COLORATION DES BACTÉRIES. MÉTHODES DE KLUNE

sortir de l'alcool» et, seulement après Faction du carmin, on commence la coloration par le yiolet.

Suivant Kûhne, pour colorer les bacilles de la fièvre typhoïde, les coupes de la rate sont d'abord soumises à l'action de Vadde oxalique conceniré : un beaucoup plus grand nombre de bactéries apparaissent alors, qui, autrement, échappent à l'action de la matière colorante. Voici le procédé qui nous a réussi :

i® Acide oxalique concentré, 5 à 10 minutes.

2<» Lavage à l'eau.

3^ Déshydratation et neutralisation de l'acide par l'alcool potassique (alcool, 500; potasse caustique, 0,05).

4® Coloration dans la solution a(iueuse concentrée de bleu de méthylène ajoutée à la liqueur ammoniacale, 10 minutes.

5« Lavage à l'eau.

6« Différenciation par la tropéoline (couleur d'aniline acide) acidulée par l'acide acétique à i p. 100.

On y dépose les coupes jusqu'à ce qu'elles deviennent bleu clair.

7« Lavage très soigneux à l'eau pour enlever l'acidité.

8* Déshydratation dans l'alcool absolu auquel on a ajouté quelques gouttes de bleu de méthylène pour éviter que l'alcool absolu n'extraie la couleur des bacilles.

9° Essence, térébène, xylol et baume.

La méthode de Weigert qui a perfectionné colh» de (îram, en tant que méthode générale, nous parait devoir être conseillée en première ligne : elle permet du reconnaître beaucoup de microbes en très peu de temps.

Les méthodes de Kûhxe ont aussi des avantages précieux; elles colorent notamment des organismes que celle de Weigert ne peut faire apparaître (typhus, choléra, etc.).

La méthode de Gram est moins fidèle, moins complète que les deux précédentes. Cependant, quand il s'agit de bactéries susceptibles de se colorer par cette méthode (charbon, etc.), il faut reconnaître qu'on obtient des préparations vraiment fort belles : les éléments parasitaires colorés se détachent admirablement sur Un fond absolument clair, mieux décoloré que dans les méthodes de Weigert et Kûhne. Mais, si c'est là un avantage précieux, par exemple, pour l'obtention de coupes destinées à des démonstrations, il l'est peut-être moins quand il s'agit de préparations d'études, où on préférera sacrifier un peu de la beauté d'une coupe colorée pour mieux distinguer certains éléments tels que les noyaux, qui apparaissent beaucoup mieux dans la méthode de Kûhne, ou la fibrine, que montre si nettement le procédé de Weigert, et dans les deux cas, par le fait même de la méthode, sans double coloration. Aussi, même pour les bactéries qui se colorent par la méthode de Gram, nous préférons encore l'un ou l'autre des deux procédés, soit de Weigort, soit de Kûhne.

La méthode de Lôfflkr permet de colorer les bacilles de la morve. On emploie k cet effet :

i^ Le bleu de méthylène ajouté à liqueur potassique (1 : 10000).

2« La différenciation par la tropéoline et Tacide acétique, à 10 p. 100, 3 à 4 secondes seulement, ou mieux par le liquide suivant :

Eau distillée 10 cm. c.

Acide sulfuriquc concentré 2 gouttes.

Acide oxalique, 5 p. 100 1 goutte.

On y laisse les coupes 4 à 5 secondes.

3<» Déshydratation dans l'alcool absolu. Essence et baume. Kûhne, suivant ponctuellement ces indications, n'obtint que dos bacilles faiblement colorés. Il pensa que Talcool absolu, employé pour la déshydratation, extrait lui-même un peu de la couleur aux bacilles ; de plus, l'acide encore adhérent aux coupes doit nuire également. C'est pour cela que Kûhne a proposé la modification suivante au procédé de Lôfflcr : addition à Talcool absolu de quelques gouttes de solution de bleu de méthylène pour diminuer son pouvoir exlractif en même temps que d'un peu d'alcali pour neutraliser l'acidité.

En agissant ainsi, Kûhne a obtenu une coloration beaucoup plus intense et un plus grand nombre de bacilles colorés. En faisant quelques préparations par dessiccation (v. plus haut), les bacilles de Lôffler apparaissent aussi nettement dans les coupes.

