H. COLORATIONS VITALES

Certaines couleurs basiques d’aniline sont absorbables par les cellules vivantes lorsqu'elles sont solubles dans les lipoïdes qui entrent dans la constitution du protoplasma.

Les plus intéressantes à ce point de vue sont : Je bleu de méthylène et le rouge neutre.

Bleu de méthylène. Il faut employer le bleu médicinal pur français RAL, en solution à 0,5 p. 100 ou 1 p.100 dans l’eau salée physiologique.

Rouge neutre. Prend une couleur rouge écarlate en milieu acide. jaune ou rouge orange en milieu alcalin. On l'emploie en solution très diluée (1/2 à 1 centimètre cube de solution aqueuse saturée, dans 100 centimètres cubes d’eau salée physiologique).

Beaucoup de petits animaux aquatiques, et même des poissons, vivent très bien dans des solutions de rouge neutre à 1 p. 10.000 ou à 1 p. 100.000. Leurs tissus se colorent en rouge. Le protoplasma et le noyau des cellules restent inco-

lores. Le pigment est fixé par les granulations protoplasmiques.

a) Colorations des microbes vivants (pour étudier leur structure).

Méthode de Neisser : Colorer quelques secondes avec un mélange de 2 parties de la solution a et 1 partie de la solution b ci-après :

Solution a :

Bleu médicinal en poudre. . . . . . Legr:

Alcool it DOCS TR EP EP 20 cc.

Eau distillée. . OPEL EC 1.000 cc.

Acide acétique St aie PANIER 50 cc.

Solution b :

A1cO01:4 960 SN NET ER 10 ce.

Eau..distillée. MS CR RER 300 cc.

Laver à l’eau. Recolorer pendant 3 secondes avec une solution de chrysoïdine (colorant azoïque, chlorhydrate de diaminoazobenzène) : 2 grammes de chrysoïdine dissoute dans 300 centimètres cubes d’eau bouillante filtrée et refroidie. Laver encore à l’eau, sécher à l’étuve à 87° et examiner. Ou bien employer le bleu azur de Giemsa (1 goutte de solution glycérinée de bleu de Giemsa pour 1 centimètre cube d’eau distillée). Laisser agir 10 à 30 minutes la préparation tournée face en dessous, à la surface du bain colorant pour éviter les dépôts, laver à l'eau, sécher et examiner.

F. COLORATION: POST-VITAPE

Méthode de J. Sabrazès au bleu de toluidine phéniqué pour la cytologie et la bactérioscopie des crachats, du lait centrifugé, des dépôts d’urines, des résidus gastriques, des mucosités fécales, des exsudats fibrineux et purulents.

Le titre de la solution colorante peut varier de 1 p. 500 à 1 p. 100. La formule est la suivante :

Bleu detolnidine es 0 gr. 50 Alcoo! "à" 95. ER RE OR RIT A 19 Ce:

Acide phénique. . . EE Le 3 gr.

Eau distillée stérilisée qe s. pour. ae 100 ce.

Le réactif est stable ; il se conserve indéfiniment aseptique. Le flacon à poste fixe se sédimente constamment. On

y puise par Capillarité avec une effilure de pipette plongée dans le liquide sans toucher le fond. Sur le frottis récent, étalé en couche mince, sans aspérités, bien séché, on renverse la lamelle chargée de la gouttélette de bleu ; elle doit s'appliquer hermétiquement sur la lame. La solution colorante imprègne très vite les éléments desséchés du frottis. Le bleu de toluidine colore en bleu plus ou moins pâle les cytoplasmes, en violet rougeâtre les noyaux, en violet les nucléoles, en rouge le mucus, en rouge violâtre l’amyloïde, en bleu pur la substance colloïde, en bleu terne certaines substances lipoïdes, la fibrine en bleu, les fibres élastiques en vert pâle, les grains d’amidon en bleu pâle verdâtre. |

J. — COLORATION DES CHAMPIGNONS (Hyphomycètes, Teignes, etc., voir chapitre XxxXIX).

Dégraisser d’abord soigneusement par l’alcool-éther. Colorer pendant 5 à 10 minutes dans une solution de bleu alcalin de Lôffler ou de thionine phéniquée.

Laver à l’eau. Passer rapidement à l'alcool absolu, sécher et examiner dans une goutte d'huile de cèdre.

K.— MONTAGE DES PRÉPARATIONS MICROSCOPIQUES POUR L'EXAMEN APRÈS COLORATION

Les préparations colorées s’abîiment assez rapidement et se décolorent. Il importe de pouvoir les recolorer si c'est nécessaire. Il ne faut donc pas, surtout lorsqu'il s’agit de préparations de sang contenant des parasites, les monter dans le baume de Canada comme on le fait habituellement pour les coupes histologiques. Il est beaucoup préférable de se servir de l'huile à immersion, ou mieux encore de paraffine liquide bien transparente (huile de paraffine).

Noïa. — Pour les transports lointains et la conservation indéfinie, on protégera très simplement les préparations sèches et fixées de sang ou de frottis, colorées ou non colorées, en les recouvrant d’une mince couche de paraffine fusible à 450, dissoute dans du xylol (parties égales de

paraffine et de xylol) qu'on laisse évaporer à l'air libre à l'abri des poussières. Lorsqu'on veut étudier et recolorer ces préparations, rien n’est plus facile que de dissoudre dans du xylol pur la mince couche de paraffine qui les recouvrait.