CHAPITRE V

LES ANTICORPS TUBERCULEUX (1)

Jusqu'ici nous avons vu que la poussée infectieuse tuberculeuse s'identifiait par ses caractères cliniques et hématologiques d’une manière précise et présentait en somme une allure ‘très analogue à celle des maladies infectieuses aiguës, en général. Or, nous savons que d’après les classiques, les anticorps, dont l'apparition est précoce et assez rapprochée du début de l'infection. augmentent pendant tout le cours d’une maladie infeclieuse et atteignent un maximum au moment de la convalescence. Cette opinion est loin, 1l est vrai, d'être admise par tous, et, en particulher pour la fièvre typhoïde, M. Widal a montré que le taux des agglutinines typhiques demeurait stalionnaire au cours de la maladie, la réaction d'agglutination étant bien plutôt en rapport avec l'infection qu'avec l’immunisalion de l'organisme. 11 était cependant nécessaire de voir si chaque poussée évolutive entraînait un accroissement notable du taux des anticorps, comme le ferait la pleurésie d'après Arloing et Courmont pour les agglutinines. Pour voir si cette hypothèse se réalisait, nous avons étudié en série les diverses réactions d'anticorps dans la tuberculose, en menant parallèlement l'étude de la réaction de fixation de l'agglutination, de la précipitauon et, aulant que possible, de la euti-réaction. En coordonnant ainsi nos recher-

(1) Fernand Bezanxçox et H. de Sersonxes. Les anticorps tuberculeux. Congrès pour l'avancement des sciences. Lille, août 1909 et Journil de Physiologie el de Pathologie générale, novembre 1909.

DE SEBBONNES 6,

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ches, il nous était plus facile de noter les particularités de la marche de la maladie au point de vue humoral, et de constater en même lemps la valeur de ces réactions au point de vue du diagnostic et du pronostic de la tuberculose chez l'adulte. Nous allons passer successivement en revue les résultats que nous avons ainsi obtenus, en commençant par ceux fournis par la réaction de fixation (1).

$ 1 — Réaction de fixation.

- Technique. — Dans la tuberculose plus que dans toute autre maladie, 1l est de toute nécessité, s1 l’on veut obtenir des résultats précis, d'opérer avec une technique

(4) Les résultats fournis par la réaction de fixation au cours de la tuberculose ont donné des résultats fort variables suivant les divers auteurs. Les premiers en 1901, MM. Widal et Le Sourd, eurent l'idée d'appliquer la réaction de fixation au diagnostic de la tuberculose. Ils trouvèrent la réaction positive dans la grande majorité des cas, mais non constamment et, d'autre part, virent que des individus ne paraissant pas tuberculeux déviaient également le complément. La même année MM. Camus et Pagniez obtinre it des résultats analogues. En 1906, Wassermann et Bruck trouvèrent qu'il n'existait pas d’anti-tuberculine dans le sang circulant, sauf si les individus avaient été antérieurement traités par la tuberculine. Dans un second mémoire, il est vrai, ils reconnurent que leur première opinion était excessive et que dans certains Cas le sérum des tuberculeux non traités par la tuberculine pouvait dévier le complément. Tous les auteurs suivants : Morgenroth et Mile Rabinowitsch, Citron, Ludke, Kohn, Wolf et Muhsam, Bauer, Hanns trouvent également que la réaction de fixation dans la tuberculose est d'une très grande inconstance, et, en somme, à part certains points de détail, tous leurs travaux tendent à confirmer le mémoire de MM. Widal et Le Sourd en montrant qu'une partie seulement des tuberculeux déviait le complément. Seuls, quelques auteurs récents, comme Armand-Delille, admettent que la réaction de fixation fournit des résultats positifs chez la plupart des tuberculeux et présente un réel intérêt au point de vue du diagnostic. Dans la tuberculose expérimentale mêmes contradictions : Si Bordet et Gengou en 1903, Christian et Mile Rosenblatt chez le cobaye, Dembinski, chez le lapin et le pigeon, ne trouvent pas de sensibilisatrices dans le sérum des animaux injectés par le bacille tuberculeux humain, Wassermann et Bruck en rencontrent parfois, et Jousset en rencontre toujours quand les animaux ont été longuement préparés par des injections intra-veineuses. De plus, si Bordet et Gengou et Dembinski ne trou. vent pas de sensibilisatrices chez les animaux injectés avec des bacilles humains, ils en trouvent au contraire, s'ils emploient des bacilles aviaires contre lesquels les animaux d'expérience présentent beaucoup plus de résistance,

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des plus rigoureuses, qui puisse donner des résultats fixes et bien comparables les uns aux autres. Aussi, avons-nous toujours suivi, dans nos expériences, la technique indiquée par MM. Nicolle et Pozerski qui permet d'obtenir des résultats très comparables entre eux.