Violet de méthyl et de gentiane en solution aqueuse, — Nous avons vu que le moyen le plus simple d'étudier les bactéries consiste à mettre une goutte du liquide qui les contient sur une lamelle, à le laisser dessécher à moitié, puis à colorer la lamelle avec une goutte d'une solution faible de violet de méthyl (solution concentrée 1, eau distillée; voyez page 73). On lave un peu et on renverse ensuite la lamelle sur le porte-objet et on examine avec une lentille à immersion homogène. Un autre procédé consiste à placer pendant vingt-quatre heures les coupes dans une solution concentrée de violet ; on lave ensuite dans l'eau, dans l'alcool et l'essence de girofle. Si la coloration est très intense, on peut laisser les préparations pendant deux ou trois jours dans l'alcool et l'essence de girofle. Par ce procédé, les noyaux sont colorés en même temps que les bactéries, surtout ceux qui sont en voie de multiplication, aussi bien que les débris de noyaux, les boules hyalines, l'éléïdine, la flbrine, les granulations élémentaires du sang, les globules blancs et même certains globules rouges.

Le violet de méthyl en solution aqueuse réussit également bien dans la recherche des bacilles de la tuberculose et de la lèpre. On laisse alors les lamelles pendant plusieurs heures dans la solution concentrée de violet 6 B, on décolore ensuite rapidement par l'acide nitrique ou chlorhydrique au quart et on lave dans l'eau distillée. On laisse sécher les lamelles et on les monte dans le baume. Les coupes sont traitées successivement par l'alcool, l'essence de girofle et le baume.

On peut obtenir assez rapidement des préparations de bacilles colorés.

COLORATION DES BACTÉRIES. MÉTHODE d'eHRLICH. 85

Ainsi, une lamelle sur laquelle on a fait dessécher un liquide, mise pendant quelques minutes dans une solution concentrée de violet de méthyl à 60<^, puis lavée rapidement dans Teau distiJlée, est placée pendant une minute dans la solution iodée. On la lave, puis on déshydrate à Talcool, à l'essence et on monte dans le baume. En sortant la lamelle de la solution d'iode, on peut la colorer par le séjour dans Téosine pendant une minute et on obtient ainsi une double coloration. Les coupes doivent rester au moins une demi-heure dans la solution concentrée et chaude du môme violet de méthyl.

Méthode d'Ehrlich. — Cette méthode consiste à mettre les coupes ou lamelles dans une solution d'huile d'aniline et de violet de méûiyl ou de fuchsine, puis à décolorer rapidement dans de Tacide nitrique au tiers.

Pour préparer la solution d'huile d'aniline, on fait chauffer de l'eau distillée, dans laquelle on a ajouté 1 pour 10 d'huile d'aniline ou de toluidine, paratoluidine, ou ortholuidine*. On filtre, on ajoute 10 p. 100 d'alcool absolu et il p. 100 d'une solution très concentrée de méthyl violet B ou de fuchsine (chlorhydrate de rosaniline de Poirier).

On laisse les lamelles pendant une heure et les coupes pendant vingtquatre heures dans ce bain colorant. Après quoi on lave rapidement dans l'acide azotique dilué par l'eau dans la proportion de i à 3 ou 4, ou dans une solution d'alcool au dixième. On emploie dans le même but l'acide acétique cristallisable ou l'acide chlorhydrique (i partie d'acide chlorhydrique pour 10 d'alcool). Avant d'immerger la coupe dans un acide, on peut la colorer par le picrocarmin, lasafranine, réosine,la coccinine, etc., qui colorent en rouge les tissus, les bactéries étant colorées en violet.

On décolore ensuite avec les acides, on traite par l'alcool absolu, l'essence de bergamote ou l'huile de cèdre, et on monte dans le baume. On peut aussi colorer les coupes par les couleurs rouges indiquées, lorsqu'elles ont été décolorées par l'acide. En les sortant du bain d'acide nitrique, on les lave à l'eau distillée, puis on les met pendant une ou deux minutes dans une solution aqueuse d'une de ces couleurs, et on les monte comme précédemment.

Si les coupes ont été d'abord teintées en rouge par la fuchsine d'Ehrlich, on les décolore à l'acide, puis on les passe h l'eau, et on leur donne une seconde coloration par le bleu de méthylène, le bleu de quinoléine, ou Thématoxyline. Les bacilles restent alors colorés en rouge et les cellules en bleu ou en violet. Les bacilles de la lèpre se colorent encore mieux par cette méthode que les bacilles de la tuberculose.

