CHAPITRE PREMIER LE SANG ET LES MATIÈRES ALBUMINOÏDES

L — Matières albuminoïdes.

1 . Les matières albuminoïdes contiennent : C, H, 0, Az et S. —

Un petit fragment (un décigramme par exemple) d'albumine (blanc d'œuf séché à l'étuve) ou de fibrine sèche est chauffé avec précaution, au fond d'un tube à réaction bien sec, au-dessus de la flamme du brûleur de Runsen, Une languette de papier de tournesol rouge et une seconde de papier à l'acétate de plomb (papier glacé) sont maintenues à l'entrée du tube. Il se dégage d'abondantes vapeurs empyreumatiques, noircissant le papier d'acétate de plomb (présence du Soufre), bleuissant le papier rouge de tournesol et sentant l'ammoniaque et la corne brûlée (présence de V Azote), donnant sur les parties froides du tube, un dépôt de gouttelettes aqueuses (présence des éléments de l'eau, Hydrogène et Oxygène), et laissant au fond du tube un résidu de charbon noir et boursouflé (présence du Carbone).

2. Réactions générales des matières albuminoïdes. — Diluez 10 ce. de sérum (1) de bœuf avec dix fois leur volume

(l)Nous employons le procédé suivant, pour obtenir à l'abattoir de Liège, le sérum exempt de matière colorante rouge : le sang de bœuf est reçu, au moment de la saignée, directement dans une série de petits gobelets (contenant chacun au maximum 1/4 de litre), que l'on vient delà-

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d'eau; ajoutez un peu de chlorure de sodium (3 à .■> c. c. de la solution saturée), afin de redissoudre éventuellement la paragiobuline, qui peut commencer à troubler le mélange, et pour ne pas abaisser la teneur en sels du liquide.

Pour exécuter chacune des réactions suivantes, il suffit de prendre environ 2 ce. Vî de sérum dilué (la moitié de la pipette de 5 ce), dans un tube à réaction.

Les réactions colorées (r. xantho-protéique, r. de Millon, r. du biuret) seront répétées avec un flocon de fibrine (1) suspendu dans 2 ce ^2 d'eau.

3. Coagulation par la chaleur. — Prenez trois échantillons de sérum dilué : «, /^, c; à chacun d'eux, ajoutez 3 à 5 gouttes de teinture de tournesol, ou une petite languette de papier de tournesol.

a est soumis directement à l'ébuUition (agitez le tube audessus de la flamme, de manière à détacher le précipité d'albumine et à rempecher de coller au verre ; usez de la même précaution chaque fois que vous chauffez, à feu nu, un liquide albumineux) : il se forme un précipité peu abondant, nageant dans un liquide trouble. La coagulation de l'albumine est incomplète, à cause de l'alcalinité naturelle du sérum.

b est soumis à l'ébuUition, après addition de 3 à 5 gouttes de soude. L'alcali empêche la coagulation de l'albumine, et la transforme en albumine alcaline, qui reste en solution. Neutralisez avec précaution. En ajoutant goutte à goutte de l'acide acétique dilué, l'albumine alcaline se précipite : elle est soluble dans un excès d'acide acétique.

vw avec une solution de chlorure de sodium à S p. 100 (afin que les gouttelettes d'eau qui se condensent pendant la saignée sur les parois froides des gobelets, se chargent d'assez de sel pour ne pas dissoudre de globules, au moment où elles se mélangent au sang). Les gobelets, remplis jusqu'au bord, sont laissés au repos à l'abattoir pendant 24 à 36 heures. Dès le lendemain, le sérum clair peut être recueilli, à la surface, dans chaque gobelet, au moyen d'une pipette.

A défaut de sérum, on pourrait employer le blanc d'œuf convenablement divisé au moyen de ciseaux, dilué avec un égal volume d'eau légèrement salée, et filtré.

(1) La fibrine est obtenue à l'abattoir, par le battage du sang de porc. On la malaxe sous un courant d'eau, jusqu'à ce qu'elle soit à peu près blanche. Elle peut être conservée dans la glycérine : au moment de s'en servir, on la débarrasse de la glycérine, par le lavage à l'eau.

c est acidulé légèrement par addition d'une à deux gouttes d'acide acétique dilué (1 : 5), puis soumis à l'ébullition : formation d'un précipité qui se rassemble, au bout de quelques instants, en flocons nageant dans un liquide clair ou légèrement opalescent.

