Revue de Médecine
gg PROTOZOAIRES, les hématozoaires chez un malade, de l'aire l'examen du sang avant de commencer le traitement; les corps sphériques et les flagella disparaissent rapidement sous l'influence de la médication quinique, les corps en croissant résistent davantage.
L'efficacité de la quinine dans les fièvres palustres s'explique bien depuis qu'on sait que le parasite du paludisme est un hématozoaire. Les sels de quinine dont l'action sur les schizophytes est faible, sont au contraire très toxiques pour les protozoaires. Il suffit d'ajouter une parcelle d'écorce de quinquina à une infusion de fom pour détruire tous les infusoires (Dujaïdm, Binz, Bochefontaine).
Technique. - Lorsqu'on se propose d'étudier l'hématozoaire du paludisme il faut avoir soin d'abord de recueillir du sang dans de bonnes conditions, c'est-à-dire chez des malades qui ont la fièvre et qui ne sont pas soumis à la médication quinique; le moment le plus favorable est, dans la fièvre intermittente, le début des accès.^
Le sang doit être examiné: 1» à l'état frais; 20 après dessiccation et coloration. L étude du sang frais et pur est très intéressante; si la préparation a été bien faite, en évitant les causes d'altération du sang signalées précédemment, les éléments parasitaires ne peuvent pas être cou-
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fondus avec des éléments normaux déformés; on peut observer les mouvements amiboïdes des corps sphériques, les mouvements si remarquables des flagella et, en prolongeant l'examen, quelques-unes des transformations des éléments parasitaires.
Sur les préparations de sang desséché, on colore difficilement les flagella qui, déformés et immobiles, sont beaucoup moins intéressants que dans le sang frais, mais on voit bien les croissants et les corps sphériques.
Le sang est desséché comme il a été dit au chapitre précédent; on voit très bien au milieu des hématies les corps en croissant qui se conservent pendant longtemps; les préparations non colorées doivent être montées à sec, le baume du Canada z^cndrait trop transparents les éléments normaux du sang et les éléments parasitaires.
Le sang desséché et fixé peut être coloré à l'aide de différents réactifs. Le bleu de méthylène seul ou associé à l'éosine, l'hématoxyline et le violet de gentiane donnent de bons résultats.
La solution aqueuse concentrée de bleu de méthylène colore au bout de quinze à trente secondes les éléments parasitaires (corps sphériques et croissants) qui prennent une teinte d'un bleu plus pâle que les noyaux des leucocytes. Les corps
en croissant se colorenL moins bien que les corps sphcriques et les corps segmentés.
En ajoutant une petite quantité d'une solution aqueuse de borax à la solution de bleu de méthylène, on augmente beaucoup la puissance colorante de ce réactif qui colore môme les hématies si on le laisse agir trop longtemps; il suffit de quinze secondes pour obtenir la coloration voulue des éléments parasitaires.
Un bon moyen de préparation des corps en croissant consiste à faire disparaître les hématies en trempant la lamelle de verre couverte de sang desséché dans de l'eau acidulée avec l'acide acétique et en colorant ensuite avec la solution de bleu de méthylène boratée. Les croissants se colorent bien et ils sont très faciles à voir, les hématies ayant disparu.
La double coloration par l'éosine et le bleu de méthylène donne d'excellents résultats; nous colorons d'abord à l'aide de la solution aqueuse d'éosine (15 secondes), nous faisons agir ensuite la solution aqueuse concentrée de bleu de méthylène (15 à 50 secondes); la préparation est lavée avec soin à l'eau distillée, séchée et montée dans le baume.
Le violet de gentiane et le violet dahlia sont utiles pour la coloration des petits éléments sphériques qui adhèrent aux hématies, ou qui y sont inclus ; il faut avoir soin de ne pas laisser agn*
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CCS rcaclifs assez longtemps pour qu'ils colorent fortement les hématies.
Sur les préparations colorées avec le violet de gentiane ou le violet dahlia, on distingue mal les grains noirs de pigment, ce qui est un inconvénient.
L'hématoxyline alunée (formule de Latteux) donne d'assez bons résultats.
