CHAPITRE HI

La confection des coupes

On utilisera, pour couper les blocs de polyvinyle, un microlome de \Minot, bien réglé et deux lames : l’une usée, servira à entamer le bloc et sera réservée à cet usage ; l’autre, très fine et parfailement entretenue, servira à faire les coupes une fois le bloc entamé.

. Le bloc sera saisi par les deux faces f, et f, de son socle dans la pince du microtome ; on ne le saisira pas entre les deux autres faces car ce socle pourrait se déformer, la colophane se briser et le bloc se décoller.

On assujettira le rasoir d'entame dans une position assez inclinée et on coupera lentement, à 10 x, jusqu'au moment Où on arrivera sur la pièce. Il faut absolument éviter de vouloir faire cette opération trop rapidement (ne pas tourner à plus d’un tour par seconde, d’un mouvement très régulier). Les microtomes démultipliés seront particulièrement pratiques. Si on tournait rapidement, le rasoir ne mordrait que toutes les 5 ou 6 coupes, en

enlevant une tranche volumineuse ; les efforts violents alors exigés pourraient détériorer la lame et décoller le bloc.

Cette opération enlève des copeaux qui ne représentent pas toute la surface du bloc ; on ne s'en inquiètera pas. Pour obtenir des sections entières, il faut, en effet, ramollir la surface du bloc avec l'haleine. Le polyvinyle hygroscopique absorbe un peu d'humidité, devient souple et se coupe sur toute la surface sans se déchirer. C'est ce qu'on fera lorsqu'on estimera être arrivé au niveau de la pièce ; en examinant la coupe épaisse ainsi obtenue, on vérifiera si la section intéresse bien l'objet. Si oui, on change de rasoir pour faire les coupes proprement dites.

L'épaisseur des coupes sera alors réglée à 5y, et on recommence à couper, très lentement ; entre chaque coupe, on projette l'haleine sur la surface du bloc ; la coupe doit ensuite se. faire régulièrement, sans à coup, ni bruit de caclage ; elle se plisse sur la face antérieure du rasoir. Il faut, avant de l'enlever, la déplisser. De la main droite, on prend une petite pince à mors fins et de la main gauche une aiguille. A l’aide de ces deux outils, on abaisse le bord inférieur de la coupe vers le dos du rasoir ; l'étalement se fait alors sur la face de ia lame. Avec la pince on la saisit et la dépose à la surface de l’eau contenue dans un cristallisoir où elle flotte et s'étale complètement.

On resaisit la manivelle du microtome pour faire remonter le chariot. En haut de la course, on donne un coup d'haleine sur le bloc et on abaisse lentement et régulièrement pour faire la coupe suivante. On aban-

donne la manivelle pour étaler et recueillir cette nouvelle coupe, et ainsi de suite.

Les coupes recueillies sur l'eau seront collées sur lames albuminées d'une manière très simple. La lame ‘ sera recouverte d'une goutte d'albumine glycérinée bien élalée avec le doigt, puis trempée dans un verre d'eau. En la plongeant ensuite partiellement dans le cristallisoir où flottent les coupes, il sera très facile d'en faire passer une sur la face albuminée. On égoutte et on sèche sur la platine chauffante électrique.

Les coupes peuvent d’ailleurs être conservées à l’état sec indéfiniment, sans être collées. Pour cela, on les porte après étalement, du rasoir sur un velours. Lorsqu'on en à un certain nombre, on les met dans une petite boîte que l'on conserve dans un endroit sec et frais. Au fur et à mesure des besoins, on prendra ces coupes avec une pince et on les déposera sur une lame albuminée et recouverte de quelques gouttes d’eau. En 10 à 15 minutes la coupe est parfaitement étalée ; on égoutte et on sèche sur la platine chauffante, comme ci-dessus. Cette manière de faire permet de conserver longtemps des coupes toutes faites, en grand nombre, sans immobiliser les lames correspondantes.

Les coupes, une fois collées et séchées, peuvent se conserver indéfiniment dans cet état. Au moment de la coloration, on commencera par dissoudre la masse d’inclusion avec un solvant quelconque (loluène, dioxane, cyclohexanone ou même simplement alcool à 95°). Cette dissolution est plus lente que celle de la paraffine : on laissera les coupes 1/4 d'heure au moins dans le tube où se lrouve le dissolvant. Ensuite, on rincera par deux