Si vous ajoutez trop d'acide (5 à 10 gouttes ou davantage), l'albumine ne se coagule plus par la chaleur, mais se transforme en albumine acide, qui reste en solution. Il suffit alors de neutraliser le liquide par la soude, versée goutte à goutte, pour précipiter l'albumine acide : ce précipité se redissout dans un excès de soude.

Prenez deux flocons de fibrine pareils ; soumettez l'un à l'action de l'eau bouillante : il prend une teinte grisâtre, devient opaque, et perd une partie de son élasticité ; il n'a plus aucune action sur l'eau oxygénée; tandis que le flocon non bouilli se couvre de bulles d'oxygène, quand on le plonge dans l'eau oxygénée.

4. Coagulation par l'alcool. — Le sérum dilué (2 ce. 72) est additionné d'alcool versé goulte à goutte (1/2 à 1 ce. par exemple), jusqu'à ce qu'il se forme un précipité blanc à la partie supérieure du liquide. Au début, l'albumine est simplement précipitée (non coagulée) ; agitez vivement le liquide : le trouble se redissout complètement. Ajoutez ensuite un grand excès d'alcool (2 volumes au moins) : le précipité reparaît et persiste, même après dilution ultérieure par l'eau.

5. Coagulation par les acides minéraux. — 2 ce Va de sérum dilué sont additionnés de 10 à 20 gouttes d'acide chlorhydrique : il se forme un précipité d'albumine coagulée. Ajoutez un excès d'acide chlorhydrique (2 ce. Yî)? et faites bouillir le liquide : le précipité se redissout.

Dans les mêmes conditions, l'albumine de l'œuf, précipitée par HCI3, ne se redissout pas ou se redissout avec difficulté.

6. Réaction xantho-protéique. — 2 ce 72 de sérum dilué sont additionnés de 10 à 15 gouttes d'acide nitrique, puis soumis à l'ébullition : il se forme un coagulum qui se colore en jaune. Laissez refroidir (en agitant l'extrémité fermée du tube sous un filet d'eau froide), et ajoutez de la soude caustique, jusqu'à ce

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que le liquide et le coagulum prennent une belle couleur brun orangé.

Un llocon de fibrine se colore pareillement en jaune, puis en brun orangé quand vous le faites bouillir avec de l'eau et de l'acide nitrique, et que vous saturez (après refroidissement) par la soude caustique.

Il en est de môme de plusieurs dérivés des matières albuminoïdes. Répétez l'essai avec une rognure d'ongle (matière cornée, kératine).

7. Réaction de Millon. — 2 ce. Va de sérum dilué sont additionnés de liqueur de Millon (1 ce.) ; il se forme un trouble ou un précipité blanc qui, par l'ébullition, se rassemble en grumeaux roses, puis bruns rougeâtres.

Répétez l'essai avec un flocon de fibrine, suspendu dans un peu d'eau : il se colore en rouge, puis en brun, par l'ébuUition en présence de la liqueur de Millon. Si la liqueur n'est pas diluée, il n'est pas nécessaire de cliaufl"er.

La liqueur de Millon non diluée colore également à froid, en moins d'une minute, la peau ou les ongles (matière cornée) en rouge foncé. Déposez une goutte de liqueur de Millon sur la paume de la main : il se forme une tache qui persistera pensant plusieurs jours.

La réaction de Millon est caractéristique des phénols et de tous

// = les corps renfermant le groupe (OH) fixé sur le noyau C G

du benzol. Versez quelques gouttes de liqueur de Millon dans 2 ce Va d'eau phéniquée (eau saturée de phénol); le liquide se colore en rouge par l'ébuUition. Si l'on ajoute beaucoup de liqueur de Millon (un égal volume), la coloration rouge se montre immédiatement, sans qu'il soit nécessaire de chauffer. 8. Réaction par le ferro-cyanure de potassium. — Le sérum dilué (2 ce 72) 6st acidulé par l'acide acétique (1 ce d'acide dilué 1 : 5), puis additionné de quelques gouttes (1 ce. au plus) de solution de ferro-cyanure de potassium : précipité blanc. Ajoutez un excès de ferro-cyauure : le précipité se redissout.

