COLORATION DES MICROBES DANS LF:S COUPES
cilles d'un tubercule par exemple). Dans les deux cas nous conseillons le microtome Minot (fig. 180).
Les coupes devraient être reçues dans V alcool absolu, et non dans de l'eau, toutes les fois qu'on veut colorer les microbes avant le fond : mais, avec l'inclusion à la parattine, on est obligé de les recevoir dans l'eau tiède pour leur permettre de s'étaler; le xylol dissout laparailine mais la coupe a beaucoup de peine à s'étaler.
La coupe éUdée est reçue sur une lame. Il est préférable de la coller sur celle-ci par un badigeonnage préalable avec un mélange à parties égales de blanc d'œuf et d'essence de girolle. On déshydrate alors par l'alcool et on traite la lame comme un frottis.
2" Coloration de la coupe. — D'une façon générale, la coloration des coupes s'obtient par les mêmes méthodes que pour les frottis sur lamelles, mais il faut une action plus prolongée des bains colorants ou décolorants. Kn outre, les coupes supportent mal la chaleur.
A. MÉTHODE jiKNKHALK. — Si OU cherchiî à découvrir dans unp coupe des microbes dont on ne connaît pas d'avance les propriétés, on doit se servir d'une méthode pouvant colorer tous les microbes indistinctement. Lorsqu'on sait d'avance quel microbe on recherche, on ne se servira de la méthode générale que pour les microbes ne prenant pas le Gram et ne se colorant pas par UEhrlich.
Il sulHl de laisser séJourn«;r la coupe pendant dix minutes dans une solution hydro-alcoolique (luelconque et de décolorer par l'alcool à 90<^. On peut, secondairement, colorer le fond avec une solution aqueuse de teinte opposée â la première.
a, II est cependant certiiines couleurs (jui sont à conseiller en premier lieu. KiiHXE préconise le bleu de mctht/lènc comme la matière qui colore le mieux l'ensemble des bactéries. Il conseille la technique suivante :
«nèCIS DK BACTKRIOI.OCIE. 2^' édit. V.i
290 EXAMEN MICnOSCOPIQUE DES MICROBES
l*^ Séjour d'une demi-heure dans :
Alcool absolu iO grammes.
Bleu de méthylène 4 gr. 5
Solution phéni(|uée h p. 100 100 •—
2^ Rincer àTeau; ^^ Rincer dans :
Acide chlorhydriquc 10 gouttes.
Eau bouillie 50 grammes.
jusqu'au bleu tendre :
4" Rincer dans :
Sol. aq. concentrée de carbonate de li-
thine 6à8 gouttes.
Eau 10 grammes.
5^ Rincer quelques secondes dans l'eau; 0° Déshydrater légèrement dans l'alcool absolu ; 7*^ Déshydrater complètement par un séjour de quelques minutes dans:
Huile d'aniline pure 10
Bleu de méthylène Une pointe de couteau.
dont on met quelques gouttes dans de l'aniline pure;
8"^ Rincer dans Thuile d'aniline pure ;
9"^ Séjour de deux minutes dans une essence bien fluide (thymène, térébène, etc.) ;
10" Deux séjours successifs dans le xylol pour débarrasser de l'huile d'aniline.
Puis si oc veut une double coloration :
11° Séjour de deux à dix minutes dans le bain :
Huile d'aniline iO grammes.
Safranine Une pointe de couteau.
12° Rincer dans l'huile d'aniline pure; les coupes doivent conserver une teinte rosée ;
13" Deux minutes dans une essence bien fluide;
COLORATION DBS MICROBES pANS LES COUPES 291
14" Deux séjours successifs dans le xylol pour débarrasser de l'huile d'aniline ;
15** Monter au bajime.
6. Une autre méthode consiste à colorer le fond en premier lieu.
Séjour pendant vingt-quatre heures dans le carmin boraciqiie à l alcool de Grenacher :
Carmin N» 40 3
Borax 4
Eau 100
Alcool à 90* 100
ou dans le carmin lithiné de Orth,
Sol. aqueuse saturée de carbonate de lithinc. . . 07.5 Carmin N? 40 il/ô
On lavé rapidement dans la solution :
Alcool 100
Acide i
puis à l'eau, et on colore ensuite les microbes par un des procédés ordinaires.
c. NicuLLE^ recommande la thioninc comme le seul colorant à employer pour les microbes qui ne prennent ni le Gram ni lEhrlich, La thionine (violet de Lauth) est une couleur soufrée appartenant au môme groupe que les bleus de méthylène et de toluidine. Elle ne surcolofe pas. Elle constitue « le réactif colorant le plus énergique et le plus sur », grâce à son atlinité pour les microbes et sa faible solubilité dans l'aclool absolu.
La coupe est débarrassée de la paraillne à l'aide de xylol, puis traitée par l'alcool absolu.
Séjour d'une demi-minute à une minute, dans la solution:
Sol. saturée de thionine dans alcool à 50» . 10 cent, cubes Eau phéniquée à 1 p. 100 100 —
* NicoLLE, Pratique des colorations microbiennes. Annales Pasteur, 1895, p. 964.
202 EXAMKX MH'.ROSCOPIQIK DES MICBDBKS
Lavait* à l'eau;
Désliydratation par alcool absolu;
EolaiiTi>si'imMit au xylol: •
Moiilaiîo au baume.
On «Mnpioirrail Trosiiie pour une seconde coloration.
Fi::. l>l.
l.vMijv' »lo foio *it* ooluye o«»ntonant dts iiiailr» chat-bonneus.
la li^ ne l^l i.'[Tt>rnîo un»- c^-ui"- df foie de cobaye contenant d-^ b\'»'.lt^ * huhonn-'ux Irai: •» par la thionine el IV»»- ^in«
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