ÉTUDE DES BACTÉRIES DANS LES CULTURES

est très élevée comme en été, une chambre ou une vitrine dans laquelle on place de la glace de façon à entrelenir une chaleur égale de 15 à 16°.

Pour produire le développement des microbes anaéorobies, il suffit d'inoculer la partie profonde des tubes ou bien de placer une mince lame de verre de Moscovie s>ur la plaque de gélatine ou d'agar-agar inoculée au préalable. Les microbes anaérobies germent sous la lamelle de verre, tandis que les aérobies se développent mal ou ne vivent point.

Pour étudier la vie des bactéries dans des liquides privés d'oxygônc, l'appareil le plus simple consiste dans un petit ballon contenant une solution nutritive ensemencée avec les bactéries qu'on veut étudier. On adapte le col du ballon à un aspirateur (pompe à mercure ou aspirateur par un courant d'eau). On place le ballon dans un bain d'eau à 40". Le liquide entre en ébullition. Au bout d'une demi-heure, pendant celle aspiration, on ferme le col du ballon à la lampe à émailleur.

Pour étudier le mode d'accroissement des bactéries, on emploie surtout les petites chambres humides (voyez plus haut) et une goutte de bouillon neutralisé; mais il est souvent avantageux de remplacer celui-ci par du sérum de bœuf non gélatinisé. Ces cultures, suivies pendant un assez long temps, permettent parfois d'observer des modifications dans leur croissance au bout d'un mois ou même plus.

Dans certaines maladies aiguës infectieuses, les bactéries se développent très vite, et ce sont alors souvent celles-là qui forment les premières colonies observées sur la gélatine.

Dans quelques maladies chroniques au contraire dont les bactéries se développent lentement, les colonies qui apparaîtront rapidement sur la gélatine n'appartiennent pas en propre à la maladie qu'on veut étudier; on peut habituellement distinguer les germes venus de l'air parce qu'ils siègent à la surface de la gélatine. Aussi faut-il, pour l'étude des bacilles des maladies chroniques comme la tuberculose, pratiquer la première culture dans un appareil tout îi fait stérilisé, comme dans une éprouvelte, ou dans un matras Pasteur ou dans une petite cuve bien fermée.

Nous verrons, îi propos de chacune de nos monographies sur les maladies considérées en particulier, que les colonies des différentes espèces de microbes, pathogènes ou non, se développent d'une façon diil'érenlo dans les subslances nutritives solides. Si la substance inoculée n'était pas pure, la gélatine sera couverte de petites gouttes isolées, de formes et de couleurs diverses. Auprès d'elles on rencontre aussi des champignons de moisissure dont les ilôts étoiles gris ou verdàtres sont plus grands que les colonies de bactéries. Celles-ci sont tantôt élevées, tunlùt plaies ; elles liquéfient ou non la gélatine. Au lieu de gouttes, on voit quehiuefois des pellicules ou des réseaux.

110 MiîïriODES DE CULTIIIIE DES HACTÉR1ES.

Pour culliver les micro-organismes, il esl nécessaire d'avoir à sa disposition les appareils dessinés dans les figures précédentes. 11 faut de plus avoir à sa disposition une cinquanlaino de tubes contenant les substances gélalinisées dont il vient d'ôtre question, et qu'on conserve dans une cloche contenant de l'air humide, plusieurs aiguilles de platine, une cinquantaine de lamelles minces de 10 sur 12 centimètres, et une dizaine de chambres humides et de lames excavées.

Filtres. — Les filtres dont on se sert doivent être construits de telle sorte que lés particules les plus ténues, telles que les bactéries, ne puissent pas passer au travers de la substance filtrante. C'est ainsi que Pasteur, Chauveau, etc., se sont servis de filtres en terre de pipe ou en plâtre. Le plus souvent il est nécessaire d'opérer dans le vide, afin d'utiliser la pression atmosphérique pour aider à la filtration du liquide. Nous avons employé plusieurs fois et nous recommandons le procédé suivant du professeur Gautier. Gautier stérilise tous ses liquides de culture à froid par filtration sur la porcelaine de Sèvres dégourdie à 1200", ou mieux sur la faïence non vernissée.

Ses appareils pour séparer les bactéries du liquide qui les renferme ont ceci de particulier qu'ils présentent à la filtration une grande surface filtrante de dehors en dedans et ne comportent aucun ajustage de nature organique.

Ces filtres ont la forme de bouteilles à goulot allongé, à travers lequel pénètre jusqu'au fond un tube demi-capillaire soudé au haut du goulot par un fondant vitrifiable avant le rouge. Ils sont reliés, sans caoutchouc, par un ajutage conique à l'émeri, à un ballon à deux tubulures soudées dans le verre. Par l'une on fait le vide dans l'appareil à ti'avers un tube à amiante, par l'autre on met le ballon en rapport avec le filtre de faïence.

La stérilisation de tout cet appareil où il n'entre que du verre, de la faïence et de l'amiante, est, on le comprend, extrêmement facile.

Gautier a observé que la porcelaine, qui convient particulièrement pour les hquides acides, permet, quand il s'agit de liqueurs neutres ou alcalines, le passage de quelques corpuscules-germes, d'où il résulte une altération ultérieure des liqueurs. Mais avec les liqueurs les plus putrescibles, telles que le sérum, l'infusion de pois, le lail, jamais les liquides filtrés sur la porcelaine ne contractent de fei'mentaliou putride.