Certaines spores de bacilles se colorent ainsi d'une façon très intense, par exemple ceux qu'on observe dans les selles.

On colore de môme la chitine, l'épiderme corné, les poils, certains tissus mortifiés, et les coccidies (Babes, L c).

1. Babes, Étude sur les bactéries de la lèpre et de la tuberculose ^ a conseillé le premier Tusage de l'ortholuidlne, de la toluidine et de la paratoluidine comme pouvant remplacer laniline. (Comptes rendus de TAcad. des se, avril 1883).

Ehrlich a donné en dernier lieu la méthode suivante qui permet de conserver sans qu'ils se décolorent les bacilles de la tuberculose. On place la gouttelette de crachats à analyser entre deux lamelles minces qu'on applique Tune sur l'autre. On les chauffe légèrement jusqu'à ce que le liquide devienne un peu opaque. On les sépare ensuite et la substance se trouve bien étalée. On les colore pendant deux h quatre heures dans le bain de fuchsine anilinisé. On décolore dans un mélange d'une partie d'acide nitrique pur et 2 parties d'acide sulfanilique; on trempe les lamelles quelques secondes dans ce bain acide puis on lave à l'eau distillée. On répète plusieurs fois cette opération. On dessèche la lamelle et on monte enfin daus du baume très épais qu'on a ramolli par la chaleur.

Pour constater la présence des bacilles dans les tissus, Ehrlich prend des particules de ces tissus qu'il étale sur une lamelle comme il le fait poulies crachats. Il les colore; P pendant vingt-quatre heures dans la fuchsine simple, aqueuse; 2^^ pendant vingt-quatre heures dans la fuchsine additionnée d'aniline ; 3® il les traite par l'acide nitrique mêlé dans la proportion de 1 à 2 avec de l'acide sulfanilique ou bien par Talcool; il lave ensuite longtemps à l'eau ; 4^ il traite pendant vingt-quatre à trente-six heures dans une solution très concentrée de bisulfite de soude ; 5° il lave à l'eau bouillie puis refroidie. Enfin on dessèche la préparation et on la place dans du baume épais.

Méthodes de ZiekL — A. — Pour colorer les bacilles de la tuberculose, on met les coupes pendant une demi-heure dans la solution suivante :

Fuchsine \ gramme.

Acide phénique 5 —

Alcool absolu 10 cent. cub.

Eau 100 grammes.

Après quoi on les lave dans une solution d'acide acétique à 1 pour cent. On décolore par l'alcool, l'essence de girofle et on monte dans le baume.

B. — Ziehl emploie aussi pour la coloration des bacilles de la tuborculose un liquide composé de la façon suivante :

Eau 100

Acide phénique 3

Alcool n

auquel on ajoute une solution alcoolique de rubine.

On laisse pendant une heure les lamelles dans le bain colorant et les coupes pendant 12 heures.

Après la coloration on emploie, pour décolorer, l'acide chlorydrique à 1 pour 20 ; on laisse à peine les lamelles quelques secondes dans cette solution, on lave à l'eau, puis on achève la décoloration par l'alcool absolu.

On peut, si l'on veut, faire comme précédemment une double coloration avec le bleu de méthylène et monter dans le baume.

Le liquide de Ziehl a sur celui d'Erhlich un avantage considérable, c'est de ne pas s'altérer en vieillissant : les solutions à l'acide phénique peuvent être employées quatre à cinq mois après qu'elles ont été faites; celles à

Taniline demandent à ôtre renouvelées presque chaque semaine, ce qui entraîne une perte de temps considérable.

Procédé rapide de coloration des bacilles de la tuberculose (Fr&nkel). — Il consiste à chaufTcr la liqueur colorante rouge d'Ehrlich, dans laquelle on a placé les lamelles ou les coupes, et à décolorer ensuite dans un liquide contenant à la fois de Facide nitrique et du bleu de méthylène. Ou fait d'abord bouillir, dans un tube de verre, 2 à 3 centimètres cubes de la solution suivante :

Eau distillée 100 grammes.

