CHAPITRE III

TECHNIQUE Du BORDET-WASSERMANN,

Encore qu’elle soit fixée dans ses grandes lignes, chaque expérimentateur a ses petits détails, ses soins particuliers, son « tour de main ». Et tout cela est de grande importance, puisque tel sérum, réputé positif ici est considéré comme négatif ailleurs, bien que les conditions de la récolte fussent identiques. Au cas où d’autres expérimentateurs effectueraient des recherches du même genre, nous avons pensé qu'il serait absolument nécessaire de fixer méticuleusement le modus faciendi de nos propres travaux, de telle manière que, les conditions de réalisation restant les mêmes, les

résultats pussent être comparables.

L’anligène employé est celui de la maison Cogit.

L’ambocepieur est également de la même maison. Ces deux préparations sont livrées prêtes à l'emploi, en tubes stériles.

Les hémalies de mouion sont obtenues en recueillant du sang lors de la saignée dans un ballon très sec, stérile et contenant des perles de verre. Le sang est agité pendant dix minutes pour opérer la défibrination. Les globules rouges sont alors lavés. Dans un tube à essai on verse 2 centimètres de globules et par-dessus 3 centimètres d’eau physiologique à neuf pour mille. On agite et l’on centrifuge, Le liquide qui surnage, louche et rosé, qui contient des hématies brisées et du sérum est rejeté. On procède à un nouveau lavage puis à une deuxième centrifugation. L’émul-

sion qui sera utilisée au cours des manipulations est consti-

tuée alors par un mélange d’une partie en volume de purée d’'hématies et de dix-neuf parties d’eau physiologique à 90/ 60.

Tiülrage du complément de cobaye. — Le complément est obtenu en utilisant le sérum d’un cobaye. On saigne l'animal au cœur (il peut servir plusieurs fois ) et l’on tire 5 à 10 centimètres cubes de liquide. Il importe de prendre le sang douze heures à l’avance ; c’est seulement après ce temps, en effet, qu’il est «stabilisé ». S'il en était autrement on verrait sa valeur varier au cours des manipulations ce qui troublerait gravement les résultats, Il ne faut pas non plus dépasser la douzième heure car au-delà le sérum se détériore rapidement.

On dresse cinq tubes à réaction. Dans chacun on verse :

1°"tube - 2e tube: 3° tube 4etube 5° tube

Complément , . 0 cm8 1 0,1 0,1 0,1 0,1 Eau physiol. à 9 °/0o 0,7 0,9 452 1,5 1,8

On dresse cinq autres tubes. Dans chacun on verse succes-

sivement :

1°" tube 2e tube 3° tube 4e tube 5e-tube

Eau physiol. à 9° 20 cms 2 0,2 0,2 0,2 0,2 Antigène. . « . 0,27 0,2 0,2 0,2 0,2 4/10 de cm3 de

dilution du com-

plément : dui‘’tube du?*tube du3°tube dué’tube du5®tube

Ces cinq tubes sont portés à l’étuve à 370 où ils restent pendant une heure.

Au bout de ce temps on ajoute successivement :

1er tube 2e tube 8° tube 4e tube 5e tube

Hématies de mou- LORTAUS 0/7 US 0 cm3 1 0,1 0,1 0,1 0,1 Ambocepteur , . 01 0,1 0,1 0,1 0,1

LEE y EURE

. On porte à l’étuve à 370 pendant vingt minutes.

Toutes ces opérations doivent être effectuées minutieusement. La dernière graduation de la pipette ne doit pas être utilisée, et après chaque prélèvement elle doit être rincée à l’eau physiologique abondamment. Après chaque addition les tubes doivent être soigneusement agités.

On examine alors les dilutions qui donnent l’hémolyse totale et l’on choisit la plus faible d’entre elles. Les autres sont éliminées de même que celles n’ayant donné qu’une hémolyse partielle. |

Réaction proprement dile. — Le sérum à examiner est chauffé à 55° pendant vingt minutes au moins, et trente minutes au plus, durée qu’il est expressément interdit, de dépasser. En fait nous nous sommes toujours contentés d’une durée de vingt minutes exactement.

On dresse cinq tubes, dans lesquels on verse successivement : :

1er tube 2etube S3etube 4e tube 5° tube Eau physiol. à9°/. 0,25 0,2 0,1 0,3 0,4 Antigéne.#w.#3 0,05 0,1 0,2 0 DL) Complément dilué 6

selon le titre 4,

prescrits. Ve. (UE 0,1 0,1 0,1 0 Sérum à examiner. 0,1 0.1 po: 0,1 0,1

Après agitation, on porte à 37°, pendant une heure. On ajoute alors :

4er tube 2e tube 3° tube . 4° tube 5e tube

‘Hématies mouton L'ATTENTE 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Ambocepteur . + 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1

On porte à 37° pendant trente minutes.

On procède alors à la lecture, Le tube 5 ne doit jamais