II. — SÉRUM ANTITÉTANIQUE
A. — Mesure du pouvoir préventif du sérum antitétanique.
On établit le plus simplement la valeur préventive d’un sérum antitétanique par la détermination de la quantité de sérum nécessaire pour immuniser | gramme de souris blanche contre une dose mortelle de toxine.
La toxine tétanique est habituellement d'une activité telle qu’il suffit d'en inoculer un centième de milligramme à une souris de 15 grammes pour la tuer en 4 jours. Un centimètre cube peut donc tuer 1.500.000 grammes de souris. On dit qu’une telle toxine a un pouvoir toxique de 1.500.000.
Il faut environ un cinq centième de centimètre cube (O cc. 005), souvent beaucoup moins, pour tuer un cobaye de 500 grammes en 2 à 3 jours.
La dose minima mortelle en 2 à 3 jours pour une souris étant connue, on cherche quelle quantité de sérum il faut injecter 12 ou 24 heures avant cette dose minima mortelle pour empêcher la mort.
On prend une série de souris pesant environ 15 grammes
et, à chacune d’elles, on injecte des doses progressivement croissantes de sérum convenablement dilué dans de l'eau physiologique stérile, de telle sorte que la quantité de liquide à injecter ne dépasse pas 1 centimètre cube.
Les sérums antitétaniques ont généralement une activité qui varie entre 10 millions et 1 milliard, c'est-à-dire qu'il suffit d'injecter un dix-millionième de sérum, parfois un milliardième, pour préserver 15 grammes de souris contre l’intoxication par la dose minima mortelle de toxine.
On fait donc les dilutions de telle sorte que la première souris reçoive, dans 1 centimètre cube de liquide, 0 cc. 000 000.1 de sérum, soit 1 centimètre cube de la VIIS dilution faite, en partant, pour la première, de 1 centimètre cube de sérum initial dans 9 centimètres cubes d’eau salée physiologique.
Une seconde souris reçoit une dose dix fois moindre, soit 1 centimètre cube de la VIII dilution, soit 0 cc. 000.000.01 de sérum. Et enfin une troisième souris reçoit une dose environ dix fois moindre, soit 1 centimètre cube d’une IX® dilution ou 0 cc. 000.000.001 de sérum.
Si la première et la seconde souris résistent ensuite à l'inoculation de la dose minima mortelle de toxine (0 cc. 000.01 par exemple), tandis que la troisième meurt après une période plus ou moins longue de paralysie, on dit que le sérum est actif au cent millionième de centimètre cube.
B. — Titrage du sérum antitétanique en unités antitoxiques d’après la méthode américaine :.
La méthode officiellement adoptée aux Etats-Unis (circulaire du 25 octobre 1902, n° 61, Treasury department) pour le titrage des sérums antitétaniques livrés au commerce est basée sur la définition suivante de l'unité antitoxique :
L'unité antitoxique représente dix fois la dose minima de sérum anlitélanique nécessaire pour neutraliser in vilro une dose L + représentant 100 doses minima mortelles d'une toxine
1, Voir en appendice : tables de dilution.
d'épreuve stable dont la dose minima mortelle tue en 96 heures un cobaye de 350 grammes.
La toxine tétanique étant d’activité très variable et beaucoup moins stable que la toxine diphtérique, on a préparé en grande quantité une s{andard-toxine, poudre sèche, que l'on conserve à l'obscurité et au froid, dans le vide, et parfaitement déshydratée par l'acide phosphorique. Dans ces conditions, sa toxicité ne varie sensiblement pas en l’espace de deux années.
On l’obtient en précipitant la toxine liquide (filtrée) par le sulfate d'ammoniaque.
La dose L + constante decettetoxine représentant 100doses minima mortelles est (calculée sur le poids sec) de 6 dixièmes de milligramme (0 gr. 0006).
Pour l'usage, on en dissout 0 gr. 1 dans 166 cc. 66 d’eau salée physiologique à 8,5 de NaCI pur par litre. Un centimètre cube de cette dilution contient exactement la dose L + c’est-à-dire 0 gr. 0006 (100 DMM).
On dilue ensuite le sérum à titrer et on en mélange des quantités progressivement croissantes à la même dose de toxine L +, Voici un schéma d'expérience à titre d’exem-
ple :
Injection sous-cutanée du mélange de Tr Résultats de l’inoculation Toxine
dose L +
Poids
des cobayes Sérum
Ka > <
De) Q oO n d
0,0006 {0 cc. 001 |mort en 2 jours 4 h.
» 0,0015 |mort en 4 jours 1 h.
0,002 |paralysie, survie 0,0025 [légère paralysie, survie 0,003 aucun malaise, survie
OUR CO NC bd
Le cobaye n° 2 qui a reçu Occ. 0015 de sérum est mort en 97 heures. Aux termes de la définition de l'unité antitoxique, cette dose contient un dixième d'unité 0,1, donc 1 centimètre cube de ce même sérum titre 66 unités. C’est généralement la teneur du sérum antitétanique livré par l’Institut Pasteur de Paris, lorsqu'on le titre par la méthode américaine avec la s/andard-toxine préparée par le
laboratoire d'hygiène de Treasury Department (Public Health
and Marine Hospital service of the United States, Washington, prCS:
