III. — Plasma sanguin et coagulation du sang

18. Expériences sur la coagulation du sang. — Un grand chien (10 à 15 kilos au moins), anesthésié[) par la morphine (30 à 50 centigr. de chlorhydrate de morphine en injection souscutanée), est attaché sur le dos, dans la gouttière de Claude Bernard. Les deux jugulaires externes A et B sont mises à nu, isolées avec précaution, liées aux deux extrémités par des ligatures doubles, extraites, et suspendues verticalement. Dans l'une A, on glisse un stylet de verre (corps étranger), obtenu en étirant une baguette de verre dans le flamme du brûleur de Bunsen ; l'autre B, est abandonnée au repos. Au bout d'une heure, on

ouvre A au moyen de ciseaux : on y trouve un caillot entourant le stylet. Au bout de plusieurs heures, on observe par transparence dans la veine B, la séparation du sang en plasma jaune clair, surnageant, et en globules, formant une couche profonde rouge sombre. En ouvrant la veine, on constate que le sang qu'elle contient est resté liquide ; le plasma qu'on en extrait ne tarde pas à se coaguler spontanément.

Une artère carotide est mise à nu : on lie le bout périphérique, et on introduit dans le bout central, une canule à laquelle fait suite un tube de caoutchouc. On saigne l'animal.

Chaque élève reçoit : 1° un échantillon de sang (20 à 30 c. c.) pour faire un dosage de fibrine (voir n° 19); et 2° un échantillon plus petit (une goutte), dans un tube de verre presque capillaire, effilé aux deux bouts (et scellé ensuite), afin d'observer ultérieurement la formation du sérum, et la rétraction du caillot.

Une goutte de sang, déposée sur une plaque porte-objet, et couverte d'une lamelle, sert pour l'examen microscopique.

D'autres échantillons de sang sont reçus respectivement :

a) Dans un gobelet de verre, sans aucune addition. Au bout de 6 à 12 minutes, le sang est pris en gelée cohérente : le gobelet peut être retourné, sans que le caillot se détache. Quelques gouttelettes de sérum ne tardent pas à se montrer à la surface du caillot, qui se détache du verre, et continue à se rétracter.

b) Dans un petit matras (exactement rempli) : observez ultérieurement la rétraction du caillot moulé sur le vase.

c) Dans des tubes de métal, entourés de glace (saupoudrée de quelques grains de sel); le sang, refroidi rapidement à 0% reste liquide, mais se prend en gelée dès qu'on le réchauffe.

6<^)Dans un gobelet contenant delà solution saturée de MgSO^ (le tiers du volume de sang à recevoir.) Le sang ne se coagule pas ; on attend le dépôt des globules (que l'on accélère par l'emploi de la machine à force centrifuge), pour recueillir le plasma surnageant. Il peut servir à répéter les expériences des n"' 20, 21 et 22.

e) Dans une infusion de sangsue (sangsue tuée par le chloroforme, pilée avec quelques centimètres cubes d'une solution de NaCl à op. 100)..

/) A l'abri de l'air, dans un tube renversé sur la cuve à mer-

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cure et rempli lui -même do mercure. La coagulation est légèrement retardée.

19. Dosage de la fibrine. — Pesez, au décigramme près (sur une balance ordinaire), un appareil à défibriner de lloppe- Seyler (très petit gobelet recouvert d'une chape en caoutchouc, traversée par la baguette de baleine servant à défibriner — fig. 71); notez le poids. Recevez dans cet appareil, 20 à 30 ce. de sang (voir n" 18), remettez la chape en caoutchouc et défibrinez pendant dix minutes. Pesez à nouveau, pour avoir le poids du sang. La fibrine est recueillie sur la baleine et lavée à l'eau : malaxez jusqu'à ce que le flocon n'ait plus qu'une teinte rosée. Re- Fig. 7 1. — Appacueillez pareillement les flocons qui pourraient ^^^^ ^ défibn-

i^ i i ner de Hoppe

ne pas s'être attachés à la baleine, et flotteraient Seyier. dans le liquide. A cet effet, diluez le sang, par petites portions avec une grande quantité de solution de chlorure de sodium (1) à 1 p. 100 (une partie de solution saturée de NaCl pour 30 parties au moins d'eau). Une partie de ce mélange de sang défibriné et de solution de chlorure sodique, est abandonnée au repos dans une grande capsule, pour permettre aux globules de se déposer (voir plus loin n" 23).

Réglez la température de l'étuve, de manière qu'elle soit comprise entre 110 et 125° ; placez-y pendant une dizaine de minutes, d'une part, deux verres de montre avec leur ressort, d'autre part, un petit filtre exempt de cendres. Au bout de dix minutes, vous retirez le tout de l'étuve, vous introduisez le filtre entre les deux verres de montre, vous appliquez ceux-ci l'un contre l'autre, au moyen de la pince à ressort, et laissez refroidir complètement dans l'exsiccateur. Pesez, au milligramme près, sur une balance de précision.

