TABLEAU VI
Série A. Valeurs de la gamme étalon de l’acétyl-p-aminophénylsuifamide
= 0,794 gr. de sulfanilamide.
[D] [D] : Conc. en e Correspond es Em es Ne Dil. Urine | gr 0/0 du Teneur en suf. [252058 1/3 2 : absolue RAR SSI d. acétylé gr % ele LT RER PR RE Ca RE | nn LP en}, er, 1 1}> | At | 0.000383 | 0.0000165 | 0.000264 8 ji 2 | 4 0.00066 | 0.000033 0.000528 16 14 3 11» | 31 | 0.00099 | 0.0000195 | 0.000792 24 91 140 0.00132 | 0.000066 0.00105 32 Fa | 5 | 91/2 | 21) 0.00165 | 0.0000825 | 0.00132 40 | 34.5 Le 5 e 0.00198 | 0.000099 0.00158 | 47.5| 41 7 | 3%2! 112 | 0.009231 | 0.000115 | o0.00184 55 | 48 VS 4 1 0.00264 | 0.000182 | 0.00211 60 54 9 gi} 12 | 0.00297 | 0.000148 0.002387 10 5 | 0 |o.0033 | 0.000165 | 0.00264 | Série B Dil Conc. en Correspond. = = LE No 7 ‘ | Urine | gr; du desert ensul. 252238 < d. acétylé absolue gr 0/0 F 3 3 a es = 1 1/> | 417, | 0.00025 | 0.000012 0.0009 6 5 à 2 1 4 | 0.0005 0.000025 0.0004 12.5 | 10.5 3 11 | 312 | 0.00075 | 0.0000375 | 0.0006 18.5 | 15.5 | | 4 | 2 3 0.001 0.000085 0.0008 24,5 | 91 | 5 21/2 | 91/2 | 0.00125 | 0.0000625 | 0 001 | 30 5 | 26 6 8 | 2 |0.0015 | 0.000075 0.0012 36.9 | 31.5 7 31/2 | 11} | O C0175 | O 0000875 0.U0014 42.5 | 36.5 se 1 | 0.002 0.0901 oi las lee 9 41/2 122 | 0.002923 | 0.0001125 0.0018 54,5 | 47 10 5 0 | 0.0025 0.000125 0.002 59 59
Il resta à savoir maintenant si dans la pratique la réduction à froid du Rubiazol-C avec le nickel chlorhydrique perdant 10 minutes n'allait pas désacétyler déià une fraction des dérivés acétylés, fraction qui viendrait augmenter le taux de la partie non acétylée en abaissant simultanément celui des dérivés acéto-conjugués.
Il était facile de s’en rendre compte, nous n'avions qu'à traiter 5 cc. de la solution à 0,01°/o d'acétyl-p-aminophénylsulfamide de la même manière comme s'il s'agissait d’une solution de Rubiazol-C à réduire. La suite des opérations resta la même. Après diazotation et addition de R. IV. le liquide resta incolore ce qui prouve aue l’action de l’acide chlorhydrique N à froid, pendant 10 minutes, et dans la proportion choisie, ne suffit pas à libérer l’amine.
Le mode opératoire pour la recherche de l’Hémikrèse et de la Protorrhée semblait done trouvé, il ne nous resta plus qu'à mettre au point une méthode pour mesurer la fraction «Rubiazol-C inchangé». Mais avant d'aborder cette question nous voulons attirer l’attention du lecteur sur une correction qu'il faut apporter aux évaluations quand on travaille sur des dilutions urinaires autres que la dilution 1:9.
Toutes nos expériences ont été effectuées tout d’abord sur l’urine au dixième. Quand nous avons répété ce même travail sur des urines au cinquantième et même au centième, nous nous sommes aperçu bientôt que les valeurs photocolorimétriques étaient en général trop basses. Cela était à prévoir, vu la légère diazotabilité de l’urine elle-même.
Nous étions forcés de refaire les gammes en utilisant cette fois des solutions dans l’urine au vingtième, au cinquantième, au centième. En prenant la moyenne des rouvelles valeurs, nous trouvons une droite d’allure voisine de celle obtenue à partir de l'urine au dixième mais toujours de quelques unités plus basse.
Les valeu-s trouvées pour une urine au cinquantième sont consignées dans les tableaux IV, V, VI. Le tracé est reproduit dans la figure I.
Les valeurs d’une urine au vingtième sont sensiblement celles d’une urine au dixième.
Celles d’une urine au centième coincident avec les valeurs d’une urine au cinquantième.
Nous n'avons jamais utilisé des dilutions plus basses aue 1+9, parce awalors la coloration de l’urochrome devient trop importante. D'autre part cette coloration n’est pas constante mais diffère d’une miction à l’autre. Elle viendrait donc fausser nos résultats d’une manière sérieuse.
Quand nous disons avoir pris la moyenne des lectures photocolorimétriques, cela signifie que nous avons fait maintes lectures pour un échantillon coloré au R.IV. et que nous avons refait la gamme
plusieurs fois en pesant chaque fois de nouveau les 10 mgrs. qui servent à la préparation de la solution-mère.
