COLORATION DES MICROBES DANS LES COUPES

NicoLLE (p. 270). Voici la technique pour obtenir une triple coloration (thionine, carmin, Gram) :

Débarrasser de la paraffine à Taide du xylol ;

Enlever le xylol par Talcool absolu ;

Laisser un quart d'heure dans le carmin de Orth alcoolisé par addition de — d'alcool à 95^»;

Laver à Teau ;

Laisser quatre à six secondes dans le violet phéniqué (p. 271) ;

Mettre quatre à six secondes dans la solution forte de Lugol (p. 271) en la renouvelant deux fois;

Décolorer par Talcool-acétone (p. 271) ;

Passer rapidement dans lalcool picrique ;

Déshydrater par l'alcool absolu ;

Eclaircir par le xylol ;

Monter au baume.

S'il y avait dans la coupe un mélange de microbes dont les uns prennent le Gram et les autres se décolorent, on colorerait dans une solution hydro-alcoolique de fuchsine après la décoloration par Talcool-acétone.

Weigert avait modifié la méthode de Gram en décolorant par:

Huile d'aniline i

Xylol 1

Avec son procédé la triple coloration est impossible, l'acide picrique étant très soluble dans l'huile d'aniline. Celle-ci est d'ailleurs altérable et les préparations brunissent à la longue.

C. Coloration des bacilles agidopuilbs. — On recommande en général le procédé de B. Fr.cnkel (p. 284). Je lui préfère la méthode d'HERSiANN (p. 285). On laisse les coupes dix minutes dans le bain colorant chaufTé. Après la décoloration, Hermann conseille Téosine pour teinter le fond ; le chrysoïdine est préférable.

La meilleure méthode est celle de Kûhne (p. 283).

Colorer d'abord les noyaux par un séjour de deux minutes dans l'hématoxyline ou mieux l'hématéine;

294 EXAMEN IIIGROSGOPIQUB DBS MICROBES

Laver à l'eau ;

Séjour de quinze minutes dans le liquide de Ziehl; Faire passer quelques secondes dans Taniline chlorhydrique à 2 p. 1000; Décolorer à Talcool :

Ëclaircir au xylol ; Monter au baume.

Z^ Montage de la préparation. — Les coupes exigent une déshydratation très soignée avant d'être montées dans le baume au xyloL V alcool est le meilleur déshydratant, mais il décolore souvent trop; V huile d* aniline (Weigrrt) ne peut être employée dans tous les cas. Kûhnb recommande de colorer très légèrement Thuile d*aniline avec la matière qui a servi à colorer la coupe, pour éviter une trop grande décoloration. On peut encore employer la dessiccation (Kûhxe). Pour dessécher une coupe, on dépose la lame (face libre en bas) sur une autre lame qu'on chauffera à + 30<> sur une lampe à alcool, jusqu'à ce que la coupe devienne transparente. On attend alors cinq minutes, on éclaircit au xylol et on monte.

E) Résumé pratique Nous conseillons en somme les procédés suivants:

10 Examen d'une culture:

a. A l'état frais. — Solution aqueuse très étendue de violet de gentiane,

b. A Vélat de fixation. — Solution hydro-alcoolique de violet de gentiane, ou mieux : liquide de Ziehl (au violet de préférence). Lavage à l'eau ; quelquefois très rapide décoloration à l'alcool. Le Ziehl occasionne des grumeaux dans les préparations de certaines cultures. Mieux encore : thionine phéniquée.

On fera naturellement des colorations spéciales (Gram, Ehrlich) si on étudie les propriétés d'un microbe. Si la culture était impure, contenant plusieurs microbes à caractères différents, on pourrait obtenir des doubles colorations;