I. Premier procédé : Préparation directe
1° Technique. — Nous citerons en premier lieu celle qui fut indiquée par Balthazard et Lebrun en 1911. (3)
« Une coupe transversale est tout d’abord faite dans l’os à l’aide d’une scie fine, aussi mince que possible ; puis cette coupe qui a environ un millimètre d'épaisseur, est usée entre les deux faces plates de deux pierres à émeri.
» On colore ensuite les canaux de Havers par une immersion dans une solution aqueuse saturée de bleu de méthylène, pendant trois heures environ. |
» Les coupes sont lavées à l’eau, brossées pour enlever les particules de grés incluses dans les canaux puis deshydratées par l’alcool absolu, éclaircies par le xylol et montées au baume du Canada entre lame et lamelle. »
Beylot et Baudrimont (8) préconisent comme colorant une solution alcoolique de bleu d’aniline à 1%. La pièce, obtenue de façon analogue y est immergée pendant quatre heures.
Enfin Muller (79) préfère à toute autre la coloration donnée par le sesquioxyde de fer ou rouge de Paris, qui présente l’avantage de polir la coupe.
C'est aussi à ce produit qu’à recours Profichet (90) qui indique dans son travail sur « l'identification des os en médecine légale » la façon de l’employer.
«On use la coupe sur une pierre à affûter (pierre à eau) Jusqu’à ce que la surface soit bien lisse. Ensuite on saupoudre la pierre d’une petite quantité de sesquioxyde de fer en ayant soin de maintenir l’humidité de la pâte ainsi obtenue. On continuera de polir la coupe sur cette pierre ainsi recouverte. Le rouge de Paris termine le polissage d’une manière plus fine et colore la coupe. Enfin, on nettoiera la pierre à l’eau courante et on polira encore la coupe en la lavant de temps à autre jusqu’à ce que sa couleur soit passée du rouge sombre au rose pâle. Laisser sêcher. Fixer la coupe sur une lame avec du baume du Canada. On l’examinera ensuite au microscope (muni d’un oculaire micrométrique) en l’éclairant obliquement avec une forte source lumineuse à rayons parallèles ou convergents.
» À l’examen, la surface de la coupe apparaît en rose pâle; les canaux de Havers remplis par le sesquioxyde se détachent nettement en rouge sombre et sont faciles à mesurer. »
Ces derniers mots nous indiquent le principal emploi de cette méthode : le diagnostic entre les os humains et animaux par la mensuration des canaux de Havers.
On admet aujourd’hui que si le diamètre moyen de ceux-ci est supérieur à 25 y, il s’agit à peu près sûrement d’un os humain.
29 Avantages et inconvénient du procédé par préparation directe. — Ce procédé présente l'intérêt de ne pas faire subir aux pièces l'influence de la chaleur.
Dans ie procédé par décalcification au contraire, non seulement les fragments osseux séjournent dans la paraffine à 550, mais encore les coupes, lors de leur collage sur la lame, doivent être exposées à la chaleur qui les fait déplisser. La dilatation
pouvant résulter de ces manœuvres risque de fausser considérablement les résultats d’une mensuration ultérieure.
Mais lorsqu'on n’a pas à envisager ce point de vue, la décalcification nous paraît préférable.
Nous avons déjà dit, au chapitre premier, que le procédé par usure ne convenait pas à l'étude du diploé. Plusieurs essais nous en ont convaincu. À plus forte raison quand il s’agit de rechercher une infiltration sanguine à l’intérieur d’un tissu spongieux plus ou moins altéré par le traumatisme.
Aussi nous proposons-nous d'étudier plus longuement la deuxième méthode dont nous disposons pour l’étude du tissu osseux.
IT. Deuxième procédé : Préparation par décalcification.
Les différents temps de ce second procédé sont les suivants :
Fixation.
Décalcification.
Lavage.
Deshydratation et inclusion.
Coloration et montage.
A) Fixation. — Nous en avons déjà parlé au chapitre IIT.
Elle se fait par un séjour dans l’alcool à 80° ou dans le formol, séjour plus ou moins prolongé selon la grosseur de la pièce. Si celle-ci est trop volumineuse pour être décalcifiée telle qu’elle est, on y découpe avec une scie fine, de petits fragments de 1 centimètre de côté environ.
B) Décalcification. — C'est là le temps le plus important en même temps que le plus délicat.
Et cependant, lorsqu'on consulte les différents ouvrages susceptibles de nous documenter sur ce sujet, on constate que leurs auteurs sont loin d’être d’accord : les formules les plus diverses sont préconisées; certaines sont simples, les autres fort complexes.
Aussi, plutôt que d'utiliser l’une d’entre elles au hasard, avons-nous préféré reprendre entièrement la question.
Nous avons effectué un très grand nombre de décalcifications, non pas empiriquement, mais en suivant un ordre logique basé sur l’utilisation des propriétés chimiques des acides en vue du résultat à obtenir.
- Nous allons faire tout d’abord un bref exposé de ces recherches.
Recherches personnelles sur une méthode de décalcificalion. -- Quelles sont exactement les données du problème que nous avons à résoudre ?