Cette réaction est commune aux matières albuminoïdes naturelles, aux albumines acides ou alcalines et à la propeptone, mais n'appartient pas à la peptone.

9. Réaction du biuret. — Le sérum dilué (2 ce. Ya) est mélangé avec un égal volume de soude, puis additionné de 2 à 4 gouttes au plus d'une solution diluée (1 : 20) de sulfate de cuivre. Il se forme une liqueur d'un bleu violet, qui, portée à l'ébullition, vire légèrement au violet ou au rose violacé. La teinte rose violacée sera plus marquée, si vous faites bouillir le mélange d'albumine et de soude avant d'y ajouter le sulfate de cuivre.

Plongez un flocon de fibrine pendant une à deux minutes dans la solution de sulfate de cuivre, puis lavez-le rapidement à l'eau. Portée dans la solution de soude, cette fibrine prend une belle coloration violette. Faites bouillir le liquide : la coloration vire au rose ; la fibrine se désagrège et se dissout.

La peptone, la propeptone, le biuret, et plusieurs substances ayant une constitution moléculaire analogue à celle du biuret, donnent déjà à froid, avec le sulfate de cuivre et la soude, la coloration rose vineuse.

Une pincée de peptone commerciale (peptone de Witte ou autre), dissoute dans quelques gouttes d'eau, peut servir à cet essai.

Évitez d'employer un excès de sulfate de cuivre. Le sulfate de cuivre donne par la soude un précipité (ou une coloration) bleu d'hydrate cuivrique, qui noircit par l'ébullition (formation d'oxyde cuivrique noir). Exécutez cette réaction.

10. Précipitation par les sels des métaux pesants, par le tannin, par l'acide picrique, etc. — Le sérum dilué donne un abondant précipité, quand on y verse quelques gouttes de solution de bichlorure de mercure, d'acétate de plomb, de sulfate de cuivre, etc. Quelques-uns de ces précipités sont solubles dans un excès de réactif.

Esbacli a basé sur la précipitation de l'albumine par l'acide picrique (solution 1 : 100), un procédé d'évaluation clinique de la quantité d'albumine contenue dans les urines pathologiques. (Voir plus loin au chapitre de l'urine.)

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Pour l'action du suc gastrique sur les matières albuminoïdes, voir au cliapitre de la digestion.

11. L'albumine ne diffuse pas. — Une partie (un tiers, par exemple) de la solution d'albumine saturée de sulfate de magnésium, ayant servi à préparer la paraglobuline (voir plus loin n° 14, p. 89), est versée par un petit entonnoir, dans un boyau (1) de papier parchemin, replié en U (fig. 68). Le boyau est suspendu au moyen d'une ^=^I^0

baguette de verre horizontale, comme le montre [h |-( jj

la figure 68, dans un gobelet renfermant de l'eau de la ville (eau ne contenant que des traces de sulfates). Attendez une heure au moins, puis prélevez, au moyen d'une pipette, un échantillon de l'eau extérieure au dialyseur. Fig. 68. — Dialy-

Cette eau donne les réactions des sulfates et ^g boyau. du magnésium, mais non celles de l'albumine : précipité abondant par le chlorure de baryum, précipité par l'ammoniaque et le phosphate ammonique (précipité ne se formant pas toujours immédiatement); absence de précipité par l'ébullition en présence de l'acide acétique dilué; absence de précipité par le ferro-cyanure de potassium et l'acide chlorhydrique; pas de réaction xantho-protéique^ par de réaction du biuret, etc.

La réaction de Millon ne pourrait servir à rechercher l'albumine que si le sulfate de magnésium avait été remplacé ici par le chlorure de sodium : en effet, le réactif de Millon précipite en jaune (sulfate basique de mercure) par le sulfate de magnésium.

12. Les matières albuminoïdes sont lévogyres. — Le polarimètre Laurent (fig. 66 et 69), est installé dans un local peu éclairé (ou dans la chambre obscure). La lumière monochromatique jaune est fournie par un chalumeau à gaz (actionné par

(1) Vérifiez au préalable si le boyau ne présente pas de trous. A cet effet, vous y verserez de l'eau : une goutte d'eau suintant à la surface du parchemin, indique un défaut. On peut badigeonner le trou avec une solution d'albumine et y passer ensuite unfer chaud. Il vaut encore mieux rejeter le boyau qui présenterait un trou, et le remplacer par un autre parfaitement étanche : leur prix est fort minime. Ils se fabriquent en grand à EUwagen dans le Wurtemberg {kunstliche Wurstdarm Fabrik).

