I. Culture des anaérobies dans les bouillons

Ces cultures se font dans deux appareils que nous avons décrits au chapitre II; le tube double et le tube simple de Pasteur.

La technique comprend :

1° La préparation du lube;

2° L'ensemencement;

3" L'extraction de l'air, et la substitution éventuelle de C02 ou IL

4" La fermeture du tube ensemencé, vide, ou rempli de CO- ou H. Cette opération ne mérite pas une place à part; elle sera décrite à la suite de la troisième.

1° Prôpurulmn cbi tube. — Nous nous occujions d'abord du tube double. (Pig. 34). Sur un tube double de Pasteur, tel que le repi'ésente la figure 10, chapitre II, stérilisé et bouché à l'ouate, étirez a la flamme du chalumeau à gaz la partie B qui

(1) Nous répétons ici ce que nous avons écrit plus haut en parlant (le la culture des aérobies: tout ce que nous disons de la culture dans les houillons s'appli(|uera, le cas échéant, au lait, à l'urine, etc.

CULTURE DES MICftOBES ANAÉROBIES. 121

surmonte le lampon de ouate; coupez le tube droit eu H au-dessus de cette eflilure, et rodez à la tlamiue l'extrémité coupée en lui donnant la forme représentée ci-contre.

Donnez alors sur la tlumme de la lampe à alcool à c 11 a c u n des petits tubes latéraux la direction DEF, l>'E'F' (la direction première DEG, D'E'G' est inarquée en pointillé sur la ligure), et étirez iilatlammeassez finement l'extrémité F, F'.

Ainsi préparé, le liiiie douille lirend la forme ci-contre.

La firépara-"" tion d'un tube simple est exactement la même, etcetnbe(fiy. Il) firend alors la ligure représentée dans la figure 3ii à la [)age suivante.

Fig. .14. — Tiilii- douille (le l'asleiir ptirn pour rensemonecmoiil.

\<yv.-

TECHNIQUE DES CULTURES

2° Ensemencement. — Portez la semence, quelle qu'elle soit, quelle que soit sa provenance, dans le bouillon stérile d'un matras ^ Pasteur.

Coupez alors l'extrémité effilée F d'un des petits tubes latéraux, flambez sa surface extérieure, et laissez refroidir.

Introduisez l'eflilure F dans le matras, et aspirez par l'extrémité H le bouillon ensemencé dans la branche I du \ tube. Retirez l'effilure quand

vous jugez la quantité de liquide suffisante dans la branche I, soufflez par M de façon à expulser le liquide qui reste dans F, et flambez fortement la surface de cette effilure.

Fermez alors Textrémilc de F sur la lampe à alcool.

Emplissez par une manœuvre identique la branche J par l'effilure F' d'un bouillon non ensemencé qui servira de témoin^ ou (jui pourra plus tard à son tour être ensemencé par une goutte de la culture contenue en I.

L'ensemencement d'un tube simple se fait par les moines procédés : ce que nous avons ''S- '■^■>- dit de l'ensemencement de la

liranche I du tube double s'apà rensemenceineut du lube simple.

3° Extraction de l'air, et substitution ércntueltc de CO- ou H. — Le tube double ou simple étant ense-

plique

CULTlîllE DES MICROBES ANAÉROBIES. 123

mencé, il faut y faire les opérations de vide simple, ou de vide suivi de substitution d'un gaz inerte. Ces opérations se résument do la façon suivante :

1. Culture dans le vide à l'aide de la macliine [)neumatique à mercure;

2. Culture dans CO- ou H avec la machine pneumatique à mercure ;