ESSENCES. — HUILES. — BAUME

les, de la fièvre à rechutes, de la diphthérie, de la blennorrhagie, etc. Les préparations doivent rester pendant 24 heures dans le liquide colorant, après quoi on les lave rapidement dans l'eau un peu acidulée et dans falcool.

Pour colorer l'actinomycose sur des lamelles où Ton a fait dessécher le pus ou les grumeaux, on emploie, pour les filaments, la méthode de Gram- Weigert, et pour les crosses, la safranine dissoute dans Teau d'aniline d après la méthode indiquée à la page 81 , pendant vingt-quatre heures, suivie de l'action de l'iodure de potassium iodé (Babas).

Essences et huiles destinées à éclaircir les préparations. — Si les préparations sont trop colorées, on les laisse plus ou moins longtemps dans une solution faible de chlorure de sodium, dans l'alcool, puis dans l'essence de girofle. On peut aussi les mettre dans de l'alcool très faiblement acidulé par l'acide acétique. On les reporte encore de l'essence dans l'alcool, puis dans l'essence.

On peut se servir de diverses espèces d'huiles dans le môme but.

L'huile d'origanum est avantageuse si les pièces ont été enfermées dans la celloîdine.

Cette huile en effet ne dissout pas la celloîdine, de telle sorte que la ' coupe reste dans le môme état et qu'on peut y voir les parties les plus délicates soutenues par la celloîdine. L'huile d'origanum dissout le superflu de la couleur employée, plus rapidement et plus complètement que l'essence de girofle.

L'essence de girofle est universellement employée pour éclaircir toutes les préparations ; seulement les préparations faiblement colorées ne supportent pas son action dissolvante. On se sert alors avec avantage de l'essence de térébenthine ou de bergamote. Ces deux liquides sont indiqués pour les préparations faiblement colorées à l'aide de la safranine, pour les tissus tuberculeux ou lépreux traités selon le procédé d'Ehrlich et pour les zooglœes de la tuberculose. Pour les objets faiblement colorés, comme par exemple pour les bacilles de la morve, on emploie l'huile de cèdre. Pour éviter la décoloration des bactéries il est avantageux de colorer l'essence môme par la couleur avec laquelle on avait coloré la préparation, ou bien avec une couleur complémentaire pour colorer les parties qui ne sont pas colorées par les couleurs d'aniline ou qui retiennent avec moins d'énergie, la couleur que les bactéries. Cette méthode de coloration par les essences, employée depuis longtemps par Tun de nous, {Ueber Safraninfarbung. Arch, f. micr. Anat. 1882) a été réglée dans la technique bactériologique par Kûhne.

Baume de Canada. — Le baume du Canada, lorsqu'il est dissous dans le chloroforme, pâlit et décolore souvent les préparations dans lesquelles les bactéries ont été teintes par l'aniline. Il convient, dès lors, de se servir du baume pur. On peut encore môler le baume avec un peu de xylol, qui ne décolore pas l'aniline, et on a ainsi un baume liquide. Nous conseillons l'emploi du baume pur conservé dans des tubes de peintre et pour

94 TECHNIQUE HISTOLOGIQIJE.

la conservation des bactéries qui se décolorent facilement, du baume presque sec. On met une petite goutte du baume presque sec sur la préparation qu'on place sur une plaque chauffée, jusqu'à ce que le baume s'étale. Pour examiner et conserver pendant un certain temps les préparations non déshydratées contenant des bactéries colorées, on fait passer entre la lame et la lamelle de verre une goutte d'acétate de potasse concentrée. Si Ton tentait de les conserver dans la glycérine, cette substance dissoudrait très rapidement et complètement toutes les couleurs d'aniline fixées sur les microbes, qui deviendraient alors invisibles.

Mensuration et dessin des bactéries. — Pour mesurer les bactéries, on dessine d'abord avec la chambre claire un micro-millimètre objectif mis sur la platine du microscope. On mesure la grandeur de chaque division; on règle le microscope en montant ou on descendant le tube jusqu'à l'échelle qu'on veut avoir et qui représente un grossissement déterminé. On sait alors à quel grossissement on dessine les objets. Si on veut les mesurer, il suffit de mesurer les objets dessinés à la chambre claire et de reporter leurs diamètres à Téchelle connue.

