CHAPITRE II

Nous nous proposons de ne donner dans ce Traité qu'une place tn'>restrcinte soit à la technique microscopique, soit même à la techniqur lîistologique proprement dite, notre but étant surtout d'exposer les résultats acquis en histolog:ie et non les procédés à employer pour vérifier ces résultats. Ce sont deux choses absolument différentes el qu'il faut se garder de confondre. Nous pourrons, à propos de certains tissus et de certains éléments anatomiques, indiquer d'une manière sommaire le moyen de les préparer, mais pour tous les détails précis en ce qui touche» à l'emploi du microscope et des réactifs, à l'art de faire des coupes, etc., nous renvoyons aux traités spéciaux sur la matière. On consultera avec avantage celui de Frey {Histologie et Histochimie), celui de M. Ch. Robin (Du microscope et des injections), celui de M. L. Ranvier (Traité technique d'Histologie). R y a évidemment en histologie comme en toute autre science physique ou naturelle une technique, comme en chimie, par exemple, où la technique comprend l'art de conduire une analyse organique, de faire cristalliser un sel, d'évaporer un liquide, même de faire un filtre, etc. (1).

La technique est un recours nécessaire, c'est l'emploi des moyens qui nous permettent d'avancer de plus en plus dans la connaissance» intiuKi des objets soumis aux investigations de l'analomiste, mais c«*

(1) Quelques analomistes ont donné ù tort ù la préparation nécessaire pour obsen'cr an microscope Ir. môrae importance que d'autres ont accordée à cet instrument, et peu s'en faut que, dans certains esprits, une sorte de confusion ne s'établisse aujourd'hui entre la technique hi*io\og\que et rhistologie proprement dite, de même que la tendance ailleurs est ilo confondre ïanatoinie microscopique avec Varwtomie générale.

serait une erreur étrange que de confondre les procédés employés par une science avec la science même. On peut être excellent technicien tm histologie, excellent micrographe même, et cependant n'avoir point eu anatomie des connaissances étendues.

Ceci ne veut nullement dire qu'il faille négliger l'étude de ces prorédés, de ces tours de main qui nous ont permis de pousser aussi loin nos connaissances. L'élève doit au contraire s'appliquer à les posséder parfaitement, à les essayer tous, à les perfectionner quand cela lui sera possible. Surtout il ne doit pas oublier que ces procédés s'apprennent à peu près exclusivement par la fréquentation des laboratoires. —D'une manière générale, on peut dire de tous les procédés techniques rju aucun n'a la valeur ni l'importance que lui attribue le plus souvent relui qui Ta trouvé, mais on peut dire aussi qu'il n'en est aucun qui n'ait son utilité pratique dans certains cas.

Il est seulement un point qu'on ne devra jamais perdre de vue. Ceux qui débutent dans les études histologiques sont enclins en général à regarder les préparations qu'ils ont faites comme traduisant l'état réel des objets ; ils oublient qu'après une préparation quelconque l'objet observé est toujours — pour employer une expression mathématique — fonction du mode opératoire auquel il a été soumis. Une infinité d'erreurs ont été commises pour n'avoir pas tenu compte de cette indication véritablement élémentaire. Certains tissus ont été considérés comme étant de telle ou telle nature, suivant que l'observateur avait usage de se servir de tel ou tel réactif, ou y avait plus de confiance qu'en tout autre.

C'est par la comparaison seule des différents aspects que nous offrent les éléments anatomiques après les diverses préparations auxquelles on les soumet, que nous pouvons nous faire une idée de ce qu'ils sont ivellemenl. L'observateur a toujours pour devoir d'analyser scrupuleusement l'apparence donnée au microscope par tel ou tel procédé de préparation, afin d'en déduire, par une véritable opération de l'esprit, ir qui est réellement. Les exemples abondent où le même tissu traité par divers réactifs offre les aspects les plus différents, et même presque inconciliables les uns avec les autres. On peut citer comme exemple frappant la mince membrane qui sépare chez la grenouille la cavité ipérilonéale des deux sacs lymphatiques placés en arrière d'elle. Abstraction faite des épithéliums qui tapissent de part et d'autre cette paroi, on peut la voir 4" constituée par une substance amorphe et hyaline si on l'a traitée par une solution étendue de nitrate d'ai'gent; i* contenant des cellules fusiformes ou étoilées si on l'a traitée par le chlorure d'or ; 3" formée de fibres onduleuses si on l'a soumise à l'action

de l'acide osmique salure. Nous reviendrons du reste sur ces diverses apparences.

