TECHNIQUES DE RECHERCHE

Un diagnostic bactériologique n'a de valeur scientifique que s'il est complet : trop souvent la recherche médicale Manque de la rigueur nécessaire, que l'observation clinique humaine, il est vrai, ne. rend pas toujours possible, Un simple examen du pus par exemple permettra en général un diagnostic suffisant au point de vue médical pour insti- ‘tuer le trailement iodé nécessaire. Mais du point &e vue bactériologique le diagnostic complet doit comporter la détermination exacte de l'espèce pathogène.

Une telle identification est difficile et appartient au spécialiste, : aussi-rappellerons-nous simplement les techniques qui permettront de lui fournir les éléments indispensables de ce diagnostic ; la culture et les coupes de grains parasitaires.

Examen direct. — La recherche des grains dans le pus, lorsqu'ils sont abondants, ne présente. en général aucune difficulté. On les isolera facilement en étalant le pus sur une lame de verre el en dissociant les grümeaux avec des aiguilles ou le fil de platine. Une fois le grain isolé on l'écrasera entre lame et lamelle et on l'examinera à l’état frais d’abord, puis avec une coloration au Gram, où mème après double coloration de Ziehl et de Gram.

Dans quelques cas les grains sont très rares où même absents. I faudra alors multiplier des étalements et, si au-

cun grain ma pu être décelé, colorer plusieurs lames afin

d'y rechercher des touffes de fins filaments ramifiés. Il est capilal de poursuivre la recherche de ces éléments avec persévérance, car ils peuvent être très rares où masqués par la pullulation de germes d'infection secondaire dans le cas de lésions ouvertes. Il arrivera de ne mettre en évidence que des formes fraginentées, parfois en macrophagie et dont le diagnostic est fort délicat. | Les grains les plus volumineux seront fixés dans le liquide de Bouin ; on en fera des coupes qui seront très utiles pour l'identification, au même titre d’ailleurs .que les coupes de tissu pathologique contenant de semblables grains parasitaires.

Coupes de tissus. — Le prélèvement des fragments de tissus sera fait avec soin et devra porter sur les régions manifestement enflanimées, ainsi que sur les fongosités. Une série de fragments sera mise en réserve au cas où la recherche sur les premiers blocs serait restée négative.

La fixation se fera simplement dans le liquide de Bouin |

ou dans le formol à ro %: Le matériel sera manipulé avec précaution lors des changements de liquide et des coupes au microtome afin d'éviter de détacher les éléments parasitaires. |

Les coupes seront colorées par l’hématine-éosine au point de vue, histologique. Cette coloration qui ne mel pas en évidence les filaments de toutes les espèces sera complétée par un Gram, safranine ou éosine, qui précise parfaitement la nature des grains. Enfin la colôration de Mann recommandée par M. Langeron est particulièrement belle et le parasite s'y détache parfaitement (bleu de méthyle-é0sine). |

Culture. — L'ensemencement ne devra pas être pratiqué sur des fragments pris au hasard : les filaments morcelés,

dégénérés, sont en effet presque toujours incapables de se développer. Pour se rendre compte du bon étät des filaments On appliquera le procédé de J. H. Wright : il consiste à écraser le grain entre deux James stérilisées par flambage. L'une des lames permet de vérifier l’état des filaments après coloration au Gram ; l'autre, mise à l'abri de l'air dans une boîte de Petri siérile, servira à l’ensemencement. Le fragment de grain dont la vitalité a ainsi été vérifiée est dilué dans une goutte de bouillon : une trace de ce liquide servira aux semis.

Les ensemencements se feront toujours à la fois en milieu aéré et privé d’air. Jamais il ne faudra négliger de pratiquer de cultures en anaérobiose, du fait de la fréquence dans l'actinomycose humaine des germes anaéorobies (Cohni Streptotrix Israeli).

Les milieux à conseiller sont la carotle, la pomme de térre glycérinée, les milieux de Sabouraud, le sérum coagulé eñ aérobie, En anaérobie, la gélose glucosée de Veillon est excellente. L’addition dans ce dernier milieu de sérum et de quelques gouttes « d'extrait globulaire » préparé selon la technique de Legroux facilitent souvent la culture.

Les tubes seront mis à l'étuve à 37°. Quand on dispose d'une quantité suffisante de culture il sera alors prudent de garder un ensemencement en aérobie et un en anaérobie à la température du laboratoire,

Le développement des germes n'est jamais bien rapide. 1 faut compter au minimum 6 à 19 jours d’étuve avant que la culture n'apparaisse : de même le développement de lac. linomyces. bovis est très lent et demande souvent près de trois semaines.

Muni de ces divers éléments de diagnostic le mycologiste aura [a possibilité de déterminer l'espèce pathologique en cause, de pratiquer, s'il y a lieu, des inoculations et des rétrocultures et la nature de Ja lésion sera ainsi précisée avec toute la rigueur qu'on est en droit d'exiger actuellement.

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