TABLEAU XI

Dosage de la leucine en présence d’un mélange d'acides aminés.

Le mélange est constitué par 9 mg. de chacun des acides aminés suivants : isoleucine, acide glutamique, tyrosine, tryptophane. Durée de l’oxydation : 4 heures. 5 cc. de solution d'acide chromique à 10 % +4 cc. d'acide acétique pur.

Acétone théorique

Leucine RENAN Acétone Leucine LR de la présente à fa loueine trouvée trouvée quantité (mé.) (mé:) (mg.) (mg.) théorique 0 0 0 0 — 2 0,885 0,565 2,18 109 3 1,327 0,790 3,07 102 4 1,77 1,01 3,95 99 6 2,65 1,55 6,05 101 8 3,54 2,00 7,82 98 10 4,42 2,50 9,72 97 12 5,31 3,00 11,70 98

I!l. — Dosages spécifiques de la valine et de la leucine, ces deux acides aminés existant simultanément

dans un mélange d'acides aminés quelconques

La méthode qui vient d’être décrite permet le dosage de la valine ou de la leucine dans un mélange d’acides aminés quelconques, mais à la condition qu’il n’y ait ni leucine présente dans le cas du dosage de la valine, ni valine présente dans le cas du dosage de la leucine. Matgré ces restrictions, cette méthode peut rendre de grands services, croyons-nous, notamment dans l’étude de la synthèse fermentaire de la valine ou de la leucine. Maïs il est plus intéressant encore de pouvoir doser simultanément ces deux acides aminés lorsqu'ils sont en présence l'un de l’autre ; c’est là, en effet, le cas le plus général, tel qu’il se rencontre par exemple dans l’analyse des matières protéiques.

Pour arriver à ce résultat, nous avons mis au point une méthode dont le principe consiste à réaliser l’oxydation chromique par deux procédés différents, dans des conditions telles que les quantités d’acétone formées, dans chaque procédé, à partir de chacun des deux acides aminés, valine et leucine, soient nettement différentes, chacun des deux oxy-acides correspondants se comportant, au cours de son oxydation chromique, comme s’il était seul. Une équation simple permet alors le calcul des quantités cherchées de valine et de leucine.

Description de la méthode.

La solution contenant le mélange des oxy-acides provenant de la désamination des acides aminés, effectués com-

T4 Pa

me il a été dit plus haut, est divisé en deux parts égales ; la première est traitée par la solution acétique d’acide chromique au bain-marie bouillant pendant 4 heures comme dans le cas où l’on a affaire à la leucine seule ; c’est le mode d’oxydation que nous qualifions d’oxydation sous pression. Nous appellerons a la quantité totale d’acétone formée dans ces conditions.

L'autre moitié est traitée par oxydation et distillation directe, de la façon suivante : concentrée sous vide jusqu’à un volume de 10 à 15 cc. elle est ensuite transvasée dans une éprouvette graduée de 50 cc. ; on rince le ballon dans lequel a eu lieu la concentration sous vide avec un minimum d’eau qui sert à ramener le volume de la solution des oxy-acides à 20 cc. La solution est alors placée dans une boule à brome qui sera adaptée à un ballon Pyrex de 100 cc.; le ballon où a eu lieu la concentration sous vide est rincé de nouveau par 10 à 15 cc. d’eau qui sont complétés à 20 cc. dans l’éprouvette graduée ; on transvase ces 20 cc. d’eau de lavage dans le ballon Pyrex de 100 cc. dans lequel on introduit ensuite 5 cc. de la solution d’acide chromique à 10 ®%,, et auquel on adapte la boule à brome contenant les 20 cc. de la solution des oxy-acides, et un réfrigérant ; ce réfrigérant et le ballon récepteur auquel il aboutit sont identiques à ceux qui, utilisés pour la distillation de l’acétone après oxydation sous pression, ont été décrits plus haut. On chauffe ensuite le tout à flamme très douce et lorsque l’ébullition commence, on laisse tomber goutte à goutte la solution des oxy-acides contenue dans la boule à brome. L’addition de cette solution est réglée de telle sorte qu’elle soit totale en 20 à 22 minutes ; les vitesses de distillation et d’addition doivent être telles que le volume du liquide en ébullition reste pratiquement constant. Quand la solution des oxy-acides est ainsi complètement introduite, on rince l’entonnoir à robinet par 5 cc. d’eau que l’on fait ensuite

AN. in

passer dans le ballon en maintenant l’ébullition encore trois à quatre minutes, ce qui fait que la distillation dure au total 25 minutes. Le distillat, recueilli dans le ballon récepteur, est ensuite transvasé dans un ballon jaugé convenable, puis on dose l’acétone produite (6).

La connaissance de l’acétone formée au cours de loxydation chromique sous pression (a), et celle de lacétone formée par l'oxydation et distillation directe (b), permet de calculer les quantités respectives de valine et de leucine présentes initialement dans le mélange d’acides aminés traité.