Si Ton s'en rapporte exclusivement à telle ou telle des réactions provoquées, il est clair que Ton aura une idée absolument fausse du tissu examiné ; on devra déduire la nature et la composition de celui-ci de toutes les indications fournies par les divers réactifs.

A plus forte raison, et pour la même cause, on ne devra jamais négliger d'observer les éléments et les tissus à Tétat frais et de corriger par les observations ainsi faites celles qui résulteront de l'examen des mêmes éléments ou du même tissu dans les conditions spéciales où on Ta mis pour en faciliter l'élude.

Nous nous bornerons à donner ici quelques indications trèsgénérales et très-sommaires sur la technique histologique, renvoyant comme nous l'avons dit d'une part aux traités spéciaux, et d'autre part aux renseignements particuliers que aous pourrons fournir en parlant des divers éléments ou tissus du corps,

L'histologiste est sans cesse obligé de recourir au microscope comme l'astronome à la lunette, mais il ne faut point oublier que le microscope n'est ici qu'un instrument dont l'hislologiste se sert au même litre que le zoologiste ouïe botaniste. Le fondateur de l'anatomie générale et par conséquent de Thistologie, Bichat, n'a jamais fait usage du microscope. Celui-ci devient indispensable, dès qu'on passe de l'étude des propriétés des tissus à celle des éléments anatomiques. Comme ils se dérobent par leurs dimensions à nos yeux, nous avons besoin pour les observer des pouvoirs amplifiants du microscope.

En général les grossissements considérables ne sont point utiles à rhistologisle. Il a rarement l'occasion de faire usage de grossissement de plus de 5 ou 600 diamètres. Ceux de 350 diamètres sont trèssuffisants pour les débuts. L'obsenation des tissus et des éléments au microscope n'offre rien de spécial ; on dilacérera ceux-là au moyen d'aiguilles, ou on en fera des coupes, absolument comme on procède pour tout autre objet, soumis au même genre de recherches. -

§ 37. — UiiHMefl iBdifléreBto. loduérma.

Les éléments et les tissus devront être examinés tout d'abord à l'état aussi frais que possible et même vivants. Le liquide où OD les placera doit donc être indifférent , c'est-à-dire n'avoir sur eux aucune action chimique. Or ceci n'est point le cas pour l'eau qui altère par son seul contact, el immédiatement, un certain nombn^ de tissus. Elle devra donc être loujoui-s rejetée pour l'examen

CHAMBRE HUMIDE. 5r>

des parties fraîches, excepté quand on saura d'avance quelle esl son action sur elles, comme s'il s'afçissait par exemple d'examiner les cellules superficielles d'un animal aquatique. Mais ceci est l'exception. On remplacera l'eau, suivant l'occasion, par le sérum du sang, l'humeur vitrée, le blanc d'œuf étendu d'eau, ou enfin tout simplement par de l'eau à laquelle on aura ajouté un demi pour 100 environ de sel de cuisine.

Le mieux est de l'ecourir à l'iodsérum de Max Schultze. Voici comment on le prépare. On prend du liquide amniotique de femme ou de brebis; ce dernier est facile à se procurer dans les abattoirs. Dans dix grammes de ce liquide amniotique on verse un gramme environ de solution alcoolique d'iode. On obtient ainsi du sérum sur-ioiU. On ajoute alors un gi-amme environ de ce sérum sur-iodé à cent grammes de liquide amniotique pur. C'est ce qu'on appelle Viodsérum. Il est d'abord jaunâtre, mais avec le temps l'iode disparaît peu à peu. Le liquide pAlit et finirait par se putréfier si l'on n'avait le soin d'ajouter alors une nouvelle quantité de sérum suriodé.