Fig. G9.

Schéma du polarimètre Laurent.

une trompe de Muencke), chauffant du sel marin fondu, renfermé dans une petite cuiller en platine (fig. 69, c) : la lumière est plus belle que celle des brûleurs ordinaires de l'appareil. Cherchez à mettre l'appareil au zéro, en tournant le bouton (placé à droite, à la périphérie du grand cercle gradué) qui

fait mouvoir l'oculaire analyseur (o), jusqu'à ce que le champ circulaire, que vous apercevez par l'oculaire, vous paraisse uniformément éclairé.

Vérifiez si votre détermination est exacte : le zéro du vernier doit correspondre au zéro de la partie la plus élevée du cercle gradué fixe. Introduisez dans l'appareil un tube de 10 centimètres (^), rempli d'une solution de paraglobuline (2 à 6 p. 100) dans l'eau et le sulfate de magnésium (paraglobuline du sérum de bœuf, précipitée deux fois parle sulfate de magnésium. — Voir plus loin n° 14). Le champ circulaire est à présent divisé en deux moitiés inégalement éclairées, une moitié droite lumineuse, une moitié gauche obscure. Rétablissez l'égalité d'éclairage, en tournant l'oculaire de droite à gauche, de manière à suivre la rotation exercée par la paraglobuline ; lisez sur le cercle gradué la valeur de la rotation compensatrice, en vous servant du vernier (dont chaque

. 1° division correspond à une minute, soit -^ = 0°,166...).

Exemple : Une solution de paraglobuline examinée dans le tube de 10 centimètres produit une déviation de l^iS', soit en fraction décimale 1°,25. Le pouvoir rotatoire de la paraglobuline a [D] étante — 47°8 (c'est-à-dire que la solution à 1 p. 100, considérée sous une épaisseur de 10 centimètres, dévie de 0%478), il suffit de diviser 1°,23 par 0,478 = 2,6, pour avoir la quantité en poids de paraglobuline contenue dans 100 ce. de liquide. Le liquide en contient 2,6 p. 100.

LE SANG ET LES MATIÈRES ALBUMINOIDES

Sémum de Bf*:L"i\

Fig. 70.— Aréomètre ou pèse-urine.

13. Couleur, odeur, saveur, alcalinité, densité du sérum de bœuf. — L'odeur musquée du sérum s'exagère quand on y verse une goutte d'acide.

Une bande de papier de tournesol rouge, plongée dans le sérum, bleuit fortement.

Remplissez (aux 4/5) de sérum un petit vase cylindrique et plongez-y un aéromètre ou pèse-urine, gradué de 1000 à 1060 : le liquide affleure vers le trait 1029.

14. Paraglobuline. — Ancienne méthode de préparation. Diluez 10 ce. de sérum de bœuf dans un gobelet avec vingt fois son volume d'eau distillée ; ajoutez goutte à goutte de l'acide acétique au 5^ Les premières gouttes d'acide font apparaître un précipité de paraglobuline; si vous ajoutez un peu plus d'acide, le précipité se redissout. Ce procédé ne fovirnit qu'une faible

partie de la paraglobuline contenue dans le sérum : aussi est-il abandonné.

Préparation par MgSO' [méthode de Denis et de Hammarsten) 30 ce. de sérum sont saturés dans un gobelet avec du sulfate de magnésium en petits cristaux.

Ajoutez d'emblée assez de cristaux, pour que le sulfate occupe dans le fond du gobelet un peu moins de la moitié de la hauteur totale du mélange de sérum et de sulfate. Agitez pendant plusieurs minutes avec une cuiller en corne: ajoutez, s'il y a lieu, par petites portions, de nouvelles quantités de sulfate, tant que le sel se dissout, c'est-à-dire jusqu'à saturation complète.

Jetez le liquide avec le précipité de paraglobuline sur un filtre à plis, en laissant au fond du gobelet les cristaux non dissous de sulfate. La filtration demande plusieurs heures; il est bon de laisser égoutter le précipité sur le filtre pendant un jour ou deux.