Alexine. — Notre alexine était une alexine de cobaye, vieillie de dix à quinze jours à la glacière. Nicolle et Pozerski (1) ont en effet montré que les alexines fraîches avaient une activité diminuant avec une rapidité extrême, au point qu'au cours d'une réaction de fixation, l'activité de l'alexine fraîche n’était pas la même au début et à la fin des expériences, tandis que ces alexines vieillies gardent d’un jour à l’autre un pouvoir à peu près constant, la vitesse d’altération devenant de plus en plus lente. Nous avons pu vérifier l'exactitude de ce fait chaque fois que nous nous écarlions de la technique indiquée par ces auteurs. L’alexine, de plus, devra être soigneusement dosée avant chaque expérience, afin de bien connaître son activité.

Sérum hémolytique. — Notre sérum hémolytique provenait de lapins préparés avec des globules de moutons. Il était titré une fois pour toules en prenant la plus petite quantité de sérum capable d'amener en une demi-heure à l'étuve l'hémolyse totale de 0 cent. 05 de globules de moutons. Deux fois notre provision de sérum étant épuisée, nous avons dû recourir à de nouveaux sérums hémolytiques, mais chaque fois une expérience de raccord à été faite permettant de connaîlre exactement l'activité du nouveau sérum employé par rapport à l’ancien.

Antigène. — Comme antigène nous nous sommes servis simultanément d’une émulsion de bacilles de Koch humains

(A) M. Nicoce et Pozerskl, Annales de lInstitut Pasteur, t: XXII, n° 1, 25 janvier 1908° p. 37.

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à 1°/, et de tuberculine brute. L'émulsion de bacilles de Koch avait été obtenue en broyant aussi finement que possible trois grammes de bacilles tuberculeux humains tués préalablement à l'autoclave dans 300 cent. cubes d’eau physiologique. L'émulsion rendue aussi homogène que possible, ce qu'il est toujours difficile d'obtenir, était répartie en tubes scellés de manière à pouvoir nous servir pendant toute la durée de nos expériences.

Ces antigènes furent également Uitrés une fois pour toutes, afin de connaître la dose la plus favorable à employer et pour savoir si cette dose n'empêchait pas à elle seule l'hémolyse de se produire, en dehors de toute adjonction de sérum de tuberculeux. La tuberculine, comme l'avaient déjà vu Weil et Nakayama (1) exerçait une action empèêchante très marquée sur le phénomène de l'hémolyse et nous dûmes ne pas dépasser la dose de 0 cent. cube 1 de tuberculine diluée au quart. Notre émulsion de bacilles de Koch, au contraire, n’empêchait l’hémolyse de se produire qu'à des doses très élevées et nous pûmes ainsi facilement employer Ü cent. cube # de cette émulsion (1).

(1) War et Nakavama, Münch. med. Woch., 1904, n° 21.

(1) Avec cette alexine et ce sérum hémolytique bien connus et bien dosés, avec ces antigènes demeurant constamment les mêmes, nous pûmes explorer 150 sérums de malade entrés dans le service de M. Bezançon. Malgré les dosages préalables, nous avons refait à chaque expérience les tubes témoins qui nous assuraient que notre couple hémolÿtique fonctionnait normalement. Au bout d'une demiheure, les tubes étaient retirés de l'étuve, alors que l'hémolyse était totale dans le gube contenant seulement le couple hémolytique. Ces tubes étaient alors ceutrifugés rapidement et les résultats de l'hémolyse dans chaque tube était notée d’après la teinte du liquide surnageant d'une part et d’après l'abondance du culot de centrifugation d'autre part. Quand le liquide était légèrement rosé, nous indiquions le résultat en mettant : hémolyse très légère ; pour un liquide fortement laqué, le tube contenant cependant encore un culot important, nous mettions : hémolyse nette, enfin, pour un liquide complètement laqué, sans culot résidual, nous mettions : hémolyse totale.

Notons qu’il est nécessaire, si l'on veut avoir des résultats précis, de s’assurer de tout un jeu de pipettes graduées, de préfércuce en gouttes. Nous employions des pipettes donnant 20 gouttes au cent. cube, chaque goutte étant par suite de Occ. 05.

