CHAPITRE IV

ISOLEMENT DE L’ACTINOMYCES.

Le diagnostic de l’Actinomycose de l'appareil uro-génitul de la femme est, d’après EMMERICH, relativement facile, s’il s’agit d’un foyer fistulisé ou sécrétant du pus. On a alors généralement la possibilité de mettre en évidence l'agent actinomycétique dans les préparations entre lame et lamelle ou par coupe histologique, ou encore par les procédés culturaux.

D’après LENTZE, on doit étaler le pus dans une capsule plate en verre ou en porcelaine ou dans un grand verre de montre; examiner ensuite au moyen d’une loupe à grossissement de 6 à 10 fois. Dans le cas de pus contenant des grains, ces derniers sont susceptibles de rester collés contre les parois des tubes de prélèvement et on peut éventuellement les déceler de cette façon. On doit rechercher de petites formations granuleuses, vitreuses; on les sélectionne et on les dilacère avec des lancettes stériles. Ces granulations écrasées sont traitées au moyen de lessive de Potasse à 10% et montrent alors la formation de massues, d’un aspect vitreux, caractéristique des Actinomycètes. Cependant, l'absence de ces massues ne doit pas exclure l’existence d’une Actinomycose, on cherchera dans ce cas au centre du grain des filaments mycéliens qui peuvent être fortement enchevêtrés ou plus ou moins isolés et fractionnés. Ces formations présentent après coloration par le Bleu de méthylène de Loeffler, à un fort grossissement, une teinte bleu-verdâtre, tandis que les agglomérations leucocytaires se colorent en bleu foncé.

La coloration par la méthode de Gram peut être effectuée soit sur frottis, soit entre lame et lamelle, elle permet de différencier les éléments actinomycétiques fortement frac-

PARRDEE RO PRES

tionnés des germes bactériens, Gram-négatifs (voir nos microphotos).

On peut également recommander linclusion des grains dans la Paraffine et l'examen consécutif des coupes histologiques. D’habitude on trouve les éléments mycéliens filamenteux ou plus ou moins fractionnés dans les cas récents et les grains ne font leur apparition que plus tard. L’examen direct permet donc de poser le diagnostic très rapidement avec une certaine réserve.

Le diagnostic ne peut être établi avec certitude que par l'analyse culturale; en principe, les cultures devraient être toujours effectuées, non seulement au point de vue du diagnostic différentiel entre Les Actinomycètes et les Bactéries, mais également pour. trancher le problème entre une infection d’'Actinomycose ou de Nocardiose.

Les auteurs allemands précités recommandent pour la culture en anaérobiose le procédé de FORINER, cultivant les Actinomyces en présence du Bactérium prodigiosum, qui absorbe l’Oxygène de l'air et permet ainsi aux Actinomyces anaérobies l’amorcement de la culture. Celui-ci est d’habitude assez tardif et nécessite environ 6 à 7 jours. Des prélèvements de ces cultures montrent d'habitude des filaments très courts ou des bâtonnets souvent ramifiés formant des microcolonies. On peut également constater les ramifications des filaments mycéliens dans les cultures mêmes, soit en examminant le tube de culture avec un petit grossissement au microscope, au niveau d’une colonie se développant vers les parois du tube; soit en effectuant des cultures en boîte de Pétri et en examinant celles-ci renversées pour déceler les colonies ayant poussé en profondeur sur le fond de la boîte.

Comme milieu de culture spécifique, LENTZE et les autres auteurs allemands actuels recommandent la Gélose au sang de LEVINTHAL de pH — 7,4 à 7,2, ou encore la Gélose ascite à 10 ou 20%. Ces milieux placés en anaérobiose paraissent très favorables, puisque LENTZE indique qu’il trouve dans 75% de cas de nombreuses colonies après 48 heures. Dans les 25% restant, les colonies apparaissent vers le 4 jour.

L'auteur insiste sur l'avantage de ces milieux en comparaison avec l’ancienne méthode de BOSTRGEM, qui nécessitait Jusqu'à 50 boîtes de Pétri pour obtenir 4 ou 5 colonies.

Nous aurons l’occasion ci-dessous, de donner les méthodes employées actuellement en France, auxquelles nous

avons fait appel en nous inspirant surtout des travaux de PRÉVOT.

Indiquons tout d’abord les techniques culturales élaborées

par l’école de A. SARTORY que nous puisons dans le travail de A. WALTHER (48). Cet auteur donne tout d’abord les caractères culturaux en aérobiose, sur milieux liquides qui, d’après lui, sont les seuls à donner des résultats satisfaisants. Ce n'est que par réensemencements successifs sur le même milieu, espacés au début de 8 jours, et plus tard de 5 jours, qu'on réussit à sauver le Champignon du dépérissement et à lui conserver une vitalité suffisante.

Le milieu de RAULIN neutre ou acide, l’eau de pomme de terre, l’eau peptonée et le bouillon de viande constituent des milieux très médiocres. Comme seul milieu nutritif favorable, les auteurs précités recommandent le milieu de Sabour«ud maltosé qui leur semblait être le substrat de choix pour la culture aérobie. On peut employer le Maltose pur ou brut. Pour les milieux solides, WALTHER affirme que l'adaptation de son Actinomyces aux substrats solides était très difficile. Le sérum de cheval coagulé, le jus de pomme de terre alcalin gélosé et les bouillons gélosés sont peu recommandables. Les meilleurs résultats ont été obtenus sur le milieu de jus de pomme de terre glucosé ou maltosé glycériné de J. Meyer.

En ce qui concerne l'isolement des Actinomyces, il faut retenir que le prélèvement du matériel ne doit pas se faire au hasard, ni lorsque le malade est soumis au traitement joduré ou radiothérapique.

DECHAUME (49) propose de procéder de la manière suivante:

Lorsqu'il n’y a pas de fistule, ponctionner avec une pipette en un point ramolli, en évitant cependant les fovers phlegmoneux à marche aiguë, qui ne contiennent le plus souvent que des microbes pyogènes banaux. Lorsqu'il y a des fistules et des lésions fermées, il faut toujours faire porter le prélèvement sur ces dernières, car lorsqu'il y a de l’infection secondaire, le Champignon disparaît souvent; dans certains cas la culture devient impossible du fait de la concurrence vitale. Lorsque toutes les lésions sont fistulisées, les Microsiphonées se rencontrent sur les bords des fistules récentes. Dor (50) conseille de gratter la plaie ou le trajet fistuleux avec une petite sonde canelée pour la faire saigner. Recueillir le sang dans un verre de montre et dissocier le caillot avec des aiguilles montées.

Rechercher le Champignon en des points multiples et recommencer les prélèvements à plusieurs jours d'intervalle, car les Mycoses évoluent par poussées successives et dans leur intervalle on ne trouve très souvent pas de parasite.

Marcel MEYER (51) rend attentif sur le fait que le plus souvent les techniques bactériologiques usuelles ne convien-