Pour reproduire des dessins de bactéries, il faut se servir d'une chambre claire. La chambre claire de Nachet donne avec les objectifs à immersion homogène de très bonnes images, moins claires assurément qu'avec de faibles grossissements, mais très suffisantes pour suivre les contours des objets à dessiner. Avec l'habitude du microscope et du dessin, on arrive à faire de très bons dessins de bactéries. Mais quand elles sont petites, il est difficile d'en dessiner les détails d'une façon tout à fait correcte et précise.

Un moyen excellent pour dessiner les bacilles en même temps que le tissu, consiste à calquer la projection électrique fournie par le microscope électrique.

Microscope électrique. — L'instrument dont nous nous servons à Bucarest est construit d'après le principe de celui de Slricker à Vienne (Gartner, das electrische Microscop), Nous l'avons modifié de telle sorte qu'on peut maintenant projeter devant un nombreux auditoire des préparations de bactéries isolées ou vues sur des coupes du tissu qui les contient. Notre modification consiste dans un agrandissement de l'appareil et dans l'emploi des lentilles apochromatiques les plus fortes. Nous intercalons entre la source de lumière et la préparation microscopique un condensateur analogue à cplui de Abbé, puis nous supprimons le diaphragme.

L'avantage de l'appareil pour l'étude topographique des lésions bacté- .riennes est facile à comprendre : avec cet appareil, en effet, on voit à la fois les bactéries et une partie du tissu ayant de 2 à 5 millimètres, le tout projeté sur un plan de 2 mètres de diamètre. L'emploi de l'appareil permet au mieux l'enseignement de l'histologie et de la bactériologie.

Microphotographie. — Le dessin peut remplacer la photographie pourvu qu'il soit fait par un habile dessinateur qui soit en môme temps microgra-

MICROPHOTOGRAPHIE. 93

phe. 11 serait exagéré de nier la possibilité de reproduire les micro-organismes autrement que par la photographie, li est possible en effet, par le dessin, de colorer les bactéries et de reproduire les tissus qui les entourent avec toutes les couleurs qu'ils présentent. Mais la photographie est le meilleur et le plus fidèle mode de reproduction des bactéries, et de leurs dimensions. En reproduisant, par exemple, par la photographie les divisions du micro-millimètre objectif, il suffit de comparer ces dernières avec les bactéries obtenues avec le même appareil et le même grossissement, pour connaître exactement leur diamètre.

Par la photographie, on peut obtenir des images qu'on ne voit pas & Tœil nu parce que la plaque photographique est plus sensible que Toeil humain, ce qui permet de donner aux lecteurs la certitude de la réalité des objets.

La photographie est difficile, exige un très bon appareil, de ITiabileté, beaucoup de temps. Avec les forts grossissements, la lumière n'est pas toujours suffisante pour fournir de bonnes images. La limite des objets devient parfois peu précise. On a toujours un très petit champ visuel; on ne réussit pas ou Ton réussit très difficilement à reproduire à la fois les bactéries et les tissus, de telle sorte que les uns ou les autres y perdent. On ne peut pas non plus reproduire toutes les bactéries qui se trouvent dans le champ visuel. Koch a donné ^ d'excellentes images photographiques de la plupart des bactéries pathogènes; cependant Koch, qui a publié tant de photographies dans le premier volume des Mélanges de VOffice impérial de santé, n'en a donné aucune dans le second.

Les imperfections dans la reproduction des microbes par la photographie, que nous venons de signaler, ont été en grande partie évitées par l'emploi des lentilles apochromatiques de Zeiss qui présentent tant d'avantages en ce qui concerne la clarté et la netteté des images microscopiques et par les lames iso- ou orthochromatiques. On doit dire aujourd'hui que la photographie des micro-organismes est devenue, par son perfectionnement, indispensable pour leur description. Koch, Israël et Roux ont perfectionné les appareils microscopiques destinés pour la microphotoj^raphie.