Rappelez-vous que, dans ces pesées, l'objet à peser se place sur le plateau gauche de la balance, et les poids, que l'on manie au moyen d'une pince, sur le plateau droit; que la balance doit être arrêtée chaque fois que l'on enlève ou que l'on dépose

(1) Il vaut mieux diluer le sang avec de Feau; mais alors on ne peut plus employer le mélange pour en séparer les globules par décantation, comme cela est indiqué au n" 23.

un nouveau poids ; que le cavalier (fig\ 72), placé sur le fléau de la balance, sert à remplacer les milligrammes (les poids servent pour les grammes, décigrammes et centigrammes); que chaque division du fléau correspond à un milligramme, dans la manœuvre du cavalier, etc. (voir p. 69).

A Notez le poids.

Placez le filtre taré sur un petit entonnoir; déposez-y le flocon de fibrine enlevé de la baguette, Ki -2 — c - ^^ ceux que vous auriez pu recueillir dans le sang vaiier. défibriiié; lavez à l'eau distillée, à l'alcool, puis

à Téther.

Enlevez filtre et fibrine, pliez et déposez dans l'étuve sur les verres de montre; séchez h -h 110° pendant au moins trois à six heures. Quand la dessiccation est terminée, introduisez le filtre entre les verres de montre, refermez, laissez refroidir dans l'exsiccateur, et pesez. L'augmentation de poids représente le poids de la fibrine et des sels insolubles.

Pour avoir le poids des sels insolubles, incinérez filtre et fibrine dans un petit creuset ouvert (voir fig. 81, n° 32), placé sur un triangle. Couvrez le creuset, laissez-le refroidir dans l'exsiccateur, et pesez avec les cendres; puis pesez de nouveau après en avoir retiré les cendres.

20. Coagulation du plasma sanguin au MgSO' (1). — Diluez 5 ce. de plasma de cheval au sulfate de magnésium, avec 20 volumes d'eau. Yersez le mélange par portions à peu près égales, dans huit tubes à réaction «,«', 6, //,c,c',(f,(i'. Ajoutez quelques gouttes de sérum incolore h b et b\ quelques

(I) Procédé pour obtenir du plasma de cheval au MgSO'\ — On porte à l'abattoir un grand bocal cylindrique renfermant (jusqu'au cinquième de sa hauteur) de la solution saturée de IVIgSO'-^; on achève de le remplir avec du sang de cheval (sortant de la veine ou du cœur), jusqu'aux 4/5 de sa hauteur; on mélange. On laisse reposer pendant deux jours; ou mieux, on introduit le liquide dans l'appareil à force centrifuge, qui sépare les globules en quelques minutes. On recueille au moyen d'une pipette le plasma surnageant. Si le sang a été reçu directement de la veine dans le sulfate de magnésium, le plasma ne contient que peu de ferment, ou même pas du tout; et les préparations a et a' du n° 20 n'ont que peu de tendance à se coaguler. Si le sang a été reçu d'abord dans un autre vase, puis versé dans la solution saline, le plasma contient du ferment et se coagule quand on le dilue avec beaucoup d'eau.

LE SANG ET LES MATIERES ALBUMINOIDES

gouttes de sang exprimé du caillot à c et c', quelques gouttes de ferment de la fibrine h d ei d' . Chauffez «, Z», c, d, au bain d'eau à +40° (gobelet plein d'eau, chauffé au bain-marie, — voir fig. 73, n" 22) ; abandonnez a' ,b\c' ,d' , à la température ordinaire. Notez le moment où la coagulation spontanée envahit chacun des tubes.

Les tubes c et d se coagulent les premiers.

21. Préparation du fibrinogène. — Saturez dans un gobelet, 50 centimètres cubes de plasma de cheval au sulfate de magnésium, avec du chlorure de sodium en poudre : il se forme un abondant précipité crémeux (mélange de fibrinogène et de paraglobuline); recueillez-le sur un filtre à plis (la filtration dure plusieurs heures). Exprimez filtre et précipité, entre plusieurs doubles de papier à filtre. Redissolvez le précipité dans 100 centimètres cubes d'eau; filtrez, si le liquide est trouble. Des échantillons de ce liquide sont abandonnés à eux-mêmes; d'autres sont additionnés de sérum ou de ferment; soumettez les uns à la température ordinaire,

les autres à -|- 40°. Notez le moment de la coagulation de la fibrine, dans chacun de ces échantillons.

22. Détermination de la température de coagulation du fibrinogène. — Une partie de la solution de fibrinogène obtenue au n° 21 (10 centimètres cubes), additionnée du quart de son volume de solution saturée de MgSO*, est placée dans un tube à réaction, et chauffée graduellement dans un gobelet rempli d'eau chauffé au bain-marie), à côté d'un thermomètre (fig. 73). Un précipité floconneux se forme vers -|-o6° (fibrinogène); chauffez jusque vers -h 58° à 60°, et filtrez sur un petit filtre; remettez le tube contenant le liquide filtré dans le bain d'eau, et continuez à chauffer.

Fig. 73. — Appareil pour déterminer la température de coagulation des albuminoïdes.

Un second précipité floconneux (paraglobuline) se montre vers --[-75°.