Hématies. — Dans nos expériences, nous avons employé des globules de moutons, non dilués, alors que généralement on emploie plutôt une émulsion de globules à 5 °/,. Il nous a semblé qu’en agissant comme nous le faisions, la technique était plus rigoureuse. En général, dans la réaction de fixation, on opère sur des mélanges de liquides dont le volume total est d'environ 2 centimètres cubes. Or ces liquides sont mélangés, il ne faut point oublier, en deux temps. Dans la première parte de l’expérience, si l’on opère avec des globules dilués, le mélange comprend de 0 cent. cube 35 à 0 cent. cube 5 de sérum (sérum de malade et sérum de cobaye) et 0 cent. cube 65 à 0 cent. cube # d’eau physiologique, c'est-à-dire une proportion très forte de sérum. Dans la deuxième partie de l’expérience, au contraire, en ajoutant À cent. cube de globules dilués au 1/20, on amène une dilution très grande du mélange. Les constantes d'équilibre physique dans les deux parties de l'expérience ne sont plus du tout les mêmes et il peut en résulter une cause d'erreur. Expérimentalement, nous avons pu vérifier le bien fondé de cette hypothèse dans un cas {Tableau 1).

Tableau I mme

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A. 0,3 0,&4 | — |0,05 | 0,1 1 — | 0,15 | Hémolyse totale. Toberculose 0,3 | — A0 OO 1 — | 0,55 none totale. ‘ 0,3 — 0,4°1"0,05 | 0,1 1 — | 0,45 | Hémolyse totale. | ur 0.3 0,4! — |0,05 | 0,1] — |0,05 | 1.1 | Hémolyse tr. légère. 8 février 4909 | 63! — | — |o.05 | 0,1| — |0,05 | 1,5 | Hémolyse totale. — 0,1 | 0,05 | 0,1 — 0,05 1,4 | Hémolyse tr. légère.

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Il est certain que nous n'avons obtenu qu'une fois un pareil résultat, mais le fait paraît indiscutable, car en répétant immédiatement notre expérience avec le même sérum, nous avons obtenu un résultat identique. Ce fait est probablement rare, mais du moment qu’il peut se produire, et qu'il est aussi facile de se servir d'une goutte de globules lavés, versée dans le mélange avec une pipette graduée en gouttes, que d'employer une solution de globules dilués au 1/20, nous croyons qu'il est préférable d'éviter cette cause d'erreur (1).

Sérum à explorer. — Une deuxième cause d'erreur nous à semblé présenter une assez grande importance, nous voulons parler de l’heure de prélèvement du sérum à explorer. Si l'on prend du sérum à un même malade dans la même journée, on est étonné de voir des variations considérables dans les résultats de la réaction de fixation,

(4} Cette cause d'erreur a été expressément signalée par Bonnet et PARKER Gay dans leur étude sur le pouvoir antagoniste des sérums normaux (Borper et Parker Gar : Absorption d'alexine et pouvoir antagoniste des sérums normaux : Annales de l'Institut Pasteur, t. XXII, n° 8, 25 août 1908, p. 633). Ces auteurs constatent qu'il ne faut jamais perdre de vue l'influence constante qu’exerce sur la fixation de l'alexine la présence d’une quantité assez forte d’une solution physiologique. « Dans la première phase de la réaction de fixation, on met au « contact de l'alexine un élément tel qu'un microbe et un sérum À capable de « sensibiliser cet élément, c’est-à-dire de lui conférer le pouvoir de fixer l’alexine. « Dans la seconde phase, on recherche en introduisant des globules sensibilisés « si l’alexine a disparu du liquide ou bien est restée libre ; dans cette dernière « éventualité, la fixation de l’alexine s'opère, non dans la première phase (sur « les microbes) mais au cours de la seconde (sur les globules), l’hémolyse appa- « rait et l'on conclut que le sérum A n’est pas sensibilisateur. Mais pour que « l'expérience soit correcte, il est clair que les deux phases dont elle se compose « doivent être comparables au point de vue de la facilité avec laquelle l'alexine « peut se fixer. Or un excès de sérum inhibe cette fixation, un excès de solution « physiologique le favorise. Il convient donc de maintenir autant que possible « constante pendant toute la durée de l'expérience, la teneur du mélange en « solution saline et en sérum ». Aussi, Borper et Parker Gay recommandent-ils d'employer des suspensions contenant beaucoup de globules sous un volume aussi faible que possible,

suivant les divers échantillons de sérums employés. Mais, d’une manière générale, ces variations semblent étroitement subordonnées à l'influence des repas, ceux-C1 produisant un pouvoir antagoniste du sérum des plus marqués dans certains cas, masquant complètement les résultats de la réaction de fixation. |

Tableau II