Huile d'aniline 3 —

Alcool pur 5 —

On verse dans une petite capsule, en ajoutant 4 ou 5 gouttes d'une solution très foncée de fuchsine. On laisse la lamelle cinq ou six minutes; on la retire et on la plonge pendant une minute dans le liquide suivant, qui est préparé d'avance et filtré :

Eau d*aniline 30 grammes.

Acide nitrique 20 —

Alcool pur 50 —

Bleu de méthylène à saturation.

La lamelle est lavée à Teau distillée, puis déshydratée à Talcool absolur ou mieux, desséchée par un courant d'air et montée dans le baume.

Coloration des spores. — Si Ton suppose que certaines bactéries contiennent des spores, on emploie la solution d'Ehrlich à la fuchsine, en y laissant les pièces pendant plusieurs jours, ou en échauffant le bain. On peut porter la solution jusqu'à l'ébullition pour colorer les lamelles, mais les coupes ne pourraient supporter cette température. On décolore ensuite par l'acide nitrique au quart, puis on colore le fond et les bâtonnets en les laissant quelques minutes dans le bleu de méthylène.

Certaines spores se colorent très facilement par ce procédé, tandis que d'autres, comme celles de la fièvre typhoïde, de la morve, de la tuberculose, se colorent difficilement. Pour avoir de belles préparations de ces dernières, il faut tâtonner et sacrifier plusieurs lamelles pour arriver au degré voulu de coloration et de décoloration.

Si les spores ne supportent pas la décoloration par les acides, on lave à Talcool les lamelles colorées, on les passe pendant une seconde dans le bleu de méthylène et on les examine.

Procédé rapide de double coloration de certaines bactéries (Berlioz). — On prépare deux solutions :

1° Une solution de 6 centimètres cubes d'huile d'aniline dans 84 cent, cub. d'eau distillée. On fait dissoudre à chaud et on filtre après refroidissement; on ajoute 2 gr. 50 de violet 6 B en solution dans 10 cent, cubes d'alcool à 90« et on filtre ;

2<» Une solution composée de coccinine 2 gr. 50, eau distillée 95 cent, cub., alcool à 90", 5 cent. cub. On fait dissoudre et on filtre.

On fait un mélange h parties égales de ces deux solutions et on a ainsi une liqueur qui permet d'obtenir rapidement une double coloration. A cet efTet, on met les coupes pendant un quart d'heure au plus dans ce liquide; on les traite ensuite par une solution, soit de carbonate de soude à a p. iOO, soit d'iodure de potassium iodé à 5 p. 100; on lave à Teau et à Talcool et on les monte dans le baume après avoir déshydraté par Talcool absolu et éclairci avec l'essence de girofle. Ce procédé réussit très bien pour les bacilles du charbon et pour certains microcoques.

Fuchsine, — La fuchsine, et surtout le chlorhydrate de rosaniline, employés en solution alcoolique concentrée, colorent en une demi-heure la plupart des bactéries, surtout lorsqu'on a fait sécher le liquide qui les contient sur des lamelles. Nous recommandons pour la coloration des liquides desséchés contenant des bactéries de la gonorrhée, de la pneumonie, etc., le procédé suivant: séjour des lamelles pendant cinq minutes dans une solution alcoolique concentrée de fuchsine mêlée avec trois parties d'eau. On lave ensuite dans l'alcool faible; on dessèche et on monte dans l'huile de cèdre ou dans le baume liquéfié par le xylol. On peut, par ce procédé, distinguer les capsules incolores de certaines bactéries. Pour colorer les bacilles en virgule, nous recommandons l'emploi pendant plusieurs heures d'une solution aqueuse concentrée de fuchsine. Avec une solution aqueuse faible de fuchsine et le traitement par l'acide acétique ou nitrique à 1 pour 3, on arrive à colorer rapidement les bacilles de la tuberculose et do la lèpre *. Après la coloration, on peut colorer le fond de la préparation en vert (vert de malachite), ou en bleu.

Coloration des microcoques de la pneumonie. — S'il est facile de voir ces bactéries par le violet B et la solution iodée sur les lamelles où l'on a desséché une mince couche de l'exsudat pulmonaire ou des crachats, il n'en est plus de même sur les coupes du poumon hépatisé. Il est très difficile en elTet de constater les microcoques avec des capsules sur les coupes.

D'après Friedlander, on y arrive en mettant les coupes pendant vingtquatre heures dans le mélange qui suit :

Fuchsine 1 gramme.