Toutefois il importe, pour arrêter toute fermentation quelle qu'elle soit, de recourir à des filtres en faïence de Creil, assez épais et bien cuits. Gautier a pu filtrer avec eux plusieurs litres de sérum et de lait qu'il a conservés depuis trois ans absolument claii's et inodores. Les liqueurs

PROPRIÉTÉS CHIMIQUES DES lîACTÉRIES. Hl

filtrées, conservées dans des flcacons biLubulés, peuvent être très facilement transvasées sans crainte de contamination par l'air, dans les vases habituels de culture.

Pour conserver les cultures obtenues, il suffit souvent do fermer les éprouvettes avec du parchemin ou des bouchons de caoutchouc.

Si, par ces procédés, on a réussi à trouver une bactérie bien caractérisée pour une maladie ou pour une fermentation quelconque, on doit se convaincre que cette bactérie est bien réellement la cause de la maladie ou de la fermentation. Dans ce but on filtre le liquide contenant des bactéries et on voit si le liquide filtré qui ne contient plus de bactéries est capable de produire la maladie ou la fermentation ; ou bien on chauffe à l'ébullition le liquide contenant des bactéries. Enfin on examine les produits d'extraction du liquide contenant des bactéries.

Pour étudier les propriétés chimiques des bactéries, on les mêle avec différentes substances gazeuses ou fermentescibles, avec des substances chimiques désinfectantes capables de les tuer toutes, etc.

Pour voir leurs relations avec l'oxygène, on les cultive dans des ballons Pasteur dont on a d'abord chassé l'oxygène en les chaufl'anl et qu'on a fermés ensuite rapidement à la lampe d'émailleur; on fait ensuite pénétrer le liquide contenant les bactéries en y plongeant l'effilure latérale du tube, ou bien on les cultive dans le vide.

Il existe des appareils, des chambres humides très simples avec des porle-objets en communication avec différentes substances gazeuses qu'on peut laisser agir immédiatement sur les bactéries, de telle sorte qu'on |)eut étudier sous le microscope l'action de ces substances gazeuses.

Il est nécessaire de se rendre compte des propriétés chimiques dos bactéries, des décompositions qu'elles déterminent et des produits chimiques qui en résultent; c'est la partie de la bactériologie la plus récemment étudiée et qui nous semble appelée à un grand avenir (voyez le chapitre II).

Il n'est pas douteux que certaines espèces engendrent des poisons chimiques spéciaux : tels sont les poisons narcotiques du choléra des poules; telle est l'action escharotiquedubacilledu charbon; les bactéries de l'ozène et d'autres bactéries saprogènes produisent à la fois une fermentation putride et une maladie; elles sont à la fois saprogènes et pathogènes. D'après Brieger, certains bacilles donnent une fermentation qui dégage de l'acide propionique, et ils sont en même temps pathogènes pour le cobaye. Il faut aussi savoir si des bactéries données assimilent, dans leur nutrition, l'azote et le carbone par la décomposition des corps simples, ou s'ils décomposent des alhuminatcs et des hydi'atcs de carbone.

Pour constater que certaines bactéries dissolvent l'albumine, on com-

H2 MÉTHODES DE CULTURE DES BACTÉRIES

mence par coaguler de la caséine, de la filirine, de 1 albuniiiie de l'œuf. On en place de petiLs morceaux dans l'eau distillée, dans l'eau mêlée avec OB'-,! p. 100 d'exlrait de viande, el dans l'eau additionné de 0^',\ p. 100 de sucre de raisin (Hueppe). On stérilise et on ensemence ensuite les bactéries à examiner.

Par une méthode analogue, il est facile de savoir si les bactéries dissolvent les dissacharates, et si elles produisent du sucre lorsqu'on les ensemence dans une solution d'amidon.

Pour étudier certaines propriétés des produits résultant du développement des bactéries, on les cultive sur de grands cristallisoirs contenant de l'agar-agar, puis, au bout d'un certain temps, cette substance nutritive est employée pour de nouveaux ensemencements de bactéries de diverses espèces. On peut de cette façon constater l'action des corps chimiques produits par les premières bactéries ensemencées sur le développement de bactéries de la même espèce ou d'espèces différentes (Babcs). On peut aussi faire une culture dans un milieu liquide et fdtrer ensuite le liquide sur un filtre qui ne laisse pas passer les bactéries (voyez page H). On peut enfin tuer les bactéries par la chaleur. Le liquide modifié par les bactéries servira aux expériences et recherches chimiques (chapitre II).

Culture des bactéries par l'expérimentation chez les animaux. — En ce qui concerne les bactéries pathogènes, la meilleure preuve de leur action nous est donnée par les expériences sur les animaux.

On peut même employer avantageusement le sang, la lymphe ou une partie limitée du corps de l'animal, sa cornée, par exemple, pour isoler Ici microbe pathogène des autres microbes accidentels. Mais il faut toujours se rappeler que les bactéries de l'air, de l'eau, des sécrétions et excrétions physiologiques et, d'une façon générale, des bactéries accidentelles, peuvent produire des maladies qu'on peut confondre avec celle qu'on a l'intention de déterminer. De plus si le liquide qu'on inocule renferme des substances irritantes, celles-ci peuvent être la cause de lésions qui parfois seront accompagnées d'une invasion de bactéries. Ainsi certaines substances injectées dans le sang favorisent l'entrée et le développement de diverses bactéries non pathogènes.

Si les instruments avec lesquels on opère ne sont pas propres, s'il se produit chez l'animal une inflammation locale consécutive à l'inoculation, cette dernière deviendra souvent la porte d'entrée de différentes bactéries qui se confondent avec celle qui a été inoculée. Si l'on injecte une grande quantité d'un liquide putréfié, ce sont souvent les produits de la putréfaction et non les bactéries qui tuent l'animal.

Il faut en conséquence tâcher d'éviter loutes ces causes d'erreur; il