Enlevez le filtre de l'entonnoir, ouvrez-le complètement, et étalez-le à plat sur une plaque de verre, le précipité de paraglo-

buline tourné vers le haut. Pliez le filtre en deux, glissez-le entre plusieurs doubles de papier à filtrer, et placez dessus la plaque de verre et un corps médiocrement pesant, faisant office de presse. Au bout d'un quart d'heure, d'une demi-heure..., le filtre est suffisamment sec pour que le papier se détache de la paraglobuline, et que le gâteau jaunâtre de paraglobuline puisse être plié sur lui-même en 2, en 4, en 8, et finalement ramassé en une seule masse pâteuse. Une partie de cette pâte est délayée dans un peu d'eau (50 à 100 ce. dans un gobelet), au moyen d'une baguette de verre; la paraglobuline se redissout complètement, grâce au sulfate de magnésium qui l'imprègne. La solution est filtrée, puis réprécitée par MgSO^ : cette fois, le précipité est presque incolore.

Recueillez-le, dissolvez-en une partie, pour l'examen au polarimètre (voir n° 12), et, s'il y a lieu, pour répéter quelquesunes des réactions des matières albuminoïdes.

Une autre partie du précipité peut être abandonnée à la dessiccation spontanée sur le filtre ; puis recueillie sous forme d'une masse d'un blanc grisâtre, que l'on réduit facilement en poudre. Placez cette poudre dans un tube, avec l'étiquette : paraglobuline de bœuf -+- MgSO'\

Pour éliminer MgSO\ il suffirait de soumettre à la dialyse, la pâte détachée du filtre. Au bout de deux à trois jours, la paraglobuline serait recueillie au fond du dialyseur, sous forme de grumeaux insolubles dans l'eau distillée.

15. Albumine. — Le sérum, privé de paraglobuline par MgSO\ contient l'albumine. Mettez de côté le tiers du liquide pour exécuter l'expérience de dialyse indiquée au n" 11. Les deux tiers restants sont mesurés dans un cylindre gradué, et additionnés de quelques gouttes d'acide acétique non dilué (1 p.100 du volume de la solution d'albumine) : l'albumine se précipite. Jetez-la sur un filtre à plis ; vous la recueillerez le lendemain ou le surlendemain, sous forme d'une pâte jaunâtre. On peut purifier par redissolution et reprécipitation par MgSO* et acide acétique; mais il vaut mieux précipiter la seconde fois, en saturant le liquide de sulfate ammonique; le précipité séché est recueilli et conservé dans un tube, avec l'étiquette : albumine -]- MgSO\ ou albumine + [NH'^f S0\ suivant le cas.

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16. Sels et sucre du sérum. — Faites bouillir dans une capsule 40 ce. d'eau avec 10 ce. d'une solution saturée de NaCl (ou de MgSO''), et deux goultes d'acide acétique; versez-y goutte à goutte, au moyen d'une pipette, 10 ce. de sérum, en ayant soin d'agiter avec une baguette. Filtrez sur un filtre à plis. Recherchez, dans le liquide filtré, les :

Chlorures, par le nitrate d'argent;

Sulfates, par le chlorure de baryum;

Phosphates, par l'ammoniaque et le sulfate de magnésium.

La recherche du chlore ne peut évidemment se faire que si on n'a pas employé NaCl; celle des sulfates, que si on n'a pas employé MgSO*.

Recherchez le sucre par NaHO et quelques gouttes de CuSO* ; faites bouillir : précipité rouge d'oxyde cuivreux. Voyez plus loin, au chapitre de la digestion, les procédés pour la recherche du sucre.

n. Ferment de la fibrine. — Introduisez dans un petit matras 5 à 10 centimètres cubes de sérum, ou o à 10 c. c de sang exprimé d'un caillot. Ajoutez SO à 100 c. c. d'alcool, bouchez et mettez de côté. Au bout d'une, ou mieux de plusieurs semaines, vous recueillerez le coagulum sur un petit filtre, le laisserez sécher par évaporation spontanée de l'alcool, et le pilerez dans un mortier avec S à 1 0 c c. d'eau ; filtrez et recueillez le liquide. C'est une solution de ferment, qui sera utilisée dans les expériences de coagulation du fibrinogène. (Voirn°' 22 et 23.)