Archives de physiologie,^^ série, t. VI, p

fondement excavée et dont l'excavation est entourée d'avance d'une couche épaisse de vaseline. La chambre humide ainsi constituée est la plus simple et la meilleure. On examine au microscope avec un objectif 4/12 de Zeissà immersion dans l'huile et avec le condensateur Abbé muni d'un diaphragme à petite ouverture.

On peut employer aussi la chambre humide de Ranvier, dans laquelle le verre porte-objet offre à son centre un plateau circulaire entouré d'une rainure profonde. La gouttelette à examiner étant placée au milieu et recouverte de la lamelle, on borde le pourtour de la lamelle avec de la paraffine ou de la vaseline. La rainure renferme de l'air et un peu de liquide.

Ces chambres humides simples sont portées sur la platine du microscope ou sur une platine chauffante. Nous avons construit une chambre humide analogue qu'on peut stériliser, qui communique à la fois avec l'air ambiant par un conduit et avec un réservoir d'eau distillée pour empêcher l'évaporation du liquide. Avec cette chambre humide, on peut suivre pendant plusieurs jours le développement dos microbes, ou la placer dans une étuve pendant plus longtemps.

On peut aussi employer la chambre claire de Kdhne, qui consiste en un tube de verre dilaté en ballon à paroi très mince à son milieu. Ce ballon est lui-même aplati de telle sorte que les parois opposées arrivent presque à se toucher et qu'on peut le placer sur la platine du microscope, sous la lentille objective. La paroi aplatie du ballon n'est pas plus épaisse qu.'une lamelle de verre mince à recouvrir. L'appareil étant stérilisé, on aspire le liquide à examiner par une des extrémités du tube. Ce petit ballon aplati pourra être placé sur un porte-objet chauffé.

L'examen microscopique direct des microbes en voie de développement se fait aussi très facilement sur des lames de verre ou sur des cristallisoirs couverts d'une substance nutritive gélatinisée telle que le sérum gélatinisé, la gélatine peptone, l'agar-agar, qu'on inocule avec les substances contenant des bactérie^. L'examen au microscope est utile pour étudier avec de faibles grossissements la forme et l'apparence que présentent les colonies de microbes dans leur groupement et dans leur accroissement.

Les procédés qui précèdent s'appliquent surtout à l'étude de très petites parcelles de liquides contenant des micro-organismes dont on veut étudier le développement. Mais pour faire des cultures de ces microbes en plus grandes masses, on doit employer d'autres appareils.

La façon la plus simple de faire ces cultures consiste à mettre un peu de la substance à examiner dans des vases stérilisés contenant des milieux nutritifs stériles.

Pour introduire le liquide qu'on suppose renfermer des microbes, on se sert d'un fil de platine muni d'une manche de verre, chauffé au rouge, puis refroidi; on y trempe son extrémité et on l'introduit dans le bouillon liquide ou la substance gélatinisée appropriés à la culture. Puis on ferme le vase contenant la substance nutritive avec un tampon de ouate.

Méthodes de culture de Pasteur '. — Pasteur a fait le premier des cultures en employant des procédés à Tabri de toute cause d'erreur. Nous donnons d'abord ses procédés qu'on peut trouver dans ses diverses publications et dans celles de Duciaux, où nous avons emprunté la plupart de ces renseignements. Pasteur employa d'abord comme bouillons de culture des liquides variés, soit des liquides nutritifs artificiels, soit des infusions de viandes. En voici quelques exemples.

L'eau de levure est préparée avec de la levure fraîche de brasserie qu'on laisi^e en suspension dans l'eau, puis qu'on passe à travers un tamis de soie. On décante ensuite, on abandonne le liquide à lui-même pendant 24 heures, pendant lesquelles la levure se dépose. On décante le liquide trouble qui surnage. On délaye le reste dans un volume d'eau suffisant pour qu'il y ait 50 à 100 grammes de levure par litre. Le liquide ainsi obtenu est filtré, il sort limpide du filtre, et, s'il est louche, on ajoute un peu d'acide phosphorique cju'on sature ensuite avec de l'eau de chaux.

L'infusion de foin se fait en coupant du foin qu'on met dans l'eau bouillante pendant quelques minutes.

On filtre ensuite. La liqueur est limpide et acide.

L'urine employée pour les cultures sera bouillie, puis neutralisée si elle est devenue alcaline, puis filtrée et stérilisée dans l'autoclave.

Les bouillons de viande se préparent avec de la viande de bœuf, de veau, de poule, etc., hachée, mise

dans l'eau et portée lentement à Tébullition. On verso sur un filtre mouillé. Si la matière grasse passe dans le filtre, on siphonne le bouillon après l'avoir laissé se refroidir. Le bouillon est un peu acide et doit être très limpide. Il doit être neutralisé.

Les vases dans lesquels on recueille ces divers liquides sont tous flambés dans un fourneau à gaz en tôle du modèle ci-contre (fig. 7), dont la double boîte est chauffée directement par la flamme du gaz et qui contient un panier en fil de fer où l'on met les tubes, les flacons, ballons, matras et d'une façon générale tous les instruments à stériliser. La température de la caisse sera élevée à 130° ou 250°, ce qu'un thermomètre permettra d'apprécier, et tous les germes provenant de l'air seront certainement détruits dans les vases et sur les instruments placés dans l'appareil.

l. Les méthodes de culture de Pasteur sont exposées dans les livres que nous avons déjà cités sur le vin, la bière, etc. — Voyez encore Duclaux, Ferments et maladies, Paris, 1882, et Encyclopédie chimique de Frémv, t. IX, 1883.

Fio. 7. — Coup« du chautfoir employé pour flamber et stériliaer les instruments et la verrerie.

Pour enfermer les bouillons dans des vases stérilisés, on aura d'abord flambé dans le fourneau à gaz les tubes et les ballons.

Les tubes présentent sur un de leurs côtés une effilure horizontale ou

FiG. 8.

A, tube. à effilure horizontale. B. tube à effflure recourbée, a, h, col; r, efISIurc (flgure empruntée à Duclaux).

FiG. 9. - Ballon à elfilure supérieure

courbée en bas (B, a, fig. 8) dont l'extrémité est terminée en pointe et fermée à la lampe. Leur col ouvert est bouché par de la ouate.

Les ballons présentent tantôt un col allongé et un corps sphérique ou

Fig. 10. — Ballon à effilure latérale et k col bouché à la ouate. (7, col du ballon bouché par de la ouate ; 6, effilure latérale.

à base un peu aplatie ; tantôt ils portent à la partie supérieure une eflilure plus ou moins longue (fig. 9), ou une effilure latérale, sinueuse à concavité inférieure (fig. 10). Le col des ballons est dans ce dernier cas bouché à la ouate (a, flg. 10). Pendant le flambage, les micro-organismes qui peuvent