SIGNE
a) Absence d’alcool.
La plupart des formules courantes en effet sont à base d’alcool.
C'est, là encore, un fait assez surprenant.
L'alcool, sans présenter, par ailleurs, d'avantage spécial, diminue considérablement la solubilité des sels, et rend la décalcification irrégulière ainsi que nous nous en sommes rendu compte par notre propre expérience.
b) Emploi du sérum physiologique.
Le chlorure de sodium est généralement ajouté, en faible proportion, aux mélanges décalcifiants, pour empêcher le gonflement des pièces qui y sont mises.
Cette action est réelle.
Nous avons trouvé commode d'utiliser ce corps sous forme de sérum physiologique qu’on peut préparer à l’avance en grandes quantités. La rapidité des opérations en est accrue.
Il suffit d’avoir :
Un flacon contenant du sérum physiologique.
Un autre contenant de l’acide chlorhydrique.
Une éprouvette graduée, pour pouvoir, en quelques secondes, constituer un mélange décalcifiant.
30 Durée de la décalcification. Facteurs de variation. — Pour un même liquide les variations dans la durée de la décalcification sont fonction de deux facteurs principaux :
Variété de tissu osseux.
Influence de la température.
a) Variété de tissu osseux. — Sur le même individu, certaines pièces du squelette, les côtes par exemple, se décalcifient bien plus vite que d’autres.
D'autre part, le même os, pris sur des individus différents, se décalcifie dans des temps très variables.
Ce fait s'explique par les différences que nous avons relevées au chapitre premier dans la constitution du tissu osseux.
Nous n’y reviendrons pas 1c1.
b) Influence de la température. — Nous avons remarqué que la décalcification est beaucoup plus longue à se produire en hiver qu’en été : alors qu’en cette dernière saison il faut
5 Or —
compter quatre jours en moyenne, 1l faut dix jours ou plus en hiver.
La constatation de ce fait nous a incité à vouloir accélérer la vitesse de l’opération, en mettant nos pièces dans une étuve à cinquante-cinq degrés. Cette température est beaucoup trop élevée et il se produit en peu de temps une destruction des fragments osseux.
La température optima pour une décalcification est entre vingt-cinq et trente degrés.
C) Lavage. — Lorsque les pièces sont décalcifiées, ce dont on se rend compte en y enfonçant une aiguille très fine, il faut leur faire subir un lavage destiné à éliminer toute trace d’acide.
On peut utiliser deux procédés :
Soit le lavage à l’eau courante.
Soit, plus simplement, un séjour de quatre à cinq heures dans du sérum physiologique fréquemment renouvelé.
C'est cette seconde technique que nous avons employée.
On peut vérifier que le liquide de lavage n’est plus acide à l’aide du papier tournesol.
D) Deshydralalion et inclusion. — Nous pensons qu'il est non seulement avantageux, mais encore nécessaire de se servir ici d’un procédé rapide du type de celui qui a été préconisée par MM. Lande et Dorolle (59) pour la docimasie pulmonaire histologique.
Si un fragment osseux décalcifié séjourne trop longtemps dans les alcools, il s’y durcit et devient absolument impropre à passer ultérieurement au microtome.
Voici la technique à laquelle nous nous sommes arrêté :
Premier bain d’alcoo! à 559, un quart d’heure.
Deuxième bain d’alcool à 559, une demi-heure.
Premier bain d’alcool absolu, un quart d’heure.
Deuxième bain d'alcool absolu une demi-heure.
Premier bain de toluène, un quart d'heure.
Deuxième bain de toluène, une demi-heure.
Nous faisons ensuite l'inclusion dans deux bains de paraffine successifs d’au moins une heure chacun.
Puis les blocs obtenus sont taillés en forme de tronc de pyramide et débités au microtome Minot en coupes de 100 à 200 y.
Ces dernières, enfin, sont collées sur une lame à l’eau albumineuse et mises à sécher pendant douze heures environ.
