TECHNIQUES SPÉCIALES A QUELQUES MICROBES PATHOGÈNES
A. — Bacille pyocyanique (Gessard).
Très polymorphe. Mobile, 1 seul cil. Non sporulé.
COLORATION. — Par toutes les couleurs basiques. Ne prend pas le Gram.
CuLTURE. — Température opt. 20-38. pH limites : 5,6- 8,0 ; pH optimum 6,6-7,0. Fe
Se développe bien sur tous les milieux usuels peptonés. Sur gétatine, donne des colonies bleu verdâtre, fluorescentes, lentement liquéfiantes. Sur gélose, il forme un pigment vert bleuâtre qui pénètre peu à peu toute la masse, brunit en vieillissant et donne naissance à des cristaux en forme d’aiguilles.
Il pousse abondamment sur bouillon alcalin en formant, à la surface, une membrane mucilagineuse qui s’épaissit peu à peu et reste flottante dans la masse liquide. Il y développe une odeur aromatique assez intense, rappelant celle des fleurs de jasmin ou de tilleul. A la longue, le milieu brunit et les bacilles s’autolysent. Cette autolyse se continue et s'achève si l’on ajoute au bouillon, du chloroforme ou du toluol.
Le lait est coagulé et bientôt le coagulum est digéré, dissous et peptonisé.
Le b pyocyanique acidifie les milieux glucosés mais ne les fermente pas. Il est très fortement dénitrifiant, décomposeles nitrates et aussi les nitrites en dégageant de l’azote.
Le milieu de culture proposé par Gessard convient le mieux à l'étude des propriétés très curieuses de ce microbe:
Gélose hachée en petits morceaux. . . . 12 gr 50 MEDIONB RS D us ct RS UE 5 gr.
ÉCRRRRR E s CUrRe :: 250 ce,
Glycérine PROMO R PA MMS L Pr Tori 10 gr.
On dissout la peptone dans l’eau chaude, on ajoute la glycérine puis la gélose. On fait fondre à 100° dans l’autoclave non boulonné et on répartit en tubes, sans filtrer. Stériliser 30 minutes à 115° et laisser refroidir les tubes inclinés
Dans ce milieu le bacille produit avec intensité son pigment bleu et certaines variétés y produisent un pigment jaune verdâtre puis rouge vif (vin ou groseille), ou un pigment noir (variétés érythrogènes et var. mélanogènes).
Dans le blanc d'œuf pur, liquide ( prélevé aseptiquement par ponction de l'œuf à travers la chambre à air et réparti en tubes à essai stériles), il ne donne que du pigment vert fluorescent.
Le pigment bleu (pyocyanine) est soluble dans le chloroforme. On peut l’extraire en agitant, avec quelques gouttes de chloroforme, un tube de culture en bouillon peptoné. Le pigment vert fluorescent estinsoluble dans le chloroforme et dans l'alcool, soluble dans leau.
La pyoeyanine cristallise (par évaporation du chloroforme) en longues aiguilles bleues. Les acides dilués {(HCP la rougissent tandis que les substances réductrices (HS) la transforment en leucobase jaunâtre ; les alcalis la bleuissent de nouveau.
Les cultures de b. pyocyanique contiennent un ferment hpolytique très actif, une hémolysine thermostabilé liée à la présence de lipoïdes et qui n’est pas susceptible de jouer le rôle d’antigène, une catalase qui décompose l’eau oxygénée, un ferment trypsique, un ferment lab, une caséase, une invertine et un ferment bactériolytique.
Cet ensemble constitue la pyocyanase. Celle-ci dissout la gélatine, la fibrine, la caséine, le sérum coagulé, et l’albumine d'œuf. Elle dissout aussi les bactéridies charbonneuses et tue rapidement les bacilles diphtériques, les pneumocoques, les staphylocoques, les streptocoques, les vibrions cholériques et les bacilles de la dysenterie.
B. — Coqueluche (Bordet et Gengou).
Très petit bacille aérobie, intra ou extracellulaire, ne prenant pas le Gram, immobile.
Il prend difficilement les couleurs. Onle met cependant