Eau distillée 100 —

Alcool 5 —

Acide acétique glacial 2 —

Les préparations sont placées dans l'alcool, puis, pendant deux minutes, dans une solution d'acide acétique à 2 p. 100 et ensuite dans l'eau, déshydratées enfin par l'alcool et l'essence de girofle, et montées dans le baume.

On arrive au même résultat en mettant les coupes pendant vingt-quatre heures dans un composé d'eau distillée 100 grammes, de solution alcoolique

1. Il faut bien remarquer que les propriétés colorantes des divers échantillons de fuchsine fournis par une même fabrique sont très différentes. Il en est qui ne colorent pas les bacilles de la tuberculose, même dans une solution d'Ëhrlich. Nous recommandons la fuchsine rubine de la fabrique de BerUn.

deriolet de gentiane 50 grammes, et d'acide acétique 10 grammes. On les décolore ensuite par un séjour de quelques minutes dans une solution d'acide acétique à 1 p. 100, on les déshydrate par Talcool et l'essence de girofle et on monte dans le baume.

Un autre excellent moyen est celui \de Weigert qui est exposé précédemment.

Bleu de méthylène. — Le bleu de méthylène a été recommandé par Weigert, Ebrlich et par Koch pour la coloration des bactéries. 11 faut employer le bleu de méthylène qui reste bleu après l'action de la potasse. Cette couleur ne donne pas des préparations durables. Il est vrai que les bactéries traitées par une solution aqueuse ou alcoolique concentrée de cette substance se colorent vite et que la couleur résiste bien à l'alcool et l'essence de girofle, mais elle est pâle et s'efface bientôt. Koch a employé cette couleur quand il a découvert les bacilles de la tuberculose. Il a placé les lamelles pendant plusieurs heures dans une solution faible de ce bleu, dans de la potasse à 1 pour i 0,000. Les lamelles ont été portées ensuite dans une solution aqueuse concentrée de vésuvine pendant quelques secondes, puis lavées, desséchées et montées dans le baume.

Pour colorer les bacilles de la fièvre typhoïde, de la morve et de la diphtérie, on a recours avec avantage au procédé suivant : on mélange 30 centimètres cubes d'une solution alcoolique saturée de bleu de méthylène avec 100 grammes d'eau additionnés d'un centigramme de potasse. Les coupes se colorent vite dans cette solution. On lave ensuite rapidement dans une soucoupe remplie d'eau additionnée d'une goutte d*acide acétique, puis on passe à Falcool, à l'huile de cèdre et au baume. Cette méthode donne des préparations qui sont bonnes, mais peu persistantes. Les microbes apparaissent nettement quand on les regarde dans Tcau ou dans une solution aqueuse d'acétate de potasse à 2 pour 100 (I^ffler).

Dans les préparations obtenues ainsi par la coloration avec le bleu de méthylène alcalin employé seul et examinées dans l'eau, on voit souvent des points arrondis, situés dans les bactéries et qui prennent une coloration tirant sur le rouge, ou sur le rouge violacé (Babes).

La coloration devient encore plus prononcée si l'on chauffe la préparation dans le liquide colorant, ou bien si on colore les autres microbes avec une couleur différente, par exemple le brun de Bismarck (Ernst).

D'après Ernst et Neisser ces points colorés seraient des spores, ce qui ne nous semble pas encore prouvé.

Coloration des zooglœes de la tuberculose de Malassez et Vignal. — C'est aussi par le bleu de méthylène que Malassez et Vignal ont réussi à colorer leurs zooglœes. Ils y arrivent par l'un des deux procédés suivants:

A. On laisse pendant un jour les coupes dans un bains ainsi prépare :

Eau distillée saturée d'huile d'aniline et filtrée. . 9 cent. cub. Solution concentrée de bleu de méthylène dans l'alcool à 90« 1 —

On colore ensuite dans le mélange suivant :

Solution aqueuse de carbonate de soude à 2 pour 100 . 2 volumes^ Alcool absolu 1 —

Cette opération délicate doit être sun-eillée en portant les préparations sous le microscope afin de Tarrèter à propos. On laisse ensuite les pièces un certain temps dans Teau distillée, après quoi on les déshydrate rapidement par l'alcool absolu et Tessence de girofle et on les monte dans le baume.

