Alcool à 95°, 50 c. c.; acétone, 10 c. c

E.-C. AviraGxer, Weizz-Hazzé et P.-L. Marre.

Pour avoir des colorations plus fines permettant d'étudier la structure, on se sert du bleu alcalin de Lôüffler(') ou de l’azur alcalinisé(?), préférable en raison de sa conservation indéfinie, ou des procédés mettant en évidence les corpuscules polaires(5). Nous ne reviendrons pas ici Sur les caractères microscopiques différentiels des bacilles déjà longuement étudiés.

Telle est la technique simple mise en œuvre pour les besoins de la chinique journalière. S'il est besoin d’une détermination plus rigoureuse des bacilles, on aura recours aux épreuves de la fermentation des sucres et de l'anaérobiose. Il est indispensable alors de partir d’une culture pure, les streptocoques et les staphylocoques, presque toujours mêlés aux bacilles, faisant virer les milieux sucrés et étant des anaérobies facultatifs.

Pour J'obtenir, on prélève une parcelle d’une colonie bien isolée du troisième tube de sérum; on la dilue dans 10 c. c. de bouillon. Après agitation soigneuse, on ensemence au moyen du fil de platine un tube de sérum coagulé avec cette dilution. ILest parfois nécessaire, pour arriver à une purification complète, de refaire la même opération avec une des colonies isolées de ce dernier tube.

On peut alors ensemencer les bacilles purifiés en gélose profonde glycosée tournesolée de L. Martin qui combine heureusement les deux épreuves.

Répartir en tubes de la gélose ordinaire sur 6 centimètres de profondeur; stériliser une demi-heure à 115°. Préparer la solution : glycose, 3 gr.; teinture de tournesol de l’Institut Pasteur, 50 €. c.; eau distillée, 200 gr. Si elle tend à virer au rouge, la ramener à la teinte sensible par addition ménagée de soude décinormale et la stériliser par filtration sur bougie. Avec une pipette à boule ajouter aux tubes de gélose liquéfiée retirés de l’autoclave et refroidis à 50° au bain-marie 5 c. ©. environ de la solution glycosée tournesolée par tube; mélanger jusqu’à coloration bleue violacée uniforme. Refroidir les tubes, et, quand la gélose est solide, éprouver la stérilité par un séjour de 24 heures à 37°. Pour utiliser ces tubes, les liquéfier, et, après refroidissement à 50°, ensemencer à la pipette avec { c. c. de bouillon contenant la dilution du bacille, en mélangeant soigneusement; refroidir le tube et mettre à l’étuve.

Le virage au rouge de ce milieu sur toute sa hauteur indique qu'il s’agit bien du B. diphtérique. Lorsqu'il s’agit d’une localisation extra-pharyngée,

1. Solution saturée de bleu de méthylène dans l'alcool, 50 c. c.; solution de potasse dans l’eau au dix-millième fraichement préparée, 100 c. c. Colorer cinq minutes la préparation fixée; laver; sécher.

2. Solution À : azur IT, 1 gr.; eau phéniquée à 0,5 pour 100, 100 gr. — Solution B : carbonate de sodium à 1 pour 100. Diluer A avec de l’eau distillée jusqu’à obtention d’une solution transparente; à 10 c. e. de cette dilution ajouter une à dix gouttes de B.: colorer 10 secondes.