La safranine colore les éléments parasitaires en rose vif, tandis que les hématies prennent une teinte d'un javuie rosé, mais cette différence de teinte n'est pas suffisante pour bien mettre en évidence les éléments parasitaires.
Dans l'intérieur des corps sphériques colorés par le bleu de méthylène on voit souvent des espaces clairs, arrondis, qui correspondent aux noyaux. Après coloration par le violet de gentiane, on distingue parfois de petits noyaux accolés à la circonférence externe (Sacharof).
Plusieurs procédés spéciaux ont été préconisés pour colorer les noyaux des hématozoaires.
Celli mélange une goutte de sang frais à une goutte de sérum coloré par le bleu de méthylène, la coloration se produit lentement; la préparation doit être laissée dans la chambre humide pendant plusieurs heures.
On obtient les mêmes résultats par le procédé de Soulié : on dépose sur une lame porte-objet une goutte d'une solution de bleu de méthylène,
on fait ensuite évaporer le liquide; une goutte du sing à examiner est déposée au môme endroit et recouverte avec une lamelle couvre-objet; le bleu de méthylène se dissout dans le sérum et colore les éléments parasitaires.
Romanowsky a réussi à colorer les noyaux par le procédé qui suit :
Le sang- desséché et flambé sur des lamelles couvre-objet est exposé dans l'étuve sèche à la température de 105 à 110 degrés pendant trois quarts d'heure ou une heure. Les lamelles sont ensuite plongées dans un mélange colorant préparé fraîchement avec deux volumes de solution aqueuse saturée de bleu de méthylène étendue d'eau à moitié et cinq volumes de solution aqueuse d'éosine à 1 pour 100 étendue d'eau à moitié ; les lamelles restent dans ce mélange pendant une heure au moins ; on lave à l'eau distillée et on monte dans le baume. Les noyaux sont colorés en violet pourpre.
Mannaberg a employé comme fixatif l'acide picrique et comme colorant l'hématoxyline. Le sang, desséché convenablement à l'air depuis six heures au moins, est plongé pendant vingt-quatre heures dans le fixatif suivant : acide picrique en solution aqueuse concentrée et eau distillée (parties égales) et acide acétique cristallisé 5 à 5 pour 100; la préparation est mise ensuite dans l'alcool absolu jusqu'à décoloration complète
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(ving-t-qualrc heures au moins). On colore avec une solution alunée d'hématoxyline jusqu'à ce que la structure du noyau des leucocytes disparaisse, et on se sert d'alcool chlorhydrique à 0,25 pour 100 et d'alcool faiblement ammoniacal pour diflcrencier les éléments.
Grassi et Feletti recommandent les deux procédés suivants :
1" Le sang desséche est plongé dans un mélange d'alcool absolu et d'éther (parties égales) auquel on ajoute quelques gouttes d'acide acétique concentré. La préparation est ensuite portée dans l'hématoxyline, quand elle s'est saturée de matière colorante on lave et on monte dans le baume.
2° On prépare une solution aqueuse diluée de bleu de méthylène ou de fuchsine, en mettant une o-outte de la solution concentrée de bleu de méthylène ou de fuchsine dans un verre de montre rempli d'eau distillée, on recueille une goutle de sang sur un verre couvre-objet et on laisse tomber celui-ci sur une goutte de la solution de bleu de méthylène qui a été déposée sur un verre porte-objet. Pour mélanger le sang à la solution colorante, il suffit de soulever un peu, d'un côté, la lamelle couvre-objet en la laissant ensuite retomber.
D'après Grassi et Feletti, on obtient ainsi une coloration intense des nucléoles et des grains de
chromaline quand il en existe, la substance du parasite reste [nco\ove {Cenlralbl. f. BaJder, 1891, t. X, p. 51',»).
Sacharoi" a recommande le procédé suivant pour colorer les flagella : on fait plusieurs préparations de sang frais ; on examine au microscope une de ces préparations, les autres sont mises dans la chambre humide. Lorsque les flagella apparaissent dans la préparation examinée, on fait sécher le sang des autres préparations, on le fixe par la chaleur et on colore avec une solution aqueuse de violet de gentiane.
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