L'iodsérum n'est pas seulement employé comme véhicule pour Texamen des éléments anatomiques, on s'en sert également pour y faire macérer certains tissus qui s'y désagrègent après quelque temps en leurs éléments constitutifs. L'iodsérum est donc aussi un dissociant.

§ 38. — Chambre hnmMe.

Pour suivre pendant un certain temps des éléments anatomiques vivants sous le microscope, quand ceux-ci appartiennent à des animaux à sang froid, comme par exemple les éléments sarcodiques du sang de la grenouille et surtout du triton, on se sert d'un petit appareil connu sous le nom de chambre humide. Nous do-

FiG. 3. — Chambre liumide de Boltchcr.

crivons et nous figurons ci-contre (fig. 8) celle de Bottcher (voy. Ueber die molekular Bewegung in thierischen Zellen , dans Virchotvs A rch, , 18(>()). Elle se compose d'une lame ordinaire, au milieu de laquelle un

:i6 TECHNIQUE.

anneau de verre est fixé avec du baume de Canada. A la face interne de cet anneau on dispose une bande de papier buvard qu'on humecie légèrement. Puis la goutte de sang ou de lymphe (qui doit offrir le moins d'épaisseur possible) est déposée à la partie inférieure d'une lamelle, dont on recouvre cet anneau de verre, après avoir préalablement interposé une couche de paraffine ou de graisse. On devra éviter les substances en solution dans des essences ou dans l'alcool, parce que le dissolvant en s' évaporant à l'intérieur de la chambre agirait peut-être sur les éléments en observation (1). On peut à l'aide de ce procédé consen^er des éléments anatomiques vivants pendant plusieurs jours, à condition qu'ils appartiennent à des animaux à sang froid. Pour les éléments des animaux à sang chaud il faut un appareil plus compliqué dont on a proposé un grand nombre de modèles ; c'est une chambre humide maintenue à la température constante de l'animal à sang chaud.

On peut se proposer quand on étudie un tissu deux choses différentes: connaître les éléments dont il est composé, c'est-à-dire sa structure ; ou connaître la manière dont ces éléments sont agencés, c'est-à-dire sa texture. Dans le premier'cas le but à atteindre est d'isoler les uns des autres les éléments réunis pour former le tissu; dans le second, de durcir convenablement ce dernier, afin de pouvoir pratiquer des coupes qui laissent voir les différents éléments en place, dans leurs rapport* mutuels. Deux groupes de liquides dans lesquels on laisse macérer le^ pièces correspondent à ce double but : les Dissociants et les Durcissants,

Les dissociants sont des liquides dans lesquels on plonge les fragments du tissu que l'on veut étudier pendant un certain temps afin d'en séparer plus tard les éléments. Le dissociant par excellence est la Liqueur de Mfiller, composée de :

Eau iOO grammes.

Bichromate de potasse t —

Sulfate de soude 1 —

On peut augmenter ou diminuer la proportion de sulfate de sonde ou de bichromate selon que l'on veut obtenir un degré plus grand

(I) On vend également des chambres humides un peu plus compliquées, avec un socle au milieu, en sorte que le liquide à examiner se trouve comprimé entre celui-ci et le verre mince, ce qui peut i*tre avantageux pour certaines obsenations.

DISSOCIANTS, DURCISSANTS. COUPES. 57

i)\\ moindre de résistance des éléments. Plus les fragments de tissu ont s('»joumé longtemps dans cette liqueur, plus ils se laissent dissocier facilement : ce sont d'abord les cellules épithéliales, et plus tard les éléments du tissu lamineux.

Il y a un gi^and nombre d'autres dissociants que l'usage apprendra à connaître et que nous signalerons chemin faisant; ils ont chacun leurs avantages déterminés et devront être employés de préférence dans des cas différents.

L'alcool, les acides chromique, azotique, chlorhydrique, selon qu'on les emploie de telle ou telle manière, peuvent être des durcissants ou des dissociants.

Paraii les durcissants il faut citer surtout l'alcool, les acides chromique, picrique, les bichromates, principalement celui d'ammoniaque. L'acide chromique s'emploie à un demi pour 100 environ ;les bichromates à 3 ou 4 pour 100.