Dans de bonnes conditions, les abterrations de lecture ne sont jamais très importantes. Elles peuvent être de 2 unités à droite et à gauche et présentent un maximum, rarement atteint, avec 4 unités. Une unité photocolorimétrique correspond à 0,02 mgr.*/ de sulfanilamide. Pour 100 cc. d’urine au dixième, l’erreur qui en résulte est de 0,02 X 10 — 0,2 mgr. en sulfanilamide et de 0,4 mgr. en Rubiazol-C.
Rubiazol-C inchangé.
Au début de ros expériences nous n’étions pas renseignés sur le point que le Rubiazol-C, contrairement au Rubiazol simple, est détruit presqu'entièrement dans lorganisme, et n'apparaît dans l’urine qu'en quantité minime et encore dans les 36 heures qui sui-
ent l’ingestion. Nous pensions que la fraction Rubiazol-C irchangé occuperait une place importante dans le bilan de l'élimination totale.
Nous nous sommes donc plongés pendant un temps prolongé dans l’étude de l’extraction par des solvants appropriés du Rubiazol- C urinaire. Ce travail ne nous a guère avancé plus tard, nous signalerons néanmoins ses points essentiels.
Comme solvants nous avons examiné: La pyridine, l’acétone, le mélange pyridine-acétone selon la méthode de Kellner, le cyclohexanol, l'alcool amylique et isoamyliaue, pour nous fixer finalement sur l’alcool butylique normal.
Cet alcool, d’un maniement facile, et d’une faible miscibilité avec l’eau, nous épargnait surtout les inconvénients du relargage. En effet nous avions remarqué que dans le mélange eau: butanol le Rubiazol- C passe entièrement dans la fraction butanolique par acidification et agitation. Bien plus, en enlevant le butanol chargé de colorant et en le recevant sur une eau qui contient quelaues gouttes de solution normale de soude, nous voyors que le Rubiazol-C passe de nouveau dans la phase aaueuse laissant ainsi une phase butanoliaue incolore. Par un simple jeu de PH on peut donc diriger l’azoiaue dans l’un ou l’autre des deux solvants.
Malheureusement la solubilité du Rubiazol-C dans le Butanol n’est pas assez grande pour réaliser cette extraction sur une solution de Rubiazol-C de n'importe quelle concentration. En effet, auand la concentration dépasse 0,001 gr.°/o le butanol n’enlève plus la totalité. Le choix de la dilution adéquate est évidemment facilité par la teinte de la solution.
D'autre part le butanol enlève toujours un peu d’urochrome, mais ce fait devient insignifiant pour les fortes dilutions d’urine auxquelles on doit avoir recours pour ne pas risquer une trop grande concentration en azoique. Nous venons de le dire, l'extraction au butanol
nest complète que pour les concentrations inférieures à 0,001 gr.°/o et nous Savons qu'une très faible quantité de Rubiazol-C suffit déjà pour colorer un volume important d’eau.
Pour plus de précision nous avons choisi pour nos mesures photocolorimétriques le filtre 12 (le même qui nous Sert à mesurer la coloration rouge par le R. IV.) qui pour une faible différence de taux, nous donne un large écart numérique.
Pour les mesures nous avons procédé comme suit:
À 5 cc. de dilution urinaire on ajoute 7 cc. de butanol et 1 cc. d'acide chlorhydrique normal. On agite, puis on laisse les Hquides se séparer. La clarification du butanol se fait d'autant mieux que la dilution urinaire utilisée est plus forte. Après clarification on enlève à l’aide d’une pipette juste assez de butanol pour remplir la cuvette du photocolorimètre. La lecture se fait contre de l’eau distillée.
Les valeurs trouvées nous donnent la figure II. Pour la confection de la gamme nous avons utilisé les mêmes dilutions comme décrit plus haut. (voir tableau VII) MADBIEPBAUMUI
Valeurs pour la gamme étalon du Rubiazol-C extrait au Butanol
Dil. [Urine| Conc. en Teneur [322
Ï No DEZ 1/3 dil | R-C gr % absolue Se
en | 12 | 412 | O 00033 | 0.0000165 | 21.
SD 4 0 00066 | 0.0c0033 | 43
OR CRIE 0.00132 | Oo 000066 | 76 |
En choisissant une autre méthode que celle proposée par Kellner pour le prontosil, nous ne voulons pas implicitement faire la critique de cette méthode. La méthode de Kellner donne de bons résultats, la raison pourquoi nous l’avons abandonnée doit être cherchée dans le fait que le maniement continuel de la pyridine requiert un appareillage spécial ou une annexe bien aérée à cause de l'odeur pénétrante de ce produit et de ses effets toxiques, surtout à la longue.
Avant de terminer ce chapitre, ajoutons encore, qu'en relargant par le sulfate d’ammonium le butanol s'empare assez bien du Rubiazol-C, moins bien du p-aminophénylsulfamide, mais très bien
du produit de diazotation du p-aminophénylsulfamide avec le R. IV, surtout en chauffant légèrement. Mais il ne faut pas exagérer l’'échauffement car la coloration vire alors au rouge-framboise puis même au rouge-orangé, Ce même changement de teinte s’observe d’ailleurs sur des solutions butanoliques du même colorant par vieillissement. (jusqu'à ur mois et davantage.)
