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Pour établir l'échelle colorimétrique, mesurer exactement, dans des tubes en verre neutre bien calibrés, 10 cc. de chaque solution et ajouter 1 cc. de solution d’indicateur à 0,01 % (solutions mères diluées une fois). Faire une série pour chaque indicateur dans les limites de son virage indiquées au tableau 2. On opère en tubes préalablement étirés et on scelle à la lampe après remplissage.

Pour déterminer le pH d’une solution quelconque, on essayera la réaction de cette solution sur les huit indicateurs. On mesure exactement 10 cc. de la solution dans 8 tubes différents ; à chaque tube on ajoute 1 ce. de solution à 0,01 % d’un des Mate

Pour des pH 1,2 à 9,8, les tubes seront hors série avec certains indicateurs, mais il en restera au moins un qui présentera une teinte pouvant se classer dans une des séries de tubes étalons. On peut utiliser, pour finir la détermination, le petit comparateur dont il sera question à propos de l'ajustement des milieux à un pH donné. L'emploi

de cet appareil est indispensable dans le cas d’une solution colorée par elle-même.

2° Echelles pH 6,6 à pH 8. — En général, en biologie (détermination de la concentration en ions H+ de liquides organiques, ajustement d’un milieu de culture à pH déterminé, etc.), on pourra opérer avec une échelle d’étalons bien moins étendue. La phénolsulfonephtaléine sera le seul indicateur employé.

1re Formule. — Un mélange simple de phosphates sert à préparer les étalons.

On préparera :

a. Solution N/5 phosphate monopotassique :

9 gr. 078 de sel recristallisé, séché à 100 à poids constant, sont dissous dans 500 cc d'eau ; on ajoute 45 cc. 5de solution d’indicateur (phénolsulfonephtaléine) à 0,02 % et on complète à 1 000 dans une fiole jaugée, avec de l’eau distillée. |

b. Solution N/5 phosphate disodique :

Le sel commercial pur est à 12 H?0 ; on l’effleurit en couche mince à température ordinaire (18-20°) à poids constant; l'opération demande 8 à 15 jours. On obtient le sel POIN2H+2H°0.

11 gr. 876 de ce sel sont dissous dans 500 cc. d’eau ; on ajoute 45 cc. 5 de solution de phénolsulfonephtaléine à 0,02 % et on complète à 1.000 cc. avec de l’eau.

A l'aide des deux solutions précédentes, on prépare, dans une fiole jaugée de 100 cc., la série suivante d'étalons (SÜRENSEN) :

Composition des mélanges de phosphates donnant des solutions de pH 6,6 à pH 8 de 0,1 en 0,1.

TABLEAU IV 38 ce. PO#HNa? N/15 amenés à 100 cc. avec la solution N/15 de PO*HK? — pH 6,6 43,5 » » » » — pILG 49,5 » » » » — pH 6,8 99,5 » » » » — pois ARS 61,0 » » » » pH: 0) 66,5 » » » » — phil 72,0 » » » » =.ph 7,2

MICROBIOLOGIE

76,5 » » » ) DEL 80,5 » » » » — pH 7,4 84,0 » » D » = DEIS 86,5 » » » » — pli,0 89,0 » » » » 0 0 n YU 91.3 » » » » DATES 93,0 » » » » le NT) 94,5 » » » » — pH 8,0 2° Formule. — Une autre formule permet d'obtenir des

solutions étalons de même ordre ; on emploie alors seulement le phosphate mono-potassique et la soude titrée.

A. Solution de PO*ÆK N/5 : peser 13 gr. 613 de sel recristallisé, séché à 100° à poids constant, les dissoudre dans 300 cc. d’eau chaude. Refroïdir, ajouter 91 cc. de solution de phénolsulfonephtaléine à 0,02 %. Amener à 500 cc. dans une fiole jaugée avec de l’eau.

B. Solution de soude N/10 exactement titrée sur un acide de titre connu (conserver à l’abri de CO?). On n’ajoute pas” d'indicateur à la solution B.

Avec ces deux solutions on fait les mélanges suivants dans une fiole jaugée de 100 cc. :

Mélanges de PO‘H?K et de soude donnant des solutions PH 6,6 à pH 8 de 0,2 en 0,2.