E) Coloration. — Nous avons utilisé les colorations suivan- Less
Hématéine-éosine.
Hématéine-picro ponceau.
Hématoxyline-éosine.
Hématoxyline-picro ponceau.
1° Traitement d’une coupe avant coloration. — Déparaffiner la coupe au xylol.
La débarrasser du xylol par quelques gouttes d’alcool à DO:
L'’hydrater en la plongeant dans un verre rempli d’eau.
20 Colorations à l'hématéine. — a) Hématéine, il y a intérêt en ce qui concerne le tissu osseux à laisser agir l’hématéine pendant assez longtemps : 20 minutes environ.
La coupe est lavée à l’eau.
b) Ensuite : éosine en solution alcoolique : 1 minute.
Ou : picro-ponceau : 30 secondes.
39 Coloration à l’hématoxyline ferrique d'Heidenhain. — Ce colorant est susceptible d’être employé de façons diverses. Nous l'avons utilisé selon la technique que nous indiquons ci-dessous :
Séjour d’une heure dans une solution d’alun de fer à 4 % (mordant).
Lavage à l’eau distillée.
Séjour d’une heure dans la solution d’hématoxyline (colorant).
Lavage à l’eau distillée.
Différenciation par l'alcool picrique (plus rapide que la différenciation à l’alun de fer).
Elle doit être suivie au microscope.
Lavage à l’eau courante.
Coloration à l’éosine ou au picro-ponceau.
Moreau,
40 Trailement d’une coupe après coloration. — Deshydratation par l’alcool et le xylol phéniqué.
Eclaircissement au xylol pur.
Montage au baume du Canada entre lame et lamelle.
5o Résullats de ces diverses coloralions Hématéine-éosine :
Tissu osseux : violet.
Hématies : rouge.
Hématéine-picro-ponceau Tissu osseux : rouge brun.
Hématies : jaunes.
Hématoxyline-éosine :
Tissu osseux : rouge.
Hématies : noires.
Hématoxyline picro-ponceau :
Tissu osseux : orangé.
Hématies : noires.
Renseignements fournis par l'examen histologique des ecchymoses osseuses. — Le jeu de ces diverses colorations va nous permettre d’étudier les lésions qui constituent l’ecchymose osseuse.
Quand on examine au microscope, des coupe-d’os qui présentent une infiltration sanguine traumatique, on y fait les constatations suivantes :
a) Les globules rouges envahissent complètement les espaces circonscrits par les travées osseuses.
Ces globules rouges sont colorés en rouge par l’éosine, en jaune par le picro-ponceau et en noir par l’hématoxyline.
Lorsque la pièce a été soumise à un lavage à l’eau trop prolongé, on ne trouve pas ou peu de globules, mais une sérosité amorphe qui prend les mêmes colorants qu'eux.
b) L'état des travées osseuses est variable.
Elles peuvent être indemnes et parfois, au contraire, sont désorganisées.
Il faut, dans ce second cas, savoir distinguer les altérations qu'elles subissent au cours de la préparation histologique de celles qui sont dues au traumatisme.
ART En
Aussi les lésions des travées osseuses sont-elles à notre avis d’une interprétation assez délicate tandis qu’une infiltration globulaire comme celle qui se voit figure 9 ne laisse guère d’hésitation sur l’existence d’un épanchement sanguin.
Si l’on conserve des doutes sur la réalité d’une ecchymose, on peut pratiquer l’examen histologique d’un fragment osseux d'apparence normale, prélevé en un point symétrique. On compare alors les deux préparations. C’est ainsi que la figure 9 est encore plus démonstrative quand on la met à côté de la figure 10. Des différences aussi frappantes permet tent de poser un diagnostic solidement étayé.
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Figure 9.
(Observation 1)
Microphotographie d’os ecchymotique. Fragment prélevé sur la grande aile du sphénoide figurée en II sur la planche 1, page 37.
Liquide décalcificateur : H CI dilué au tiers. Coloration : Hémateine Picro-Ponceau.
Objectif : no 3.