En général on emploie un appareil stable horizontal, qu'on peut tirer jusqu'à la longueur de 1 mètre à 1 mètre et demi ou bien l'appareil indiqué par Plagge, construit par Stegemann à Berlin, qu'on peut disposer horizontalement, incliné ou verticalement. Avec cet appareil on peut mesurer et régler la longueur de la chambre noire et par suite le grossissement à l'aide de vis. Nous nous sommes servis exclusivement d'un microscope apochromatique de Zeiss avec une lentille oculaire par laquelle on peut facilement projeter l'image précise sur la plaque sensible, de sorte que, si on se sert de cet oculaire, l'image se projette sans qu'il soit nécessaire de mettre de nouveau au point. Nous recommandons l'éclairage de l'objet microscopique par un héliostat, car il vaut mieux attendre le soleil pour

1. Beilvage zur Biologie der Pffanzen, 2o vol., 3« livraison, p. 399, 1877, et MiUheilungen aus der kais. Gesundheîlsamte, t. I.

faire ses photographies que de faire usage de Téclairage artificiel. Cependant les belles microphotographies publiées par Roux dans les Annales de Pasteur démontrent la valeur de Téclairage oxhydrique.

L'éclairage dont se sert Roux consiste dans un chalumeau vertical du système Brin. Il est formé de deux tubes concentriques; le tube intérieur amène le gaz d'éclairage, le tube extérieur Toxygène. La flamme entoure une petite perle de magnésie qu'on fabrique soi-même. Pour cela on broie, dans un mortier, de la magnésie dans Teau distillée, on en fait une pâte qu'on roule dans ses doigts comme une pilule, on la met sur un fil de platine, on la sèche à Tétuve à eau bouillante pendant quelques heures ; elle est alors très friable; on la place enfin au centre du chalumeau oxhydrique et on la chauffe doucement d'abord et ensuite jusqu'à la plus haute température. Le chalumeau renfermé dans une lanterne portée sur un support métallique peut être rapproché ou éloigné du microscope. Un miroir réflecteur et des lentilles permettent d'avoir un faisceau parallèle. Pour ne pas avoir une lumière trop intense, il est préférable d'interposer entre la source de lumière et le microscope des verres ou des solutions colorées. Avec les glaces orthochromatiques destinées à reproduire des préparations colorées par la fuchsine ou par le violet, on se sert d'un verre vert foncé qu'on combine avantageusement avec une couche de solution de gomme-gutte. Roux recommande pour son appareil des liquides jaunes, l'acide picrique par exemple.

Lorsqu'on fait usage de faibles grossissements, on met entre la lumière et le microscope un verre finement dépoli.

Israël et Grawitz emploient pour leurs photographies la lumière du pétrole; seulement cette lumière n'est pas assez intense si l'on se sert de forts grossissements; le pétrole donne une grande chaleur à laquelle on doit exposer longtemps les plaques sensibles, ce qui est nuisible à la netteté des images. La lumière électrique, au contraire, donne de très bons résultats. Le microscope est fixé, son col est enveloppé dans la partie inférieur conique de la chambre noire, la vis microscopique est fixée à une barre de fer qui se prolonge jusqu'à la partie opposée de la chambre noire, de sorte qu'on peut facilement mettre au point l'image sur la glace dépolie. Les châssis, de 21 centimètres de diamètre, peuvent être construits de façon à contenir deux plaques sensibles. Roux se sert d'un châssis qui porte à la fois la glace dépolie qui sert à la mise au point et la glace sensible. Il glisse sur deux galets et dans une rainure fixée sur le porte-châssis. Gomme plaque sensible, nous recommandons les plaques orthochroniatiques d'Angerer à Vienne, d'Azalin de Saxe à Berlin, ou les glaces isochromatiques à l'éosine préparées par Attout-Tailfer.

Le temps de pose avec la lumière directe du soleil dure, pour un grossissement de iOO diamètres avec un système apochromatique, de iO à 40 secondes environ, avec l'éclairage Brin 1 à 40 minutes.

