A) DIAGNOSTIC CLINIQUE

Une température inexpliquée d’un nourrisson, une rhino-pharyngite qui traîne, à plus forte raison l’un ou l’autre des symptômes étudiés plus haut, imposent la Ponction Lombaire.

L'issue d’un liquide louche ou purulent indique qu’il s’agit d’une méningite purulente, On pense au méningocoque à cause de la fréquence, et on institue un traitement classique (Sulfamidé-Pénicillé). I ne faut pas s’en tenir là, et l'examen de laboratoire est indispensable, pour préciser la nature du germe en cause. La conduite du traitement en dépend, et de là, le pronostic.

B) DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE () Examen direct.

La première réponse fournie par le laboratoire n’est pas définitive : elle a la valeur d’une indication. « Petit

bacille gram négatif ». Ce qui élimine le méningocoque ou le pneumocoque, et oriente les recherches. On pensera au

@) Nous remercions le Docteur Moureau, bactériologiste des Hôpitaux, de ses aimables conseïls.

Pfeiffer, plus fréquent que le Colibacille ou le Friedlander.

En outre c’est un cocobacille qui ne dépasse pas 1 à 2yde long, sur 0,2 y de large. Le fuchsine ou le violet phéniqué le colorent mieux que la méthode de Gram : on distingue, au centre du corps bacillaire, un espace clair, alors que les pôles sont plus fortement colorés.

Mais la forme en navette, qui prédomine, peut voisiner, dans le L.C.R., avec quelques formes filamenteuses, La longueur atteint 8 à 10 y, la largeur 0,8 à 1,2y ; ces formes, incurvées en C ou en S, sont parfois enchevêtrées en paquets.

Même si ces détails morphologiques ne sont pas précisés, la présence sur les frottis d’un « Bacille Gram négatif » commande, actuellement, un traitement précis : la Streptomycine (T.F. Paine, 1947), En attendant, par la culture, une confirmation du diagnostic bactériologique, la thérapeutique se trouve donc déjà or.entée d’une façon nouvelle,

Culture.

Pour obtenir des résultats certains et constants, le bactériologiste ne doit pas oublier que la culture du Pfeiffer «exige la mise en œuvre d’une technique précise ». (Dujarric de la Rivière). Plus que la morphologie, ce sont les caractères culturaux qui priment.

L’Hémophilus ne pousse pas sur les milieux usuels. On ne peut le cultiver que sur des milieux contenant du Sang, ou des extraits globulaires, ou encore certains facteurs de croissance (.. Expérimentalement, on peut obtenir des cultures en milieu ordinaire à condition que le Pfeiffer soit au contact d’autres microbes : les phénomènes de satellitisme et de gigantisme observés ont été décrits par Grassberger.

Mais la technique courante du diagnostic au laboratoire utilise les milieux au sang. Celui de Levinthal, modifié par Lubinsky, est couramment employé. Nous devons rappeler ici sa préparation.

@ Facteur « V » : Thermolabile. Dérive de: levures ou de corps bactériens. Serait analogue à la vitamine PP (Lwoff).

Facteur «X»: Présent dans les pigments sanguins.

à 1 Me

Milieu de Levinthal. (Technique décrite par Dujarric de la Rivière).

Porter au bain-marie à 100° un flacon d’Erlenmeyer contenant 200 cc. de gélose à 2,5 ou 3 %, à pH 7,3-7,5. Lorsqu’elle est fondue, refroidir à 70° avant d’y ajouter 10 cc. de sang de lapin défibriné. Il est très important de verser le sang progressivement en 5 ou 6 fois, en mélangeant soigneusement, et en maintenant la température de l’ensemble à 65-70°. Porter alors à nouveau à l’ébullition l’eau du bain-marie : des floculats se produisent en même temps que le liquide devient plus foncé. Retirer le flacon au bout de 2 minutes (très exactement) et le laisser le même temps sur la table. Recommencer deux fois.

Laisser sédimenter pendant 2 heures à 60° les floculats produits. Filtrer et répartir en boites de Pétri. La partie inférieure de la gélose, plus foncée, peut être utilisée pour les cultures, mais sa non-transparence ne permet pas de distinguer les colonies (« Agar Chocolat >» des Américains). Ce milieu se conserve mal, et doit être préparé en petite quantité pour être renouvelé souvent.

On peut remplacer le sang de lapin par du sang de cheval, de mouton ou de chèvre. Le sang humain est moins favorable,

Les milieux liquides se préparent de la même manière, mais servent peu.

Il est possible de préparer les extraits globulaires de Agulhon et Legroux :

Etendre le sang défibriné de 4 volumes d’eau physiolog'que, chauffer 15 minutes au bain-marie à 80° en agitant fréquemment, filtrer ou centrifuger. On ajoute la solution aqueuse ainsi obtenue aux milieux usuels, à la dose de 5 à 10 %.

Colonies.

Le bacille de Pfeiffer, strictement aérobie, pousse entre 26° et 42° (Température optima : 37°). Les premières colonies, qui apparaissent après 12 h. d’étuve, ont 2 à 3 mm de diamètre. Elles continuent de s’accroître pendant 36 h. Elles sont petites, circulaires, transparentes, homogènes, non granuleuses, confluentes,

route

À la suite de Scott (1929), Pittman, en 1931, met en évidence deux aspects macroscopiques différents sur les milieux solides :

1°. Certaines colonies, dites « Smooth », sont plus opaques, mucoïdes, de dimensions uniformes. Elles sont luminescentes en lumière oblique. Douées d’une grande vitalité, elles ont tendance à confluer.

Les bacilles qui les constituent sont tous encapsulés.

De telles souches sont isolées du L.C.R. de méningites.

2°. Les souches isolées des voies respiratoires donnent des colonies d’aspect différent. Moins opaques que les précédentes, elles ne sont pas fluorescentes : c’est la variété « Rough ».

Sur 97 prélèvements effectués par Pittman, la plus grande partie des souches recueillies (82) sont ainsi constituées.

Par repiquage, une souche «S >» peut devenir «R ».

AUTRES CARACTERES CULTURAUX.

A seule fin de compléter cette étude bactériologique, signalons ici la faible vitalité, et la faible résistance aux agents physiques, du bacille de Pfeiffer. Il est particulièrement sensible au desséchement,.

Au point de vue chimique, il attaque presque tous les sucres, et cette action présente peu d'intérêt.

50% des souches donnent de l’indol en bouillon : ce sont surtout celles provenant ae méningîites qui ont cette propriété, formant d’ailleurs un groupe sérologique à part (Rivers et Kohn, Wollstein). Le fait est intéressant à signaler ici.

Enfin, on remarque sur une plaaue de gélose, que le début de la strie d’ensemencement est plus riche en microbes, que la fin. Les colonies y sont géantes et irrégulières, Ce phénomène, appelé Cannibalisme, est dû au fait que certains microbes, morts, ont été utilisés par les vivants. (A rapprocher du satellitisme décrit plus haut).