Nous avons déjà dit au chapitre premier que l’os était formé de deux parties :
La partie albuminoïde ou osséine.
La partie minérale, à base de phosphate tricalcique auquel s’ajoute une faible proportion de carbonate de chaux et de magnésie.
Le but que nous cherchons à atteindre est de conserver intacte la première en éliminant la seconde.
Pour arriver à cette fin, il nous faut employer des acides qui, étant plus forts que l’acide phosphorique, sont susceptibles de donner avec le phosphate tricalcique des sels solubles.
Nous nous heurtons aussitôt à un écueil, car les acides, surtout les acides forts, attaquent la matière organique, à des degrés divers, il est vrai.
En conséquence, les principales qualités à exiger d’un mélange décalcifiant sont les suivantes :
Etre susceptible de déplacer l’acide phosphorique et de donner avec le phosphate tricalcique des sels aussi solubles que possible.
Respecter l'intégrité de la substance organique.
Enfin, et ceci concerne spécialement les expertises médicolégales, aboutir à ces deux résultats dans un délai assez bref.
Voyons maintenant, en fonction de ces trois facteurs, les principaux points sur lesquels nous avons expérimenté.
19 Choix d’un acide.
a) Eliminons d’abord :
L’acide acélique.
Let. 00e
L’acide picrique qui sont trop faibles pour déplacer l’acide phosphorique.
L’acide sulfurique qui donne un sulfate presque insoluble.
Cette propriété lui confère, indépendamment du sujet qui nous occupe ici, un certain intérêt médico-légal comme vient encore de le montrer une affaire criminelle assez récente.
Comptant faire disparaître toute trace de son forfait, un meurtrier avait mis à macérer dans une baignoire, remplie d’acide sulfurique pur, le cadavre de sa victime.
Les os résistèrent et pour cause.
Ne voyant pas se produire le résultat espéré, le criminel les enterra dans un coin de son jardin.
Mais, des soupçons étant nés, la police effectua des fouilles. Celles-ci amenèrent la découverte de débris osseux dont l'identification permit à la justice de suivre son cours.
On peut cependant pratiquer la décalcification avec l’acide sulfurique en adjoignant à celui-ci une grande quantité d’eau. L'opération dure alors beaucoup trop longtemps pour être pratiquement utilisable.
b) Parmi les acides susceptibles de solubiliser le phosphate tricalcique nous avons :
L’acide trichloracétique.
L’acide azotique.
L’acide chlorhydrique.
L'acide trichloracétique se présente sous forme de gros cristaux blancs très hygroscopiques.
Il est soluble dans la moitié de son poids d’eau (10 grammes d’eau pour 20 grammes d’acide trichloracétique).
A une concentration trop élevée, il altère les pièces; aussi ne l’avons-nous pas beaucoup employé car l’inconvénient de toutes les fortes dilutions est de ralentir la durée de la décalcification.
D'autre part, c’est un produit fort onéreux.
L'acide azotique donne des nitrates très solubles, mais c’est un corps employé électivement pour la destruction de la matière organique (méthode nitro-sulfurique de Denigés par
ah". + Dre
exemple). Aussi semble-t-il paradoxal de le voir préconiser, par la majorité des auteurs, pour la décalcification qui vise au contraire à sauvegarder la partie organique de l’os.
Les fragments osseux placés dans un mélange à base d’acide azotique jaunissent et diminuent considérablement de volume. L'’acide azotique est un produit à rejeter complètement.
L’acide chlorhydrique, au contraire, a toutes nos préférences.
Les sels qu’il donne sont très solubles. S
Dans l’industrie par exemple, c’est l’acide chlorhydrique qui est utilisé pour la préparation de l’acide phosphorique à partir du phosphate tricalcique des os.
C’est encore lui qui a été donné aux carnassiers par la nature prévoyante pour détruire les os susceptibles d’être introduits par l’alimentation dans le tube digestif de ces animaux.
Il altère au minimum la matière organique ce qui permet de l’employer à de fortes concentrations, et d’avoir ainsi une décalcification rapide sans que les pièces s’abîiment comme avec l’acide azotique.
20 Constitulion d'un mélange décalcifiant. — Le choix d’un acide étant chose faite, 1l s’agit encore de déterminer les conditions précises de son emploi, en particulier :
Dans quelle proportion le diluer ?
Avec quoi le diluer ?
Quelle quantité totale de liquide utiliser ?
Il serait fastidieux d’exposer ici les nombreux essais qui nous ont amené à une formule de liquide décalcifiant qui est la suivante :
Acide chlorhydaque mme 50 cm3 Sérum physiologique .......... 100 —
pour un fragment osseux de 1 à 2 cm? de surface environ. On obtient ainsi, sans avoir à renouveler le liquide, une décalcification régulière et rapide, qui permet d’avoir ensuite d’assez bonnes préparations de tissu osseux. Nous en reproduisons une figure 8, page 65.
Nous nous expliquerons cependant sur deux points de cette formule :
Figure 8.
Microphotographie de diploé normal :
Liquide décalcificateur : H Cl dilué au tier Coloration : Hémateine-érythrosine.
Objeetif : n° 3,
