passe dans l'alcool et l'essence de girofle, on les étale sur la lame porteobjet et on les dessèche en les recouvrant de plusieurs couches de papier à filtrer; enfin on les monte dans le baume (Babes).

La méthode de Gram (voyez page 74), suivie de la coloration à la safranine, est celle qui convient le mieux pour colorer les bactéries de la septicémie des souris, les bacilles de l'œdème malin et du charbon, les bacilles du rhinosclérome, les micro-organismes de la diphthérie, les streptococci du phlegmon et de Yérysipèle, les slraphylococci de la suppuration. Pour certains microbes comme ceux du ch;irbon, de l'érysipèle, du phlegmon, etc., il suffit de laisser les coupes pendant une demi-heure. ou une heure dans le bain colorant, puis de les passer dans la solution iodée. Pour d'autres, comme le rhinosclérome, il faut au contraire les y placer pendant 24 ou 48 heures. 11 est bon do colorer ensuite le fond des lamelles et des coupes avec la safranine ou le picro-carmin.

Le micrococcus tetragenus et les diplocoques de la pneumonie seront préparés suivant la méthode de Friedlànder pour voir les capsules. La méthode de Ribbcrt (coloration rapide par une solution concentrée de dahlia et décoloration par l'alcool acidulé) nous a donné de moins bons résultats. Pour la plupart des microbes ronds, on se sert avantageusement de la safranine

TECHNIQUE HISTOLOGIQUE

de Bàle additionnée d'huile d'aniline ou d'une solution aqueuse concentrée de violet de méthyle B dans laquelle les coupes séjournent pendant une heure.

Les bacilles de la tuberculose et de la lèpre seront colorés par la méthode d'Ehrlich et le fond teinté d'une couleur différente de celle qu'on aura fixée sur les bactéries. Dans les productions syphilitiques, les bacilles se colorent par le procédé de Lustgarten (voyez l'article consacré à la syphilis).

Le bleu de méthylène en solution alcaline d'après le procédé de Lœffler s'applique aux préparations de la septicémie des lapins, du choléra des poules, de la fièvi'e à rechutes, etc. Les préparations doivent rester pendant 24 heures dans le liquide colorant, après quoi on les lave rapidement dans l'eau à peine acidulée et dans l'alcool.

Pour colorer l'actinomycose sur des lamelles où on a fait dessécher le pus ou les grumeaux, on emploie, pour les filaments, la méthode de Gram, et pour les crosses, la safranine dissoute dans l'eau d'aniline, pendant vingt-quatre heures, suivie de l'action de l'iodure de potassium iodé (Babes) .

Essences et huiles destinées à éclaircir les 'préparations. — Si les préparations sont trop colorées, on les laisse plus ou moins longtemps dans l'alcool, puis dans l'essence de girofle. On les reporte encore de l'essence dans l'alcool, puis dans l'essence.

On peut se servir de diverses espèces d'huiles dans le même but.

L'huile d'origanum est avantageuse si les pièces ont été enfermées dans la celloïdine.

Cette huile en effet ne dissout pas la celloïdine, de telle sorte que la coupe reste dans le même état et qu'on peut y voir les parties les plus délicates soutenues par la celloïdine. L'huile d'origanum dissout le superflu de la couleur employée, plus rapidement et plus complètement que l'essence de girofle.

L'essence de girofle est universellement employée pour éclaircir toutes les préparations; seulement les préparations faiblement colorées ne supportent pas son action dissolvante. On se sert alors avec avantage de l'essence de térébenthine ou de bergamote. Ces deux liquides sont indiqués pour les préparations faiblement colorées à l'aide de la safranine, pour les tissus tuberculeux ou lépreux traités selon le procédé d'Ehrlich et pour les zooglœes de la tuberculose. Pour les objets faiblement colorés, comme par exemple pour les bacilles de la morve, on emploie l'huile de cèdre.

Baume du Canada. — Le baume du Canada, lorsqu'il est dissous dans le chloroforme, pâlit et décolore souvent les préparations dans lesquelles les bactéries ont été teintées par l'aniline. 11 convient, dès lors, de se servir du baume pur. On peut encore mêler le baume avec un peu de xylol, qui