COLORATION DES MICROGOQUES DE LA PNEUMONIE

ensuite dans un liquide contenant à la fois de l'acide nitrique et du bleu de méthylène. On foit d'abord bouillir, dans un tube de verre, 2 à 3 centimètres cubes de la solution suivante :

On verse dans une petite capsule, en ajoutant 4 ou 5 gouttes d'une solution très foncée de fuchsine ou de rouge de Magenta. On laisse la lamelle quatre ou cinq minutes; on la retire et on la plonge pendant deux minutes dans le liquide suivant, qui est préparé d'avance et filtré

Bleu de méthylène à saturation.

La lamelle est lavée à l'eau distillée, puis déshydratée à l'alcool absolu, séchée et montée dans le baume.

Cette préparation rapide nous paraît moins sûre que la précédente; elle n'oli're du reste rien de nouveau.

Coloration des microcoques de la pneumonie. — S'il est facile de voir ces bactéries par le violet B et la solution iodée sur les lamelles oii l'on a desséché une mince couche de l'exsudat pulmonaire ou des crachats, il n'en est plus de même sur les coupes du poumon hépatisé. Il est très difficile en etfet de constater les raicrocoques avec des capsules sur les coupes.

D'après Friedlander, on y arrive en mettant les coupes pendant vingtquatre heures dans le mélange qui suit :

Fuchsine 1 gramme.

Eau distillée 100 —

Alcool 5 —

Acide acétique glacial 2 —

Les préparations sont placées dans l'alcool, puis, pendant deux minutes, dans une solution d'acide acétique à 2 p. 100 et ensuite dans l'eau, déshydratées enfin par l'alcool et l'essence de girofle, et montées dans le baume.

On arrive au môme résultat en mettant les coupes pendant vingtquatre heures dans un composé d'eau distillée 100 grammes, de solution alcoolique de violet de gentiane bO grammes, et d'acide acétique 10 grammes. On les décolore ensuite par un séjour de quelques minutes dans une solution d'acide acétique à 1 p. 100, on les déshydrate par l'alcool et l'essence de girofle et on monte dans le baume.

Eau distillée. .

Huile d'aniline Alcool pur

100 grammes, a —

Eau d'aniline.

Acide nitrique Alcool pur. . . .

30 grammes.

80 TECHNIQUE IIISTOLOGIQUE.

Bleu de méthylène. — Le bleu de méthylène a été recommandé par Weigerl, Elirlich et par Koch pour la coloration des bactéries. D'après notre expérience personnelle, celte couleur ne donne pas des préparations très précises ni durables. Il est vrai que les bactéries traitées par une solution aqueuse ou alcoolique concentrée de cette substance se colorent vite et que la couleur résiste bien à l'alcool et l'essence de girofle, mais elle est pàle et s'eftace bientôt. Koch a employé cette couleur lorsqu'il a découvert les bacilles de la tuberculose. Il a placé les lamelles pendant plusieurs heures dans une solution faible de ce bleu, dans de la potasse à l pour d 0,000. Les lamelles ont été portées ensuite dans une solution aqueuse concentrée de vésuvine pendant quelc[ues secondes, puis lavées, desséchées et montées dans le baume.

Pour colorer les bacilles de la fièvre typhoïde, de la morve et de la diplithérie, on a recours avec avantage au procédé suivant : on mélange 2 grammes d'une solution aqueuse de bleu de méthylène avec 100 grammes d'une solution de potasse très faible à -ï-jtjô- Les coupes se colorent vite dans cette solution. On traite ensuite par l'acide acétique faible, l'alcool, l'huile de cèdre et le baume. Cette méthode donne des préparations qni sont bonnes, mais peu persistantes. Les microbes apparaissent nettement quand on les regarde dans l'eau ou l'acétate de potasse après cette coloration (Lôfller).

Coloration des zooglœes de la tuberculose de Malassez et Vignal. — C'est aussi parle bleu de méthylène que Malassez et Vignal ont réussi à colorer leurs zooglœes. Ils y arrivent par l'un des deux procédés suivants :

A. On laisse pendant un jour les coupes dans un bain ainsi préparé :

Eau distillée saturée d'iiuile d'aniline et filtrée 9 cent. cub.

Solution concentrée de bleu de méthylène dans l'alcool • à 90O 1 —

On colore ensuite dans le mélange suivant :

Solution aqueuse de carbonate de soude h 2 pour 100.. 2 volumes. Alcool absolu 1

Cette opération délicate doit être surveillée en portant les préparations sous le microscope afin de l'arrêter à propos. On laisse ensuite les pièces un certain temps dans l'eau distillée, après quoi on les déshydrate rapidement par l'alcool absolu et l'essence de girofle et on les monte dans le baume.

B. On place les coupes dans le bain suivant :

BRUN DE BISMARCK, VÉSUVINE. SAFRANINE.

Solution de carbonate de soude h 2 pour 100 10 volumes.