B. On place les coupes dans le bain suivaut :

Solution de carbonate de soude à 2 pour 100. . . 10 volumes.

Eau distillée saturée d'huile d*aniline 5 —

Alcool absolu 3 —

Solution de bleu de méthylène faite avec 9 volumes d'eau distillée et 1 volume de solution concentrée de bleu de méthylène dans Talcool à 90° 3 —

Ce mélange bleu clair devient verdâtre et donne un précipité au bout de quelque temps ; mais il n'en est par moins bon, il suffit de le filtrer. Les coupes restent dans ce bain deux ou trois jours. Elles sont ensuite mises dans Tcau distillée, puis dans l'alcool absolu légèrement teinté avec du bleu de méthylène; on les éclaircit avec de Tessence de bergamote ou de térébenthine, et on monte dans le baume ou dans la résine Dammar dissoute dans le chloroforme.

Chantemesse a très bien coloré ces zooglœes par la méthode de Lôffler.

Brun de Bismarck et vésuvine. — Ces couleurs sont bonnes pour teindre le fond de certaines préparations dont les bacilles sont colorées en rouge ou eu violet. On arrive facilement aussi à colorer les bacilles du charbon par une solution de brun de Bismarck dans la glycérine. On met dans ce but une goutte de la solution glycérinée sur une lamelle où l'on a fait dessécher du sang charbonneux et on examine immédiatement. Le môme procédé suffit pour colorer les bactéries de la fièvre récurrente, quil s'agisse de lamelles ou de coupes. Ces préparations peuvent ôtre conservées en remplaçant la glycérine colorée par de la glycérine pure. Elles donnent de moins bons résultats lorsqu'elle sont déshydratées après avoir été colorées.

La vésuvine possède la propriété de détruire certaines couleurs d'aniline, le bleu de méthylène par exemple, dans les points où elles ne sont pas très bien fixées.

La purpurine, le magdala, le t^er^ d'aniline ou de malachite sont peu employés dans la recherche des bactéries, parce qu'ils donnent une coloration peu intense et peu résistante.

Safranine (Babes, Arch, f, micr. Anat, 1883, 1). — La safranine se range entre les couleurs d'aniline et l'amidoazobenzol. Pour la recherche des bactéries, la meilleure substance est celle de la fabrique de Bâle.

Pour colorer les coupes, on emploie une solution aqueuse sursaturée de safranine, préparée à chaud, mêlée à 5 p. 400 d'huile d'aniline, agitée puis filtrée sur un filtre humide. L'huile d'aniline dissout le surplus de la matière colorante.

On laisse pendant une ou plusieurs minutes les coupes dans cette solution à froid. Après quoi on traite par Talcool ou par la solution d'iodure de potassium iodé. On lave aloi*s à l'eau distillée, ou passe rapidement les coupes dans l'alcool pur et l'essence de girofle et on monte dans le baume. On décolore ainsi tout le tissu à l'exception des bactéries, des figures de multiplication indirecte, de la substance hyaline ou calcaire et de certaines parties des nerfs. Si on laisse le tissu coloré, les bactéries ne s'en distinguent pas moins à une couleur plus brunâtre, tandis que les noyaux sont d'un rouge clair. La safranine permet surtout d'étudier les bactéries rondes, les zooglœes et certains bacilles. Elle est aussi très avantageuse pour la coloration du fond des préparations. Ce procédé penne t d'étudier les inflammations et dégénérescences produites par les bactéries. Les parties en dégénérescence hyaline sont en effet de couleur rouge jaunâtre, celles en dégénérescence calcaire de couleur rouge foncé ; les figures de multiplication indirecte des noyaux que nous avons décrits les premiers dans les inflammations bactériennes (tuberculose, lèpre, variole) sont aussi très manifestes.

Dahlia. — Cette matière colorante, recommandée par Ehrlich, a été employée surtout par Ribberl pour colorer les micrococci de la pneumonie et leurs capsules. Elle réussit à montrer des bacilles là où avec d'autres couleurs on ne voyait que des microcoques. On emploie une partie de dahlia pour 100 d'eau dislinée,50 parties d'alcool et 12 1/2 d'acide acétique glacial.

Éosine. — L'éosine, couleur acide d'un beau rouge, employée en solution aqueuse ou alcoolique, colore tous les tissus, mais n'a pas d'élection sur les micro-organismes. Ou l'emploie pour colorer le fond des préparations dont les bactéries sont teintées en bleu ou en violet.

