COLORATIONS ÉLECTIVES. - MÉTHODE DE NISSL

^4° Différenciation : avec un mélange d’alcool et d’huile d’aniline, jusqu à ce que le liquide différenciateur n’absorbe plus de bleu de méthylène.

Alcool à 96 degrés . 90 grammes.

Huile d’aniline incolore . 10

(Ce mélange doit être conservé dans une bouteille de verre foncé, à l’abri de la lumière.)

5° Montage. — Chaque coupe, transportée sur une lame porte-objet, est séchée avec du papier-liltre. On la recouvre rapidement d’huile de cajeput destinée à l’éclaircir,, on sèche encore avec du papier-liltre ; puis on met quelques gouttes de benzine et d’un mélange spécial de colophane et benzine. Mais, pour empêcher que la matière colorante ne diffuse dans la coupe, on doit solidifier aussi vite que possible la colophane ; dans ce but, on passe la coupe dans la flamme d’une lampe à alcool, la benzine s’enflamme, on éteint tout de suite la flamme et l’on recommence jusqu’à disparition complète de la benzine et solidification de la colophane.

Avec cette méthode, la substance chromatique des cellules nerveuses, (cellules somatochromes en particulier), le nucléole et la membrane nucléaire, sont seuls colorés en bleu pâle.

Des modifications très nombreuses ont été successiyement apportées à cette méthode primitive de Nissl, et l’on pourrait presque dire que chaque travail a été fait avec un procédé spécial, tout en suivant les principes généraux de la méthode (fixation rapide des pièces fraîches; coloration par un colorant basique d’aniline) .

On a employé, comme fixateurs : l’alcool fort; — la solution de formol à 20 pour 100, à 10 pour 100, à 2 et 3 pour 100; — le sublimé corrosif (solution aqueuse saturée, ouadditionnée de chlorure de sodium à6 pour 100);

— le liquide de Lang (bichlorure de mercure, 5 grammes; chlorure de sodium, 6 grammes; acide acétique, 5 grammes; eau, 100 grammes); — la solution d’Ewing (solution de formol à 5 pour 100, saturée de sublimé); — la solution de Van Gehuchten (alcool absolu, 60 grammes; chloroforme, 30 grammes; acide acétique glacial, 10 grammes); — la solution de Held (sublimé, 1 gramme; acétone, 40 grammes; eau, 100 grammes).

Bien des auteurs emploient Y inclusion, celloïdinée ou .paraffinée, indispensable pour la confection des coupes très minces et en séries. — Les colorants basiques ont été à peu près tous employés (bleus de méthylène, rouge Magenta, bleu de toluidine, thionine, bleu polychrôme d’Unna, etc.).

— Les liquides différenciateurs varient beaucoup suivant chaque auteur : alcool absolu; —alcool aniliné; — solution d’acide acétique à 1 pour 100 (Sadowsky) ; — solution de Gothard (créosote, 50 centimètres cubes; huilp de cajeput, 40 centimètres cubes ; xy.lol, 50 centimètres cubes ; alcool absolu, 160 centimètres cubes), etc.

b . — Autres méthodes (Substances chromatique et achromatique).

Bien des essais ont été tentés dans le but d’obtenir la coloration élective de la substance achromatique, coloration isolée ou associée à celle des chromatophiles. S’il est possible de colorerez masse cette substance achromatique, aucun procédé n’est capable de révéler le réticulum ou les fibrilles avec une sécurité suffisante, surtout dans les recherches d’histologie pathologique chez l’homme. Les procédés suivants ont été employés avec plus ou moins de succès, surtout en histologie normale :

,44 HISTOLOGIE PATHOLOGIE DU SYSTEME NERVEUX CENTRAL a# Procédé ancien de Flemming.

4» Fixation dans la solution ordinaire de sublimé corrosif. Inclusion à

la “.'coto mUonlir™' safrânine, le violet de gentiane; ou mieux par l’hématôSé de Delafield en solution étendue pendant quelques heures. (Procédé destiné à montrer les fibrilles de la substance achromatique.)

B. - Procédé récent de Held (1897) (double coloration, par colorants basiques et acides).

1° Fixation :

Solution de Van Gehuchten :

Alcool absolu .

Chloroforme........ •

Acide acétique glacial

ou dans la solution :

Sublimé corrosif

Acétone .

Eau .

2° Inclusion à la paraffine.

3° Colorations. Les coupes (1-10 p.) sont colorées (une a deux minutes avec léger chauffage) :

Érythrosine pure . 1 gramme.

Eau distillée . 100 grammes.

Acide acétique glacial . n gouttes.

Les coupes, devenues roses, sont lavées à l’eau et surcolorées avec la double solution :

1 gramme.

40 grammes.

60 grammes.

a) Solution aqueuse d’acétone (1 : 20) .

b) Solution de bleu de méthylène (Nissl)...

à parties égales.

(On chauffe énergiquement jusqu’à disparition de l’odeur d’acétone.)

Après refroidissement, les coupes sont différenciées dans une solution d’alun à 0,10 pour 100, jusqu’à réapparition de la coloration rosée (quelques secondes à quelques minutes).

4° Lavage. Alcool absolu, xylol, colophane et benzine (procédé primitif de Nissl).

Les chromatophiles de la substance chromatique sont bleus ou légèrement violets, avec les nucléoles. La substance achromatique est d’un rouge vif, ainsi que la membrane nucléaire et la masse du noyau. Ce procécé est avant tout une modification de la Méthode de Nissl.

Tf* — Procédé récent de Cox (1896).

1° Fixation (2 à 3 jours) :

Solution :

Solution saturée de sublimé corrosif . 30 grammes.

Chlorure de platine (5 pour 100) . 15 grammes.

Acide osmique (1 pour 100) . 10

Acide acétique . ( ( . g

2° Inclusion à la paraffine.