Les plaques sensibles pour les préparations non colorées sont les glaces de bromure d'argent qu'on emploie pour la photographie des objets microscopiques.

On sait que les plaques sensibles s'altèrent quelques semaines après

leur fabrication, et qu'il faut mettre les plaques dans le châssis dans un cabinet tout à fait noir.

Les plaques exposées sont développées de la manière suivante : on prépare d'avance un mélange d'acide oxalique et de potasse concentrée à froid dont on mêle quatre parties avec une partie de solution concentrée de sulfate de fer; on ajoute ensuite douze gouttes d'une solution de bromure de potassium. On verse lentement cette solution sur la partie sensible des plaques placées au fond d'une assiette à fond plat; on agite lentement la solution. Au bout d'une minute à une minute et demie, on les lave dans un courant d'eau, et on les place dans une cuve contenant de l'hyposulfite de soude. Pendant la première partie de l'opération, il faut éviter toute lumière, surtout pour les plaques orthochromatiques; mais ensuite on peut regarder de temps en temps la surface dorsale de la plaque, pour voir si elle est encore blanche. On retire la plaque quelques minutes après, si l'on voit que cette partie devient grisâtre.

Par ce procédé, le négatif est fixé, on le lave d'abord dans la chambre noire sous un courant d'eau et, pour éloigner tout précipité, on le plonge pendant vingt-quatre heures dans un vase contenant de l'eau, après quoi on le sèche à l'air.

La plaque sert ensuite pour faire des positifs, que réussit n'importe quel photographe. Pour juger la réussite du négatif, il faut se rendre compte que, dans une bonne photographie, le fond doit être très pâle tandis que les bactéries sont très foncées et leur limites très nettes. En regardant la face opposée du négatif au soleil sur un fond noir, on voit apparaître un positif qu'on peut juger. On peut d'ailleurs facilement produire un positif en employant une glace sensible préparée avec le bromure d'argent qu'on place sur la surface sensible du négatif, ensuite ou l'expose dans un cadre de copies à la lumière pendant quelques minutes. 11 est à recommander de placer entre la source de lumière et le cadre un verre dépoli. Après l'exposition, on traite la plaque comme nous l'avons décrit pour les négatifs. Le positif sur verre peut servir à la reproduction sur papier gélatino-bichromate, sur pierre ou sur cuivre. Il existe plusieurs méthodes appropriées à ces reproductions. La plus avantageuse est celle de Placet, qui expose l'image positive sur de la gélatine bichromatée. Il moule ensuite l'image gravée et dépose sur ce moulage une couche de cuivre par galvanoplastie.

Pour photographier les bactéries, Koch emploie un appareil de Fritsch qui diffère dos autres en ce que la chambre obscure, le microscope et l'appareil d'éclairage sont horizontaux et mobiles isolément. Gomme le tout doit être très exactement centré, on peut en mouvoir les différentes partics. Pour obtenir ce résultat, Koch a modifié l'appareil en faisant arriver la lumière du soleil par un héliostat qui fait pénétrer les rayons dans une chambre noire.

Les manipulatipns sont les mêmes que pour les autres photographies. Aussi l'opérateur doit-il bien connaître la photographie en général et tout particulièrement les procédés spéciaux de la photographie microscopique

qui sont exposés dans les publications de Gerlach*, de C^ookshank^ de Stengelein, de Jeserich ', etc.

1. Donné {Cours de microscopie, avec atlas dessine par Foucault, 1846, in-fo] a employé la photographie pour le dessin de ses figures. De très belles photographies "ont été obtenues par Woodwart aux États-Unis et reproduites dans V Histoire médicale de la guerre de sécession, Luys a employé la photographie pour son atlas du système nerveux. Gerlach (De la photographie comme auxiliaire des rechercha microscopiques, Leipzig, i863) a consacré un livre à son étude. Voir aussi Robin, Du microscope, 2« édition, 1877, p. 432 ; Reichardt et Sturbnberg, Traité de photographie microscopique, Leipzig, 1868, Beneke, Brunswig, 1868; et Yogel^ Manuel de photographie, Berlin, 1874.