Elle colore bien les masses granuleuses qu'on trouve au milieu des cellules géantes de la tuberculose. Les capsules des bactéries de la pneumonie sont aussi mises en évidence par elle. Mais ce sont surtout les champignons parasitaires de la peau (achorion, favus, microsporon, etc.) qu'on colore bien avec la solution alcoolique d'éosine. La solution alcoolique possède aussi une élection sur les fibres élastiques (Baizer). Suivant la méthode de Baizer, les coupes colorées en vue d'étudier les champignons sont examinées dans la potasse à 40 p. 100.

Coccinine, — Cette substance, d'un très beau rouge, a tous les avantages de l'éosine pour teindre le fond des préparations daus lesquelles les bacilles ou microcoques sont colorés en bleu ou en violet. Elle montre mieux les noyaux.

Résumé. — Si nous résumons maintenant les procédés à suivre pour

l'examen des bactéries au microscope, nous voyons qu'il faut d'abord les examiner dans l'eau et dans la chambre humide. On colore ensuite, après demi-dessiccation, par une solution aqueuse faible de violet de méthyle B pendant quelques minutes. Les bactéries ainsi colorées sont examinées immédiatement dans l'eau. Presque toutes se colorent bien par ce procédé.

En même temps que ces examens à l'état frais, on étale une couche très mince du liquide sur des lamelles et on fait sécher à l'air libre ou à la lampe des parcelles de la substance à examiner; on les colore ensuite. Pour être sûr de colorer toutes les bactéries, on emploie plusieurs méthodes : i^ la coloration dans une solution de fuchsine simple ou additionnée d'eau d'aniline; 2<* les procédés de Gram (page 78) avec la solution iodée ou le bichlorure de mercure; 3<» le procédé de Lôffler (page 84) à l'aide du bleu de méthylène; 4* les méthodes d'Ehrlich (page 85) ; 5® le procédé de Weigert (voyez page 79) ; 6° les méthodes de Kûhne (page 80) ; 7« le procédé de Ziehl (page 86).

Les mêmes solutions servent pour la coloration des coupes. Nous recommandons aussi pour les coupes le procédé suivant, qui donne d'excellents résultats pour la plupart des bactéries et en particulier celles de la morve, de la fièvre typhoïde, du choléra, etc. On laisse séjourner les coupes pendant 24 heures dans une solution aqueuse faible de fuchsine; on lave rapidement à l'eau très légèrement acidulée par l'acide acétique; on les passe dans l'alcool et l'essence de girofle, on les étale sur la lame porte-objet et on les dessèche en les recouvrant de plusieurs couches de papier à filtrer; enfin on les monte dans le baume (Babes).

La méthode de Gram (voyez page 78) et surtout celle de Weigert, est celle qui convient le mieux pour colorer les bactéries de la septicémie des souris, les bacilles de Vœdème malin et du charbon, les bacilles du rhinosclérome, les micro-organismes de la diphthérie, les streptococci du phlegmon et de Vérysipèle, les staphylococci de la suppuration. Pour certains microbes comme ceux du charbon, de l'érysipèle, du phlegmon, etc., il suflit de laisser les coupes pendant dix minutes dans le bain colorant, puis de les passer dans la solution iodée. Pour d'autres, comme le rhinosciérome, il faut au contraire les y placer pendant 24 ou 48 heures. Il est bon de colorer en premier lieu le fond des lamelles et des coupes avec le picrocarmin.

Le micrococcus tetragenus et les diplocoques de la pneumonie seront préparés suivant la méthode de Friedlândcr pour voir les capsules. Pour la plupart des microbes ronds, on se sert avantageusement de la safranine de Bàle additionnée d'huile d'aniline ou d'une solution aqueuse concentrée de violet de méthyle 6 B dans laquelle les coupes séjournent pendant une heure.

Les bacilles de la tuberculose et de la lèpre seront colorés par la méthode d'Ehrlich ou de Ziehl, par les procédés de Weigert et de Kûhne (voir pages 79 et 80) et le fond teinté d'une couleur différente de celle qu'on aura fixée sur les bactéries.

Le bleu de méthylène en solution alcaline d'après le procédé de LœfÛer s'applique aux préparations de la septicémie des lapins, du choléra des pou-