Eau distillée saturée, d'huile d'aniline 5 —

Alcool absolu 3 —

Solution de bleu de méthylène laite avec 9 volumes d'eau distillée et 1 volume de solution concentrée de bleu de méthylène dans l'alcool à 90" 3 —

Cé mélange bleu clair devient verdâlre et donne un précipité au bout de quelque temps; mais il n'en est pas moins bon, il suffit de le filtrer. Les coupes restent dans ce bain deux ou trois jours. Elles sont ensuite mises dans l'eau distillée, puis dans l'alcool absolu légèrement teinté avec du bleu de méthylène ; on les éciaircit avec de l'essence de bergamote ou de térébenthine, et on monte dans le baume ou dans la résine Dammar dissoute dans le chloroforme.

Brun de Bismarck et vésuvine. — Ces couleurs sont bonnes pour teindre le fond de certaines préparations dont les bacilles sont colorés en rouge ou en violet. On arrive facilement aussi à colorer les bacilles du charbon par une solution de brun de Bismarck dans la glycérine. On met dans ce but une goutte de la solution glycérinée sur une lamelle où l'on a fait dessécher du sang charbonneux et on examine immédiatement. Le même procédé suffit pour colorer les bactéries de la fièvre récurrente, qu'il s'agisse de lamelles ou de coupes. Ces préparations peuvent être conservées en remplaçant la glycérine colorée par de la glycérine pure. Elles donnent de moins bons résultats lorsqu'elles sont déshydratées après avoir été colorées.

La coloration des bactéries en brun est surtout utile pour les reproductions photographiques; car ces dernières réussissent mal à représenter les bactéries imprégnées de rouge, de bleu ou de violet. Aussi est-il à regretter que certains bacilles, ceux de la tuberculose, de la morve, etc., se colorent très mal par le brun.

La purpurine, le magdala, le vert d'aniline sont peu employés dans la recherche des bactéries, parce qu'ils donnent une coloration peu intense et peu résistante.

Safranine (Babes, Arch. f. micr. Aiiat. 1883, I). — La safranine se range entre les couleurs d'aniline et l'amidoazobenzol. Pour la recherche des bactéries, la meilleure substance est celle de la fabrique de Bàlc.

Pour colorer les bactéries, on emploie une solution aqueuse de safranine, préparée à chaud, mêlée à S p. 100 d'huile d'aniline, agitée et filtrée sur un filtre humide.

On laisse pendant une ou plusieurs heures les coupes dans cette solution

COnNIL ET DABGS. — 2» Cd. 6

82 ' TECHNIQUE HISTOLOGIQUE

à froid ou pendant quelques minutes dans la solution à 60°, Après quoi on traite par l'alcool ou par la solution d'iodure de potassium iodé et l'on décolore ainsi tout le tissu à l'exception des bactéries, des ligures de multiplication indirecte, de la substance hyaline ou calcaire et de certaines parties des nerfs. On lave alors à l'eau distillée, on passe rapidement les coupes dans l'alcool pur, à l'essence de girofle et on monte dans le baume. Si on laisse le tissu coloré, les bactéries ne s'en distinguent pas moins a une couleur plus brunâtre, tandis que les noyaux sont d'un rouge clair. La safranine permet surtout d'étudier les bactéries rondes, les zooglœes et certains bacilles. Elle est aussi très avantageuse pour la coloration du fond des préparations. Ce procédé permet d'étudier les inflammations et dégénérescences produites par les bactéries. Les parties en dégénérescence hyaline sont en effet de couleur rouge jaunâtre, celles en dégénérescence calcaire de couleur rouge foncé ; les figures de multiplication indirecte des noj'aux que nous avons décrits les premiers dans les inflammations bactériennes (tuberculose, lèpre, variole) sont aussi très manifestes.

Dahlia. — Cette matière colorante, recommandée par Ehrlich, a été emploj'ée surtout par Ribbert pour colorer les micrococci de la pneumonie et leurs capsules. Elle réussit à montrer des bacilles là où avec d'autres couleurs on ne voyait que des microcoques. On emploie une partie de dahlia pour 100 d'eau distillée, SO parties d'alcool et 12 1/2 d'acide acétique glacial.

Éosine. — L'éosine, couleur acide d'un beau rouge, employée en solution aqueuse ou alcoolique, colore tous les tissus, mais n'a pas d'élection sur les micro-organismes. On l'emploie pour colorer le fond des préparations dont les bactéries .sont teintées en bleu ou en violet.

Elle colore bien les masses granuleuses qu'on trouve au milieu des cellules géantes de la tuberculose. Les capsules des bactéries de la pneumonie sont aussi mises en évidence par elle. Mais ce sont surtout les champignons parasitaires de la peau (achorion, favus, microsporon, etc.) qu'on colore bien avec la solution alcoolique d'éosine. La solution alcooUque possède aussi une élection sur les fibres élastiques (Baizer). Les coupes colorées en vue d'étudier les champignons sont examinées dans la potasse à 40 p. 100.

Coccinine. — Cette substance, d'un très beau rouge, a tous les avantages de l'éosine pour teindre le fond des préparations dans lesquelles les bacilles ou microcoques sont colorés en bleu ou en violet. Elle montre mieux les noyaux.

Résumé. — Si nous résumons maintenant les procédés à, suivre pour