TABLEAU V Sozuriox N/5 PO‘H?K Soupe N/10. AMENER AYEC DE L'Eau A PH 25 ce. 17 cc. 80 100 cc. ,6 25 cc. 23,65 100 cc. 6,8 25 ce. 29,63 100 cc. 7,0 25 cc. 35,00 100 cc. fée.

25 cc. 39,50 100 cc. 134 2rcc: 42,80 10) cc. 7.6 25 ce 45,20 100 cc. 180 25 ce. 46,80 100 cc. 8,0

Que l’on emploie l’une ou l’autre formule de phosphates, les solutions étant faites, on remplit des divers mélanges une série de tubes étirés, en verre neutre ; on les scelle à la lampe et on indique sur chaque tube le pH correspondant.

Les gammes d’étalons se conservent longtemps si on les garde à l'abri de la lumière.

Pour la détermination du pH dans une solution

quelconque dans les limites de 6,6 à 8, mesurer exactement 10 cc. de la solution et ajouter 1 ce. de solution à 0,01 % de phénolsulfonephtaléine. Chercher sa place dans l'échelle étalon. Opérer avec le comparateur décrit cidessous dans le cas d’un liquide dont la coloration propre peut masquer ou modifier la teinte de l'indicateur.

Ajustement de la réaction d’un milieu de culture. — Pour l'ajustement de la réaction d’un milieu de culture à un pH donné, on se trouve dans le cas d'un liquide dont la teinte plus ou moins jaune brun (bouillons, infusions, etc.) peut modifier la teinte de l’indicateur.

On opérerasur les milieux froids et on utilisera le comparateur. Ce petit appareil est un simple bloc de bois percé, à la face supérieure, de six trous en 3 rangs de deux, au calibre des tubes à essai employés ; les tubes à essai entrent de la moitié de leur longueur dans le bloc de bois, comme dans un porte-tube ordinaire. Deux des faces latérales sont pleines, les deux autres sont percées de trois fenêtres qui donnent la lumière au travers des trois rangs de deux tubes. On dispose pour chaque essai les tubes dans l’ordre suivant :

Fenêtre n £ I Il II " Etalon Eau pure Etalon es e : pH <pH à obtenir pH> pH à obtenir à £ 2 IV V VI Re = Milieu Milieu Milieu S sans indicateur à ajuster sans indicateur = + indicateur = @le,

Observateur

Dans ces conditions, le changement de teinte propre à la coloration du milieu se trouve compensé du fait de la présence du milieu dans les trois champs de vision.

On ajoute au tube V, qui renferme 5 cc. de milieu exactement mesuré, 0 cc. 5 d indicateur (phénolsulfonephtaléine) à 0,01 %..Avec une microburette (pipette de 1 à 2 cc. divisée en dixièmes et munie d’un petit tube de caoutchouc avec une pince à pression), on laisse tomber, dans ce tube,

une solution de soude N/20 jusqu’à ce qu’on obtienne une teinte intermédiaire entre celles des deux étalons I et IT vus au travers des tubes de milieu IV et VI.

La solution de soude N/20 à employer s’obtienten mélangeant 500 cc. de soude N/10 avec 91 cc. de phénolsulfonephtaléine à 0,01 % et complétant à 1.000 avec de l’eau.

Connaissant le volume n dela solution de soude N/20 nécessaire pour amener 5 cc. du milieu à la réaction voulue, le nombre de centimètres cubes æde solution N de soude à ajouter à 1 litre de milieu pour l’amener au pH cherché sera

Par un petit dosage analogue, on pourra déterminer la quantité d'acide produite par fermentation sur un milieu de pH connu au départ de la culture. Il sera bon de centrifuger dans ce cas pour avoir un liquide clair.

Les sucres s’altèrent au cours de la stérilisation des milieux par chauffage, surtout lorsque leur réaction est alcaline, et ils modifient le pH. Il convient de les stériliser à part, en solution aqueuse, et de ne les ajouter aux milieux qu'après le chauffage définitif à l’autoclave.