On devra toujours avoir soin de renouveler les liqueurs des macérations. C'est un principe général. Il sera toujours avantageux, quand reUi est possible, de suspendre la pièce que l'on se propose do laisser macérer, dans les parties supérieures du liquide, de même qu'il faudra toujoui's mettre une grande proportion de liquide relativement au volume de la pièce.

Les coupes se pratiquent sur les pièces durcies, soit à main levée, t»xercice dans lequel on arrive rapidement à avoir une grande habileté ; soit au moyen de microlomes (microtomes de Xachet, de FoUin et Ranvier, etc.) Le microtome est indispensable quand on veut obtenir un grand nombre de coupes bien régulières et bien égales, ou quand on se propose de poursuivre sur une certaine étendue un organe quelconque. On éprouve très-souvent, surtout dans l'étude embryogénique des premiers temps de la vie, le besoin de pratiquer sur un embryon unique une série non interrompue de coupes.

Quel que soit le procédé employé pour pratiquer les coupes, on doit toujours avoir soin de mouiller dans l'alcool la lame du rasoir. Les coupes doivent êlre faites en quelque sorte sous l'alcool. Pour les enlever de dessus la lame, il suffît de tremper celle-ci dans l'eau, OD l'essuie en la passant sur un linge, on la trempe de nouveau dans l'alcool et on pratique immédiatement une nouvelle coupe. La main qui tient la pièce, si on fait les coupes à main levée, ou qui tient le mi- ^M'otome, ne doit pas cesser de les tenir dans la même situation : ceci est indispensable pour avoir des coupes toutes régulières et toutes bleu éjrales en épaisseur.

On appelle encollage un procédé qui consiste à diffuser dans un lissu mou une substance liquide susceptible d'être ensuite coagulée, afin d'augmenter ainsi la dureté du tissu et de le rendre propre à être coupé par les moyens ordinaires.

L'encollage par excellence est celui qu'on fait avec la gomme , arabique. Les pièces sont plongées pendant vingt-quatre ou quarantehuit heures dans une solution sirupeuse de gomme ; puis on les porte dans de l'alcool à 36 degrés. Au bout d'un jour, elles sont en général suffisamment dures, toutefois le temps varie avec le volume de la pièce, et si celle-ci est très-mince, quelques heures doivent suffire. Los coupes sont mises dans l'eau, comme nous l'avons indiqué au paragraphe précédent. La gomme se dissout, et l'on peut ensuite monter les coupes après coloration. Si l'on veut entièrement se débarrasser de la gomme dont une partie, quoique hydratée, continue d'imprégner le tissu, il est bon de soumettre les coupes à un courant d'eau continu pendant quelques heures et même plus. Toutefois celte méthode n'esl guère applicable qu'aux tissus résistants par eux-mêmes et dont les éléments ne se peuvent désagréger.

Le procédé par la gomme et l'alcool donne surtout d'excellents résultats après le durcissement par Talcool et l'acide picrique. 11 a l'avantage de n'exiger qu'un temps relativement court, et de trouver ainsi une application directe à l'examen des difl*érentes lumeui's. La succession des opérations est la suivante (Ranvier) : on plonge la pièce pendant un jour dans l'alrool à trente-six degrés, puis le même temps dans une solution saturée d'acide picrique ; ensuite on durcit par la gomme et l'alcool et on coupe à la manière oi'd inaire.

Un mode de durcissement moins expéditif, mais infinement préférable (l'alcool altérant toujours un certain nombre d'éléments) est la macération prolongée dans la liqueur de Mùller. Ce pi*océA> s'applique surtout aux tissus mous et friables tels que la rétine, les muqueuses et sui'toul les embryons. Il convient pour cela de laisseï* macérer les pièces dans la liqueur de MûUer pendant quelques mois el même des années. Au bout de ce temps les éléments anatomiques sont suffisamment fixés pour que i'encoUage n'en modifie presque point l'aspect.

On a également employé la colle forte, la gélatine, etc. On y plonge l'objet, alors que ces substances sont encore chaudes, après quoi on laisse refroidir le tout. On pratique ensuite les coupes. Ou